이중 형광 및 brightfield 세포 카운팅

Invitrogen Countess 3 FL 자동 세포 카운터는 14가지의 스펙트럼 확장 옵션 중에서 선택한 두 개의 형광 라이트 큐브와 함께 제공하며 쉽게 교체할 수 있습니다. Countess 3 FL 기기는 brightfield 뿐만 아니라 형광 모드에서 세포 수를 카운팅하고 viability를 측정할 수 있으며, 형광 시약을 사용해 30초 내에 형광 단백질 발현, apoptosis, transfection 효율 및 세포 viability를 분석할 수 있습니다. 개발 과정에서 인공 지능을 활용하여 딥-러닝 신경 네트워크 알고리즘을 적용함으로써 가장 까다로운 세포 샘플 유형에서도 매우 정확한 세포 카운팅을 가능하게 합니다.

 

또한 형광 세포 카운팅은 형광 세포 염색 또는 형광 태그가 붙은 세포를 사용하여 복잡한 샘플에서 더 높은 특이도를 제공하는 형광 기반 세포 분석의 사용을 가능하게 합니다.


Countess 3 FL 자동 세포 카운터 특징

Countess 3 FL 기기는 Countess 3 모델과 공통된 특징을 공유합니다.  즉, 정확하고, 정밀하며, 빠르고 간편하면서 자동화된 기능을 제공합니다. 또한 다양한 세포주에서 viability 측정 및 단일 세포 데이터를 제공합니다. 이 기기는 재사용  슬라이드와 호환되고, 전자 기록에 대한 21 CFR Part 11 준수를 지원하기 위한 소프트웨어 옵션이 있습니다. 또한, 형광 기능이 추가적인 옵션과 어플리케이션을 열어 줍니다.

형광 어플리케이션

고급 viability, apoptosis, transfection 효율, 형광 단백질 발현 등.

교체 가능한 LED 라이트 큐브

GFP 및 RFP 외의 형광 단백질 및 염료를 선택해 확장해보세요.

최적화된 Ready Count 시약

Countess 3 FL 세포 카운터를 위해 설계되었습니다.


형광 카운팅 어플리케이션

세포 카운팅 외에도 Countess 3 FL 기기의 형광 기능을 사용하여 세포 viability, apoptosis, transfection 효율, 형광 단백질 발현을 평가하는 경우가 많습니다. 하지만 이러한 어플리케이션은 자가형광물질 또는 형광 염료를 사용하여 라벨링할 수 있는 모든 세포가 매개변수로 작용할 수 있습니다. 샘플 데이터에서 세포 배양 품질 관리, CAR-T 세포 스크리닝, CRISPR-Cas9 편집 효율, 기타 형광 어플리케이션에 대한 데이터를 찾을 수 있습니다.

 

세포 viability. 세포 viability 평가는 매일의 세포 배양에서 중요한 단계이며 정확하고 효율적인 후속 공정에 필수적입니다. Countess 3 FL 형광 옵션은 다운스트림 샘플 분석에 앞서 빠르고 쉽게 수행할 수 있는 감도 높고 특이적인 viability 확인을 제공합니다.

 

트리판 블루는 brightfield 세포 카운팅에서 viability 측정에 널리 사용되지만, 특정 경우에 세포 형태를 변화시킬 수 있습니다. 예를 들어, 사멸된 mouse PBMC를 트리판 블루로 염색하면 살아 있는 세포와는 달리 팽창될 수 있으며 다른 초점면으로 가라앉아 정확한 검출과 카운팅이 어려울 수 있습니다. 형광 대체제인 Invitrogen ReadyCount Green/Red Viability Stain은 최적화된 조합의 acridine orange와 propidium iodide (AO/PI)을 포함합니다. 형광 염색은 세포 형태를 변형하지 않고도 혼합 세포 집단에서 생존/사멸 상태에 대한 높은 감도와 특이도를 제공합니다.

형광을 이용한 Viability 측정

Murine PBMC는 ReadyCount Green/Red Viability Stain로 염색되었으며 Countess 3 FL 자동 세포 카운터를 사용하여 카운팅되었습니다. 형광 모드에서, 이 시약의 최적화된 AO/PI 혼합물이 우수한 생존/사멸 특이도를 나타냅니다. 사멸 세포(38%)는 PI에 의해 빨간색으로 염색되고 Texas Red 2.0 라이트 큐브로 검출되며, 핵이 있는 모든 세포(99%)는 AO 염료를 사용하여 녹색 형광을 나타내고 GFP 2.0 라이트 큐브로 검출됩니다.

