1. Silencer® Select siRNA は、化学修飾された siRNA ですか ? そうであれば、どのような修飾が加えられていますか?
はい、化学修飾された siRNA です。修飾の詳細は非公開ですが、この修飾は性能を損なうことなく全体的なオフ ターゲット効果を最高 90 % 削減します。 この修飾はまたより良好なノックダウンと相関している鎖バイアスを強調させます。 そのうえ、弊社はこの修飾が細胞ベース アッセイにおいて、非修飾 siRNA と比較してより整合の取れた表現型を生成することを証明しています。


2. どのようにしてサイレンシング効果を 100 % 保証するのですか?
ライフテクノロジーズは、お客様が同じターゲットに 2 種類の Silencer Select Pre-designed siRNA を使用した場合、この 2 種類の siRNA がターゲット mRNA を 70 % 以上抑制することを保証します。 保証については、siRNAは5 nM以上の濃度で導入して頂くことが必須で、導入後48時間のmRNAレベルでの抑制が保証対象となります。 リアルタイム RT-PCR による検証をお奨めしますが、他アプリケーションによる検証でも構いません。 さらに、ポジティブコントロールsiRNAによるノックダウンが80%を超えることをご提示頂き、トランスフェクションに問題がないことを確認させて頂きます。 適切なポジティブコントロールを用いて十分な抑制が得られたにも関わらず、保証対象レベルのノックダウンが得られなかった場合、一回に限り、2種類まで、新たにデザインされたSilencer Select siRNAを無料でご提供いたします。 この保証は、お取替えした製品には適用されません。 上記の

製品お取替えは、Life Technologies社が負う唯一の義務であり、上記保証に関する、ユーザーの唯一かつ排他的な救済措置であるとします。 製品のお取替えに関しては、テクニカルサービスまでお問い合わせください。 トランスフェクション効率およびmRNAノックダウン測定値を示すデータをお手元にご用意ください。 製品のお取替えが必要な場合には、テクニカルサポートまでご連絡ください。

3. 現在も Silencer siRNA は販売されていますか? 発注することはできますか?
Silencer siRNA は現在も、同じ保証内容と価格で販売しています。


4. 目的のターゲット遺伝子用の Silencer Select siRNA がない場合はどうすれば良いですか?
お客様のターゲット遺伝子に対するsiRNA がデザインされていなくても、Silencer Select Pre-designed siRNA のデザインアルゴリズムを使用し、 Silencer Select siRNA をカスタムデザインすることができます。 カスタムデザイン siRNA にも、 Silencer Select siRNA と同じ修飾が加えられています（カスタムデザインの Silencer Select siRNA にも、お客様の発注書には「Silencer Select Pre-designed siRNAs, Non-inventoried」と表記されることにご注意ください）。 カスタムデザイン Silencer セレクト siRNA のご用命は弊社テクニカルサポート部へご連絡ください。


5. Silencer Select Positive Control の配列は、従来品と異なりますか?
Silencer Select GAPDH Positive Control siRNA の配列は、変わっていません。AM4624Silencer GAPDH siRNA と同じですが、Silencer Select の修飾が加えられています。


6. Positive control siRNAに修飾なされると性能が良くなるのでしょうか?
ライフテクノロジーズの検証実験では、Silencer Select GAPDH Positive Control siRNA と Silencer GAPDH siRNA の性能はほぼ同等でした。


7. Silencer Select Negative Control の配列は、従来品と異なりますか?
Silencer Select Negative Controls #1 および #2 は、より厳しい特異性フィルタでデザインし直されているため、従来品とまったく異なる配列になっています。 さらに、これらはアレイ検証済みで、マルチパラメーターセルベースアッセイにて試験済みであり、遺伝子発現または細胞表現型への影響が最小限であることが実証されています。


8. Silencer siRNAs に比べ Silencer Select siRNA はどのような点が改良されているのですか?
Silencer Select siRNA の配列は、新しいアルゴリズムを使用して作成しています。 このアルゴリズムは、サポート ベクター マシン (SVM) アプローチを使用して Ambion のバイオインフォーマティック グループが生成したものです。 SVMアプローチは線形回帰分析というよりはむしろ分類法をとり、「超高性能」対「容認可能」なsiRNA を区別する能力があります。 バイオインフォマティックス・フィルターを用いてsiRNAの特異性をためています。このフィルターでは、予期せぬターゲット配列（毒性を誘導する可能性のある配列、miRNAのシード領域の配列や抗ウイルス応答モチーフとなる配列）との特異性が十分でないものは、排除されています。 また、siRNA は標的外転写産物の 3'UTR に対する siRNA シード領域の一致の頻度によってランク分けされます。

さらに Silencer siRNA に比べ、Silencer Select はターゲット mRNA を 80 % 以上抑制します（従来に比べ約 28 % 改善）。

Silencer Select siRNA には、特異性を高めるための修飾が加えられていることも重要です。 弊社は、修飾によってオフターゲット効果を最大 90% まで減少させることを実証しており、遺伝子抑制実験から表現型データまで、一貫して信頼のおけるを導き出します。


9. Silencer Select の性能は、他社と比較してどの程度ですか?
Silencer Select siRNA は、業界トップクラスの性能と有効性を誇ります。また発現解析と細胞ベースの表現型解析によって評価したオフターゲット効果も、他社を下回っています。


10. 推奨するトランスフェクション量はどの程度ですか?
Silencer Select siRNA と非修飾 siRNA では、細胞へのトランスフェクション効率に違いは見られません。 ただし、Silencer Select siRNA は他の siRNA に比べ 5 〜 100 倍の性能を発揮するため、Silencer siRNA の約 5 〜 10 分の一のトランスフェクション量（使用する細胞のタイプによって異なります）を推奨します。 たとえば、ほとんどのお客様は Silencer siRNAsを HeLa 細胞内で ～ 30 nM 程度使用されています。 Silencer Select siRNA は、HeLa 細胞に対し 3 〜 5 nM でノックダウン性能を損なうことなく十分使用できます。


11. Silencer Select Pre-designed & Validated siRNA の配列は、現在もすべて購入時に開示されるのですか?
はい、ただし修飾部位とその詳細は開示していません。


12. Silencer Select siRNA は、どのように設計されているのですか? 単一の転写産物( 1種類の RefSeq アクセション番号の転写産物）に対してデザインしているのですか？
Silencer Select siRNA は、ターゲット遺伝子ついて登録されているすべての転写産物が、出来るだけ共通に抑制されるようにデザインされています。 Ambion は、トランスクリプトームの情報源として RefSeq データベース（NCBI）を使用しています。


本製品は研究用にのみ使用できます。 診断用には使用できません。