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세포 및 신경세포 트레이싱(tracing)
세포 트레이서(tracer)는 모세관 흐름을 추적하고 신경세포 연결 및 이동을 규명하여 단일 세포, 전체 세포 집단 또는 온전한(intact) 생물체 내에서 움직임과 국소화를 모니터링할 수 있는 무독성 프로브입니다. 이러한 형광 트레이서는 이온삼투요법, 미세주입 또는 포액작용(pinocytosis)을 통해 도입할 수 있습니다. 또한 이동은 역행, 전행으로 또는 양방향으로 가능합니다. 이러한 형광 프로브는 대부분 새로운 조직 섹션 및 배양 세포를 포함한 실험에서 효과적이지만, 고정 조직 및 in vivo 이미징을 위해서는 특별한 요구 사항이 있습니다.
이 페이지의 내용:
관련 내용:
세포 트레이서(tracer)의 특징
| Cholera toxin subunit B | DiI 및 유도체 | Hydrazides 및 Biocytins | |
|---|---|---|---|
| 판독 | ganglioside GM1에 선택적인 세포의 직접 형광 이미징 | 원형질 막 내 측면 확산을 통해 신경세포를 균일하게 라벨링하고 세포막을 라벨링함 | 세포의 직접 형광 이미징 |
| 조직 섹션 | 예 | 예 | 예 |
| in vivo 신경세포 | 아니오 | 예 | 예 |
| 고정화된 조직 섹션 | 아니오 | 예 | 아니오 |
| 배양 세포 | 예 | 예 | 예 |
| 세포 로딩(Cell loading) | 미세주입, 이온삼투요법 | 미세주입 또는 이온삼투요법, 조직 섹션을 위해 크리스털 및 페이스트 배치 옵션 사용 가능 | 미세주입 또는 포액작용 |
| 염색 모드 | 외인성 | 외인성 | 내인성 |
| 최적 용도 | 세포 집단 | 세포 집단 | 단일 세포 |
| 고정가능 | 예 | 아니오 | 예 |
| 이동 | 역행 | 양방향 | 양방향 |
| 광표백 저항성 |  |  | |
| 간극 연접(gap junction) 이동 | 아니오 | 아니오 | 예 |
세포 트레이서(tracer) 선택 가이드
이 콘주게이트는 조직 섹션 및 배양 세포에 유용합니다. 고정가능하며 광안정적인 역행 트레이서이며, 미세주입 또는 이온삼투요법을 통해 도입됩니다.
| Carrier | Standard filter set(s) | Fluorophore | Ex/Em (nm) | Quantity | Cat. No. | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Cholera toxin subunit B | ||||||
| Cholera Toxin Subunit B, Alexa Fluor 488 Conjugate | Cholera toxin subunit B (Recombinant) | FITC | Alexa Fluor 488 | 495/519 | 100 µg | C34775 |
| Cholera Toxin Subunit B, Alexa Fluor 555 Conjugate | TRITC | Alexa Fluor 555 | 555/565 | 100 µg | C34776 | |
| Cholera Toxin Subunit B, Alexa Fluor 594 Conjugate | Texas Red | Alexa Fluor 594 | 590/617 | 100 µg | C34777 | |
| Cholera Toxin Subunit B, Alexa Fluor 647 Conjugate | Cy5 | Alexa Fluor 647 | 650/668 | 100 µg | C34778 | |
| Cholera Toxin Subunit B, Biotin-XX Conjugate | NA | Biotin-XX | NA | 100 µg | C34779 | |
| Cholera Toxin Subunit B, Horseradish Peroxidase Conjugate | NA | Horseradish peroxidase | NA | 100 µg | C34780 | |
| Lipid raft kits | ||||||
| Vybrant Alexa Fluor 488 Lipid Raft Labeling Kit | Cholera toxin subunit B (Recombinant) and anti-cholera toxin subunit B antibody (anti-CT-B) | FITC | Alexa Fluor 488 | 495/519 | 1 kit | V34403 |
| Vybrant Alexa Fluor 555 Lipid Raft Labeling Kit | TRITC | Alexa Fluor 555 | 555/565 | 1 kit | V34404 | |
| Vybrant Alexa Fluor 594 Lipid Raft Labeling Kit | Texas Red | Alexa Fluor 594 | 590/617 | 1 kit | V34405 | |
친유성 트레이서라고도 하는 이 세포 트레이서는 조직 섹션, in vivo 신경세포, 고정 조직 섹션 및 배양된 세포에 유용합니다. 이들은 장기간 연구에 사용되는 전행 및 역행 트레이서입니다.