Apoptosis 검출

Apoptosis을 유도하기 위해 4µm staurosporine과 함께 U2OS(human osteosarcoma epithelial) 세포를 배양하고 CellEvent Caspase 3/7 Green Detection Reagent 및 SYTOX Deep Red Nucleic Acid Stain으로 라벨링하였으며, GFP 2.0 및 Cy5 2.0 라이트 큐브가 탑재된 Countess 3 FL 세포 카운터에서 카운팅하였습니다. 분석을 통해 apoptotic(녹색, 83%), 사멸(빨간색, 32%) 및 "죽어가는"(청록색, 16%) 세포를 구별하였습니다. 퍼센트의 합계가 100%를 초과하는 것은 세포의 16%가 두 가지 염색 모두를 나타내어 세 개 카테고리 모두에서 카운팅 되었기 때문입니다.

Apoptosis 검출. 형광 염색은 플라즈마 멤브레인 변형(Annexin V), 미토콘드리아 변화(JC-1) 또는 카스파제 활성화(Caspase 3/7)와 같은 apoptosis의 여러 측면과 단계를 표적화 할 수 있습니다. Countess 3 FL에서 이 중 하나를 viability 염색과 함께 사용하면 live 및 dead 세포뿐만 아니라 apoptotic 세포를 식별할 수 있습니다.

Transfection 효율. 개체 집단에서 성공적으로 transfection 또는 transduction된 세포의 비율을 측정하는 것은 연구에서 매우 중요합니다. 일반적으로, transfection 또는 transduction은 GFP와 같은 형광 단백질 리포터와 쌍을 이룹니다. 선택한 라이트 큐브를 장착한 Countess 3 FL 자동 세포 카운터는 transfection 효율 데이터를 쉽게 얻을 수 있는 빠르고 간단한 방법을 제공합니다.

Transfection 효율

Jurkat 세포는 GFP 발현 벡터를 사용하여 transfection 되었습니다. (왼쪽) EVOS M5000 이미징 시스템에서 캡처한 이 이미지에서 vessel에 부착된 세포를 볼 수 있습니다. (오른쪽) 세포는 트립신 처리되고 EVOS GFP 라이트 큐브가 장착된 Countess 3 FL 세포 카운터에서 카운팅되었습니다. 분석 결과는 세포의 50%가 성공적으로 transfection 된 것을 보여줍니다.

“hemocytometer를 사용하는 것과 비교하여 Countess II는 항상 매우 정밀한 결과를 얻었습니다. 형광 측정은 당사 실험에서 transfection 및 transduction 효율성(%)을 정량하는 데 매우 유용합니다. 검출에 두 개 이상의 형광 소스를 사용하는 경우, 형광 검출에 사용되는 라이트 큐브를 쉽게 전환할 수 있습니다. 자동 초점 조정 기능은 매우 효과적이고 정확하며, 수동으로 초점을 맞출 수 있는 옵션도 있습니다."

David Waynar,

Santa Cruz Biotechnology


EVOS LED 라이트 큐브

Countess 3 FL 자동 세포 카운터의 형광 기능을 사용하여 형광 단백질을 쉽게 시각화하고 세포 배양실에서 apoptosis 또는 proliferation 검사를 수행할 수 있습니다. 

 

Countess 3 FL 기기에는 두 개의 선택적 형광 채널이 있습니다. 이 채널은 개별 라이트 큐브의 삽입을 통해 결정된 형광 색을 검출합니다. 14가지의 서로 교환할 수 있는 라이트 큐브 덕분에 Countess 3 FL 기기는 GFP 및 RFP를 발현하는 세포의 검출에 국한되지 않습니다. 

 

Countess 3 FL에서 이러한 형광 어플리케이션을 지원하는 Invitrogen EVOS LED 라이트 큐브는 50,000시간 이상의 밝은(조정 가능) 빛을 제공하며 시간 경과에 따른 성능 저하를 최소화하면서 일정한 상태를 유지합니다. 비용 효율적이고 환경 친화적이며 스펙트럼이 최적화된 EVOS LED 라이트 큐브는 정밀한 제어, 최소한의 유지관리 및 뛰어난 신뢰성을 구현하도록 설계되었습니다.

