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세포 트래킹 염료(tracking dye)는 살아있는 세포에서 세포의 움직임과 국소화 연구를 지원하는 무독성의 안정화된 프로브입니다. CellTracker(단기) 및 Qtracker(장기)는 세포에 수동적으로 로드되며 몇 세대를 통해 유지되지만 인접 세포로는 전달되지 않습니다. 이 세포 트래킹 염료(tracking dye)는 기기 레이저 및 필터에 적합하고 항체 또는 기타 세포 분석 시약을 사용한 공동 염색(co-staining)을 수용하기 위해 다양한 형광 색상으로 제공됩니다.
관련 내용:
세포 트래커(tracker) 특징
| 단기 세포 트래킹 | 장기 세포 트래킹 |
|---|---|
| 신속한 로딩(일반적으로 15분~1시간) | 일반적으로 세포 로딩에 1시간 소요 |
| 단기 트래킹(일반적으로 3~6세대 또는 72시간) | 장기 트래킹(일반적으로 6~10세대 또는 5~14일) |
| 광표백(Photobleaching)에 대한 저항성 중간 | 광표백(Photobleaching)에 대한 저항성 높음 |
| 중간 밝기 | 강렬한 밝기 |
| 세포 전체에 신호 분포 | 세포 내 점모양의 형광 |
| 고정 후 항체 라벨링으로 쉽게 멀티플렉스 가능 | 항체 라벨링로 쉽게 멀티플렉스 가능 |
세포 트래커(tracker) 선택 가이드
| CellTracker dye | Common filter set | Ex/Em(nm) | Quantity | Cat. No. | |
|---|---|---|---|---|---|
| CellTracker Blue CMAC (7-amino-4-Chloromethylcoumarin) | CMAC | DAPI | 353/466 | 5 mg | C2110 |
| CellTracker Blue CMF2HC (4-chloromethyl-6,8-difluoro-7-hydroxycoumarin) | Blue CMF2HC | DAPI | 371/464 | 5 mg | C12881 |
| CellTracker Violet BMQC (2,3,6,7-tetrahydro-9- bromomethyl-1H,5H-quinolizino( 9,1-gh)coumarin) | Violet BMQC | DAPI | 415/516 | 5 x 0.1 mg | C10094 |
| CellTracker Green CMFDA (5-chloromethylfluorescein diacetate) | Green CMFDA | FITC | 492/517 | 20 x 50 µg | C7025 |
| CellTracker Orange CMRA | Orange CMRA | TRITC | 548/576 | 20 x 50 µg | C34551 |
| CellTracker CM-DiI | CM-DiI | TRITC | 553/570 | 20 x 50 µg | C7000 |
| CellTracker Red CMTPX | CMTPX | Rhodamine | 577/602 | 20 x 50 µg | C34552 |
| CellTracker Deep Red | Deep Red | Cy5 | 630/650 | 20 x 15 µg | C34565 |
Common filter set
|
Emission max (nm)
|
Quantity
| Cat. No. | |
|---|---|---|---|---|
| Qtracker 525 Cell Labeling Kit | GFP or FITC | 525 | 1 kit | Q25041MP |
| Qtracker 565 Cell Labeling Kit | 565 | 1 kit | Q25031MP | |
| Qtracker 585 Cell Labeling Kit | TRITC-A | 585 | 1 kit | Q25011MP |
| Qtracker 605 Cell Labeling Kit | 605 | 1 kit | Q25001MP | |
| Qtracker 625 Cell Labeling Kit | Texas Red | 625 | 1 kit | A10198 |
| Qtracker 655 Cell Labeling Kit | 655 | 1 kit | Q25021MP | |
| Qtracker 705 Cell Labeling Kit | Cy5 | 705 | 1 kit | Q25061MP |
| Qtracker 800 Cell Labeling Kit | Cy7 | 800 | 1 kit | Q25071MP |
| CellTracker dye | Common filter set | Ex/Em(nm) | Quantity | Cat. No. | |
|---|---|---|---|---|---|
| CellTracker Blue CMAC (7-amino-4-Chloromethylcoumarin) | CMAC | DAPI | 353/466 | 5 mg | C2110 |
| CellTracker Blue CMF2HC (4-chloromethyl-6,8-difluoro-7-hydroxycoumarin) | Blue CMF2HC | DAPI | 371/464 | 5 mg | C12881 |
| CellTracker Violet BMQC (2,3,6,7-tetrahydro-9- bromomethyl-1H,5H-quinolizino( 9,1-gh)coumarin) | Violet BMQC | DAPI | 415/516 | 5 x 0.1 mg | C10094 |
| CellTracker Green CMFDA (5-chloromethylfluorescein diacetate) | Green CMFDA | FITC | 492/517 | 20 x 50 µg | C7025 |
| CellTracker Orange CMRA | Orange CMRA | TRITC | 548/576 | 20 x 50 µg | C34551 |