| Standard filter set (s) | Ex/Em (nm) | Format | Fixable | Quantity | Cat. No. | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| DiI and derivatives | ||||||
| DiI Stain – DiIC18(3) | Rhodamine | 549/565 | solid | 아니오 | 100 mg | D282 |
| DiI Stain – DiIC18(3), crystalline | crystal | 25 mg | D3911 | |||
| DiD – DiIC18(5) | Cy5 | 644/663 | solid | 10 mg | D7757 | |
| DiR – DiIC18(7) | Cy5.5 | 750/780 | solid | 10 mg | D12731 | |
| CellTracker DiI | ||||||
| CellTracker CM-DiI Dye, solution | Rhodamine | 549/565 | solution | 예 | 20 x 50 µg | C7000 |
| CellTracker CM-DiI Dye | solid | 1 mg | C7001 | |||
| Neurotrace DiI | ||||||
| NeuroTrace DiI Tissue-Labeling Paste | Rhodamine | 549/565 | paste | 아니오 | 500 mg | N22880 |
| NeuroTrace CM-DiI Tissue-Labeling Paste | paste | 예 | 100 mg | N22883 | ||
| Vybrant DiI and derivatives | ||||||
| Vybrant DiO Cell-Labeling Solution | GFP | 484/501 | solution | 아니오 | 1 mL | V22886 |
| Vybrant DiI Cell-Labeling Solution | Rhodamine | 549/565 | solution | 아니오 | 1 mL | V22885 |
| Vybrant CM-DiI Cell-Labeling Solution | solution | 예 | 1 mL | V22888 | ||
| Vybrant DiD Cell-Labeling Solution | Cy5 | 644/663 | solution | 아니오 | 1 mL | V22887 |
| Vybrant Multicolor Cell-Labeling Kit | — | 다양 | solution | 아니오 | 각각 1 mL | V22889 |
극성 트레이서라고도 하는 이 세포 트레이서는 조직 섹션, in vivo 신경세포 및 배양된 세포에 유용합니다. 신경세포 연장(neuronal projection)을 추적하고 간극 연접(gap junction)을 조사하는 데 사용되는 전행 및 역행 트레이서입니다.
| Carrier | Standard filter set(s) | Fluorophore | Ex/Em (nm) | Quantity | Cat. No. | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Hydrazides | ||||||
| Alexa Fluor 350 Hydrazide | Hydrazide, sodium salt | DAPI | Alexa Fluor 350 | 346/442 | 5 mg | A10439 |
| Alexa Fluor 488 Hydrazide | FITC | Alexa Fluor 488 | 495/519 | A10436 | ||
| Alexa Fluor 568 Hydrazide | Rhodamine | Alexa Fluor 568 | 578/603 | A10437 | ||
| Alexa Fluor 594 Hydrazide | Texas Red | Alexa Fluor 594 | 590/617 | A10438 | ||
| Alexa Fluor 555 Hydrazide | Hydrazide, Tris(triethylammonium) salt | TRITC | Alexa Fluor 555 | 555/565 | 1 mg | A20501MP |
| Alexa Fluor 633 Hydrazide | Texas Red | Alexa Fluor 633 | 632/647 | A30634 | ||
| Alexa Fluor 647 Hydrazide | Cy5 | Alexa Fluor 647 | 650/668 | A20502 | ||
| Biocytin | ||||||
| Alexa Fluor 488 Biocytin | Biocytin, sodium salt | FITC | Alexa Fluor 488 | 495/519 | 250 mg | A12924 |
| Alexa Fluor 594 Biocytin | Texas Red | Alexa Fluor 594 | 590/617 | A12922 | ||
이 콘주게이트는 조직 섹션 및 배양 세포에 유용합니다. 고정가능하며 광안정적인 역행 트레이서이며, 미세주입 또는 이온삼투요법을 통해 도입됩니다.