 

각 큐브에는 LED, 발광 광학장치 및 필터가 있습니다. 라이트 큐브는 사용자가 교체할 수 있으며 편리한 플러그 앤 플레이 방식으로 Countess 3 FL 시스템에서 자동으로 감지됩니다.

도움말: 사용하는 염료(dye)와 형광 단백질에 따라 사용자가 지정할 수 있도록 라이트 큐브는 Countess 3 FL 세포 카운터에 포함되어 있지 않습니다. 

 

사용할 염료(dye) 및 카운팅 어플리케이션에 맞는 스펙트럼을 가진 라이트 큐브를 선택하세요. 라이트 큐브는 교환 및 제거가 용이하고 새로운 어플리케이션의 요구 사항을 충족하기 위해 언제든지 구입할 수 있습니다. 다양한 종류의 염료(dye)를 지원합니다.

 

많은 연구자들이 형광 단백질 검출에 사용하는 GFP 및 RFP 외에도, 14가지의 다양한 EVOS LED 라이트 큐브 중에서 선택할 수 있습니다. DAPI는 일반적으로 사용되는 핵 염료(dye)입니다. 표는 일곱 가지의 인기있는 라이트 큐브로 검출할 수 있는 일반적인 염료(dye)를 나타냅니다.

 

개체 집단에서 세포의 apoptosis 및 viability 모두를 측정하는 데 관심이 있다고 가정해 봅시다.  EVOS GFP 2.0 light cube와 함께 CellEvent Caspase-3/7 Green Detection Reagent와 같은 카스파제 활성을 측정하는 apoptosis 인디케이터를 사용할 수 있습니다. 또한  EVOS Cy5 2.0 라이트 큐브와 함께  SYTOX Red Dead Cell Stain과 같은 viability 염료(dye)를 사용하여 apoptosis를 거쳐 진행된 사멸 세포를 측정할 수 있습니다. 두 개의 EVOS 라이트 큐브와 함께 이 염색 조합은 apoptosis 및 viability 데이터를 얻기 위한 빠르고 간단한 복합 분석 방법을 제공합니다.

일곱 가지 인기있는 라이트 큐브 및 호환성이 있는 일반적인 염료(dye)

카탈로그 번호 

라이트 큐브 

Excitation(nm) 

Emission(nm) 

호환되는 일반 염료/형광 단백질 

AMEP4950 DAPI 2.0  357/44  447/60  DAPI, Hoechst, NucBlue, Alexa Fluor 350, BFP 
AMEP4951 GFP 2.0  470/22  525/50  GFP, Alexa Fluor 488, SYBR Green, FITC, Calcein, Fluo-4, MitoTracker Green, pHrodo Green 
AMEP4954 YFP 2.0 500/24  542/27  EYFP, acridine orange (+DNA) 
AMEP4952  RFP 2.0  531/40  593/40  RFP, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 555, Cy3, PE, dTomato, MitoTracker Orange, Rhodamine Red, SYTOX Orange 
AMEP4955  Texas Red 2.0  585/29  628/32  Texas Red, Alex Fluor 568, Alexa Fluor 594, MitoTracker CMXRos, mCherry, pHrodo Red, Cy3.5, CellTracker Red CMTPX 
AMEP4956 Cy5 2.0  628/40  692/40  Cy5, Alexa Fluor 647, Alexa Fluor660, DRAQ5 
AMEP4667  Cy7  710/40  809/81  Cy7, IRDye™ 800CW, DyLight 750 

최적화된 ReadyCount 시약

형광 염색은 세포, 특히 이질적인(heterogeneous) 샘플에서도 세포에 대한 풍부한 데이터를 제공할 수 있지만, 상업적인 염색제는 최적화된 성능을 위해 혼합, 적정 및 적용하기가 어려울 수 있습니다. Invitrogen ReadyCount 시약은 Countess 3 FL 자동 세포 카운터와 함께 사용하도록 사전-최적화된 안정성을 갖춘 형광 염색 시약입니다. 

 

ReadyCount 시약을 혼합된 군집에서 핵이 있는 세포만을 특이적으로 염색하는데 사용할 수 있으며, 적절한 EVOS 라이트 큐브와 같이 사용하여 복잡성을 줄이고 카운팅 간, 샘플 간의 재현성을 개선할 수 있습니다. 10 µL의 세포 시료를 10 µL의 염료와 하께 간단히 혼합하고, 용액을 Countess 챔버 또는 재사용 슬라이드에 피펫팅한 후 슬라이드를 기기에 삽입합니다.