| CellTracker CM-DiI | CM-DiI | TRITC | 553/570 | 20 x 50 µg | C7000 |
| CellTracker Red CMTPX | CMTPX | Rhodamine | 577/602 | 20 x 50 µg | C34552 |
| CellTracker Deep Red | Deep Red | Cy5 | 630/650 | 20 x 15 µg | C34565 |
Common filter set
|
Emission max (nm)
|
Quantity
| Cat. No. | |
|---|---|---|---|---|
| Qtracker 525 Cell Labeling Kit | GFP or FITC | 525 | 1 kit | Q25041MP |
| Qtracker 565 Cell Labeling Kit | 565 | 1 kit | Q25031MP | |
| Qtracker 585 Cell Labeling Kit | TRITC-A | 585 | 1 kit | Q25011MP |
| Qtracker 605 Cell Labeling Kit | 605 | 1 kit | Q25001MP | |
| Qtracker 625 Cell Labeling Kit | Texas Red | 625 | 1 kit | A10198 |
| Qtracker 655 Cell Labeling Kit | 655 | 1 kit | Q25021MP | |
| Qtracker 705 Cell Labeling Kit | Cy5 | 705 | 1 kit | Q25061MP |
| Qtracker 800 Cell Labeling Kit | Cy7 | 800 | 1 kit | Q25071MP |
CellTracker dye
세포 트래커 염료(tracker dye)는 세포 이동 및 국소화를 위한 가장 간단한 프로세스를 제공합니다. 이 염료(dye)는 티올(thiol) 그룹과 반응하여 세포 불투과성 상태가 된 세포의 막을 자유롭게 통과합니다. 예외적으로 CellTracker Deep Red는 단백질 상의 아민(amine) 그룹과 반응합니다. 세포 트래커 염료(tracker dye)는 여러 세대에 걸쳐 딸 세포에 전달되지만 주변 세포로는 전달되지 않습니다. 이 염료(dye)는 작업 농도에서 안정적이며 독성이 없고(그림 1), 생리적 pH에서는 밝은 형광을 나타냅니다(그림 2, 3). CellTracker dye는 항체 염색을 사용한 멀티플렉싱을 위해 광범위의 emission 스펙트럼을 가지고 있습니다.
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그림 1. CellTracker dye는 세포 독성의 원인을 제공하지 않습니다. HeLa 세포는 웰당 2,500개 세포 밀도로 96-웰 플레이트에 플레이팅되었습니다. 다음 날, 세포(3개의 개별 96 웰 플레이트)에 표시된 CellTracker를 1 µM 농도 Live Cell Imaging Solution(LCIS)에서 로딩했습니다. LCIS의 DMSO는 내부 대조를 위해 세포 컬럼에 적용되었습니다. 세포를 37°C에서 60분 동안 인큐베이션한 후, 로딩 배지를 흡인하였으며, 세포를 1X LCIS로 세척하고, 이미징을 위해 LCIS를 다시 웰에 담았습니다. EVOS FL 자동 이미징 시스템의 스캔 기능을 사용하여 웰의 10% 영역을 이미징한 다음, CyQUANT Direct Cell Proliferation Assay reagent을 사용하여 세포 수를 측정하였습니다. 이 실험 프로토콜을 day 2, day 3에 반복하고, 스캔 및 스티치된 영역 이미지로 표현하였으며, 세포 증식 어세이 결과를 그래프로 표시하였습니다.
그림 2. CellTracker Deep Red를 사용한 Live cell 멀티플렉싱. HeLa 세포는 CellTracker Deep Red (white), CellLight Mitochondrial-GFP, BacMam 2.0 (green), CellLight Golgi-RFP, BacMam 2.0 (red), NucBlue Live ReadyProbes Reagent (blue)로 처리되었습니다.
그림 3. CellTracker Deep Red는 고정 세포 멀티플렉싱에 사용할 수 있습니다. HeLa 세포는 CellTracker Deep Red (pink), CellLight Mitochondrial-GFP, BacMam 2.0 (green), anti-vimentin and goat-anti-rabbit Alexa Fluor 750 (white), NucBlue Fixed Cell ReadyProbes Reagent (blue)로 처리되었습니다.
Qtracker 라벨
Qtracker 라벨로 세포 움직임과 국소화를 장기간 추적할 수 있습니다. 이 프로브는 광표백(Photobleaching) 저항성이 더 우수하며 더 많은 세포 분열 주기에서 유지됩니다. Qtracker 라벨은 맞춤형 표적 펩타이드를 사용하여 live cell의 세포질에 전달되어 장기(6~10세대) 추적을 위한 강하고 안정적인 신호를 제공하지만, 인접 세포로는 전달되지 않습니다. Qtracker 라벨은 항체 염색과 쉽게 조합할 수 있도록 단일 excitation에서 다른 emission을 갖는 8개의 개별 프로브를 제공합니다.
그림 4. Qdot 프로브, 염료(dye) 및 형광 단백질 멀티플렉싱. U2-OS 세포는 CellLight Plasma Membrane-GFP (green)으로 형질도입을 한 후, Qtracker 655 Cell Labeling Kit (magenta) 및 HCS NuclearMask Blue (blue)로 라벨링하였습니다.
리소스
Molecular Probes Handbook
연구 도구
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.