| Carrier | Standard filter set(s) | Fluorophore | Ex/Em (nm) | Quantity | Cat. No. | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Cholera toxin subunit B | ||||||
| Cholera Toxin Subunit B, Alexa Fluor 488 Conjugate | Cholera toxin subunit B (Recombinant) | FITC | Alexa Fluor 488 | 495/519 | 100 µg | C34775 |
| Cholera Toxin Subunit B, Alexa Fluor 555 Conjugate | TRITC | Alexa Fluor 555 | 555/565 | 100 µg | C34776 | |
| Cholera Toxin Subunit B, Alexa Fluor 594 Conjugate | Texas Red | Alexa Fluor 594 | 590/617 | 100 µg | C34777 | |
| Cholera Toxin Subunit B, Alexa Fluor 647 Conjugate | Cy5 | Alexa Fluor 647 | 650/668 | 100 µg | C34778 | |
| Cholera Toxin Subunit B, Biotin-XX Conjugate | NA | Biotin-XX | NA | 100 µg | C34779 | |
| Cholera Toxin Subunit B, Horseradish Peroxidase Conjugate | NA | Horseradish peroxidase | NA | 100 µg | C34780 | |
| Lipid raft kits | ||||||
| Vybrant Alexa Fluor 488 Lipid Raft Labeling Kit | Cholera toxin subunit B (Recombinant) and anti-cholera toxin subunit B antibody (anti-CT-B) | FITC | Alexa Fluor 488 | 495/519 | 1 kit | V34403 |
| Vybrant Alexa Fluor 555 Lipid Raft Labeling Kit | TRITC | Alexa Fluor 555 | 555/565 | 1 kit | V34404 | |
| Vybrant Alexa Fluor 594 Lipid Raft Labeling Kit | Texas Red | Alexa Fluor 594 | 590/617 | 1 kit | V34405 | |
친유성 트레이서라고도 하는 이 세포 트레이서는 조직 섹션, in vivo 신경세포, 고정 조직 섹션 및 배양된 세포에 유용합니다. 이들은 장기간 연구에 사용되는 전행 및 역행 트레이서입니다.
| Standard filter set (s) | Ex/Em (nm) | Format | Fixable | Quantity | Cat. No. | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| DiI and derivatives | ||||||
| DiI Stain – DiIC18(3) | Rhodamine | 549/565 | solid | 아니오 | 100 mg | D282 |
| DiI Stain – DiIC18(3), crystalline | crystal | 25 mg | D3911 | |||
| DiD – DiIC18(5) | Cy5 | 644/663 | solid | 10 mg | D7757 | |
| DiR – DiIC18(7) | Cy5.5 | 750/780 | solid | 10 mg | D12731 | |
| CellTracker DiI | ||||||
| CellTracker CM-DiI Dye, solution | Rhodamine | 549/565 | solution | 예 | 20 x 50 µg | C7000 |
| CellTracker CM-DiI Dye | solid | 1 mg | C7001 | |||
| Neurotrace DiI | ||||||
| NeuroTrace DiI Tissue-Labeling Paste | Rhodamine | 549/565 | paste | 아니오 | 500 mg | N22880 |
| NeuroTrace CM-DiI Tissue-Labeling Paste | paste | 예 | 100 mg | N22883 | ||
| Vybrant DiI and derivatives | ||||||
| Vybrant DiO Cell-Labeling Solution | GFP | 484/501 | solution | 아니오 | 1 mL | V22886 |
| Vybrant DiI Cell-Labeling Solution | Rhodamine | 549/565 | solution | 아니오 | 1 mL | V22885 |
| Vybrant CM-DiI Cell-Labeling Solution | solution | 예 | 1 mL | V22888 | ||
| Vybrant DiD Cell-Labeling Solution | Cy5 | 644/663 | solution | 아니오 | 1 mL | V22887 |
| Vybrant Multicolor Cell-Labeling Kit | — | 다양 | solution | 아니오 | 각각 1 mL | V22889 |
극성 트레이서라고도 하는 이 세포 트레이서는 조직 섹션, in vivo 신경세포 및 배양된 세포에 유용합니다. 신경세포 연장(neuronal projection)을 추적하고 간극 연접(gap junction)을 조사하는 데 사용되는 전행 및 역행 트레이서입니다.