ReadyCount Red 사멸 세포 염색

Heat-killed Jurkat 세포를 ReadyCount Red Dead Cell Stain으로 염색하고 Texas Red 라이트 큐브로 이미징하여 사멸 세포 검출을 확인했습니다.

이 시약은 사멸 세포를 염색하고 EVOS RFP 2.0 또는 Texas Red 2.0 라이트 큐브를 사용하여 검출할 수 있습니다.

ReadyCount Blue 핵 염색

살아있는 Jurkat 세포를 ReadyCount Blue Nuclear Stain으로 염색하고 DAPI 라이트 큐브로 이미징하여 살아있는 세포 검출을 확인했습니다.

이 시약은 핵산을 염색하며 EVOS DAPI 2.0 라이트 큐브로 검출할 수 있습니다.

ReadyCount Green/Red Cell Viability Stain은 최적화된 AO/PI 혼합물로서 핵이 있는 세포를 녹색으로, 사멸 세포를 적색으로 염색하며, 형광을 나타내어 EVOS GFP 및 RFP 또는 Texas Red 라이트 큐브를 사용하여 카운팅할 수 있습니다. 세포는 (왼쪽) 1.0x 확대 및 (오른쪽) 4.0x 배율로 표시됩니다.

예를 들어, ReadyCount Green/Red Cell Viability Stain은 핵이 있는 세포와 viability를 나타내는데 각각 쓰이는 표준 염색 시약인 acridine orange와 propidium iodide (AO/PI)를 최적으로 혼합한 시약입니다. 트리판 블루를 사용하여 카운팅하기 어려운 PBMC(peripheral blood mononuclear cell) 샘플도 AO/PI 염색을 통해 적혈구(RBC), 혈소판 및 잔해물을 감별할 수 있습니다.

주문 정보

ReadyCount Green/Red Viability Stain에 대한 설명은 위의 형광 카운팅 어플리케이션을 참조하십시오.


동영상 및 데모


세포 카운터 사양

 

Technical specifications Processing time: <30 seconds
Sample concentration range: 1 x 10⁴–1 x 10⁷ cells/mL
Particle diameter range: ~4–60 µm
Cell diameter range: ~4–60 µm
Required sample volume: 10 μL
USB drive: 32 GB (FAT32-, exFAT-, or NTSF-compatible)
Optics: 5 megapixel camera, 2.5X optical magnification
Physical characteristics Instrument dimensions:
9" (W) x 5½" (D) x 9" (H); 228.6 mm (W) X 139.7 mm (D) x 228.6 mm (H)
Weight: 8 lbs; 17.6 kg
Counting area

Area: 2.26 mm x 1.69 mm (3.82 mm²)

Graphic image depicting the area of a typical standard hemocytometer and the area counted by the Countess 3 Cell counter which is significantly larger

Included with instrument USB drive for storing and transferring data to your computer
Countess Disposable Slide Holder
Countess Reusable Slide Holder
Countess Cell Counting Chamber Slides (Qty 50)
Power cord and 4 plug adaptors to accommodate most countries
Quick reference card (QRC)
Sold separately Countess Reusable Slide
High-Power USB Wi-Fi Module (dongle)
Countess Cell Counting Chamber Slides
Trypan Blue Stain
Countess SAE Software Solution
Countess 3 Cell Counting Standard Slide

Ordering information

* Extended waranty included without additional cost

다음 항목 중 하나를 선택하면 맞춤형 견적이 제공됩니다.
  • Countess 3 FL Automated Cell Counter
  • Countess 3 FL Reusable Slide
  • Countess Cell Counting Chamber Slides (Qty 50)
  • Countess Cell Counting Chamber Slides (Qty 500)
  • Invitrogen Trypan Blue Stain (0.4%)
  • EVOS Light Cube, GFP 2.0
  • EVOS Light Cube, RFP 2.0
  • EVOS Light Cube, DAPI 2.0
  • ReadyCount Green/Red Viability Stain
  • 3 years Rapid Exchange Extended Warranty

연구용으로만 사용하십시오. 진단용으로는 사용할 수 없습니다.