| Carrier | Standard filter set(s) | Fluorophore | Ex/Em (nm) | Quantity | Cat. No. | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Hydrazides | ||||||
| Alexa Fluor 350 Hydrazide | Hydrazide, sodium salt | DAPI | Alexa Fluor 350 | 346/442 | 5 mg | A10439 |
| Alexa Fluor 488 Hydrazide | FITC | Alexa Fluor 488 | 495/519 | A10436 | ||
| Alexa Fluor 568 Hydrazide | Rhodamine | Alexa Fluor 568 | 578/603 | A10437 | ||
| Alexa Fluor 594 Hydrazide | Texas Red | Alexa Fluor 594 | 590/617 | A10438 | ||
| Alexa Fluor 555 Hydrazide | Hydrazide, Tris(triethylammonium) salt | TRITC | Alexa Fluor 555 | 555/565 | 1 mg | A20501MP |
| Alexa Fluor 633 Hydrazide | Texas Red | Alexa Fluor 633 | 632/647 | A30634 | ||
| Alexa Fluor 647 Hydrazide | Cy5 | Alexa Fluor 647 | 650/668 | A20502 | ||
| Biocytin | ||||||
| Alexa Fluor 488 Biocytin | Biocytin, sodium salt | FITC | Alexa Fluor 488 | 495/519 | 250 mg | A12924 |
| Alexa Fluor 594 Biocytin | Texas Red | Alexa Fluor 594 | 590/617 | A12922 | ||
Cholera toxin subunit B
콜레라 독소(Cholera toxin)는 Vibrio cholerae에서 유래하며 subunit A와 B로 구성되어 있습니다. subunit A는 단백질 신호를 방해하고 세포 탈수로 이어지는 ADP-ribosyltransferase입니다. 반면, subunit B는 무독성이며 ganglioside GM1의 결합에 관여하여 lipid rafts를 라벨링 할 수 있습니다(그림 1). 신경세포에서 cholera toxin subunit B는 axonal membrane 내의 glycosphingolipid에 결합합니다. 미세주입 또는 이온삼투요법을 통해 도입된 cholera toxin subunit B는 고정가능하고 광안정적인 역행 트레이서입니다.
cholera toxin subunit B Alexa Fluor 콘주게이트는 감도가 높고 선택적 결합 및 신경 세포 추적 기능을 제공하는 반면, cholera toxin subunit B biotin-XX 및 horseradish peroxidase 콘주게이트는 tyramide 신호 증폭(TSA)과 함께 사용할 수 있습니다.
그림 1. Alexa Fluor 555 dye-labeled cholera toxin subunit B로 염색한 J774 생쥐 대식 세포. A J774 생쥐 대식 세포를 BODIPY FL ganglioside GM1으로 순차적으로 염색한 다음 Alexa Fluor 555 dye-labeled cholera toxin subunit B(Vybrant Alexa Fluor 555 Lipid Raft Labeling Kit의 구성요소로도 제공되고 있음)로 염색하였습니다. 그런 다음, 교차결합을 유도하기 위해 이 세포를 anti-CT-B antibody(Vybrant Alexa Fluor 555 Lipid Raft Labeling Kit의 구성요소)로 처리했습니다. Alexa Fluor 555 dye 형광(왼쪽 패널, 적색) 및 BODIPY FL dye 형광(중앙 패널, 녹색)을 각각 이미징하고, 일치하는 염색을 강조하기 위해 중첩했습니다(오른쪽 패널, 노란색). 핵은 청색-형광체 Hoechst 33258로 염색되었습니다.
DiI 및 유도체
DiI 및 그 유도체는 세포 생존율에 시각적으로 영향을 주지 않고 세포막을 라벨링 할 수 있는 친유성 트레이서 또는 carbocyanine 염료(dye)입니다. 이 염료(dye)는 물에서 희미한 형광성을 갖지만, 막에서는 형광성이 높고 원형질 막 내에서 측면으로 확산됩니다. 친유성 트레이서는 조직 섹션, in vivo 신경세포(그림 2) 및 배양된 세포에서 live cell 염색에 유용합니다. 또한, 고정화된 조직 섹션에서 신경세포 연장(neuronal projection)을 추적하는 데 사용할 수 있습니다(그림 3). Dil 및 그 유도체는 장기간 연구에도 사용할 수 있습니다.
이러한 친유성 트레이서들은 미세주입 또는 이온삼투요법을 통해 로드할 수 있으며, 전행 및 후행 이동 연구 모두에 사용할 수 있습니다. 크리스털 및 페이스트 형태로 이용가능하므로 조직 로딩을 위한 편리한 옵션을 제공합니다.
그림 2. 5일 연령의 키메릭 제브라피쉬(chimeric zebrafish) 뇌에서 망막 및 구조적 패턴을 평가하기 위한 진단 도구로서의 DiI 트레이서.DiI로 라벨링된 제브라피쉬 배아의 등비강(dorsonasal) 망막에 있는 축삭 돌기 및 SYTOX Green nucleic acid stain으로 대비 염색된 핵. 이전에 Development 125(13)(1999)의 표지에 출간된 이 디지털 이미지는 University of Heidelberg 신경생물학과의 Alexander Picker와 Michael Brand에 의해 생성되었습니다. 이 이미지는 The Company of Biologists, Ltd의 허가를 받아 사용되었습니다.
Hydrazide 및 Biocytin
Hydrazide 및 biocytin은 고정 가능하며 광안정적인 극성 트레이서입니다. 저분자량(<1,000Da)을 갖고 밝은 형광 신호를 제공합니다. Hydrazide 및 biocytin은 세포-세포 및 세포-리포솜 융합 조사에 사용될 수 있습니다. 또한, 이러한 세포-불투과성 극성 트레이서는 신경세포 연장(neuronal projection)을 추적하고 간극 연접(gap junction)을 조사하는 데 사용할 수 있습니다(그림 4, 5). biocytin 및 hydrazide는 간극 연접(gap junctions)을 교차할 수 있기 때문에 세포 내에 유지되는 라벨링된 덱스트란과 함께 신경세포 커뮤니케이션을 조사하기 위해 사용되는 경우가 많습니다(그림 6). biocytin은 TSA 및 ELF 기술과 같은 신호 증폭을 위한 형광 스트렙타비딘 콘주게이트를 사용하여 검출할 수도 있습니다.
이러한 극성 트레이서들은 세포막을 일시적으로 투과하는 미세주입, 포액 작용 또는 기타 기법을 사용하여 로드할 수 있습니다. 또한, 이러한 트레이서를 세포 속으로 이동시키기 위해 전기천공법(electroporation)을 사용할 수 있습니다.
그림 4. Alexa Fluor 488 hydrazide 및 Alexa Fluor 568 hydrazide가 로드된 토끼 망막 신경절 세포. 세 개의 토끼 망막 신경절 세포로서 적색-형광 Alexa Fluor 568 hydrazide(상단 세포), 녹색-형광 Alexa Fluor 488 hydrazide(중간 세포), Alexa Fluor 488 및 Alexa Fluor 568 hydrazides(하단 세포) 둘다를 주입한 세포이며 노란색 형광은 두 염료(dye)의 동시 국소화를 나타냅니다. 이미지는 호주, University of Queensland의 Michiel van Wyk에 의해 제공되었습니다.
그림 5. Alexa Fluor 488 hydrazide 및 Alexa Fluor 568 hydrazide가 로드된 신경세포. 거머리 신경절에서, 이온삼투법으로 녹색-형광 Alexa Fluor 488 hydrazide이 채워진 Leydig 신경세포 프로세스 및 적색 형광 Alexa Fluor 568 hydrazide이 채워진 거대 신경교세포의 세포 바디. F. Britz, C. Lohr, J. Schmidt 및 J.W. 이미지 제공. Deitmer, University of Kaiserslautern, 독일.
그림 6. Dextran 및 Hydrazide를 사용한 신경세포 공동 염색. 시상 소뇌 절편에서 10,000MW Calcium Green dextran으로 라벨링된 climbing fiber의 공초점 이미지 스택을 통해, 유입되는 축삭 돌기 및 말단 수지화(노란색)를 보여줍니다. 이 섬유에 의해 신경자극되는 Purkinje 세포는 Alexa Fluor 568 hydrazide로 라벨링되었습니다.
리소스
Molecular Probes Handbook
연구 도구
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.