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CTS TrueCut Cas9 단백질 |
관련 GMP 기준에 따라 제조된 고성능 Cas9 단백질
기초 연구에서 임상 환경으로 유전체 편집 연구를 전환함에 따라 고품질 세포 치료 보조 물질 및 문서화가 중요합니다. 당사의 Gibco 세포 치료 시스템(CTS) TrueCut Cas9 단백질 제제는 엄격한 사양에 따라 제조된 wild-type Cas9 nuclease가 필요한 임상 연구 및 응용 분야를 위해 설계되었습니다.
- 일관된 높은 편집 효율 - 일차 T 세포에서 >90% 편집 효율 등 테스트된 모든 세포주에서 일관적으로 높은 편집 효율 제공
- 엄격한 가이드라인에 따라 제조 - GMP 기준을 준수하고 세포, 유전자 및 조직 기반 제품에 대한 보조 물질의 표준을 충족하도록 제조된 Cas9 단백질
- 큰 용량 제공 - 10 mg/mL 농도의 2.5 또는 5.0 mg 선택
엄격한 표준, 탁월한 성능
CTS TrueCut Cas9 단백질은 USP <1043>, Ph.Eur.를 포함한 세포, 유전자 및 조직 기반 제품에 대한 보조 물질의 표준을 준수하여 제조되었습니다. 5.2.12 및 ISO 20399 -1, -2, -3은 FDA 등록 제조 사업장의 21 CFR Part 820 원칙에 따라 적용됩니다.
- 추적성 문서화 - COA, COO, Drug Master file (DMF) 및/또는 Regulatory Support File*(요청 시 제공) 포함
- 광범위한 안전 테스트 - Endotoxin, Mycoplasma, 잔류 핵산 및 단백질 포함
- 무균 제조 - 일회용 기술을 사용하여 전체 공정 완료
- 멸균 충전 - 완제품은 Class A/B(Class 100 및 ISO 5 등가물) 클린룸에서 포장됩니다.
* 국가 별 규제 지원 파일 프로세스는 요청 시 제작되며, 문서화 되기까지 시간이 필요합니다.
데이터: CTS TrueCut Cas9 단백질은 일차 T 세포에서 높은 knockout 효율 달성
그림 1. CTS TrueCut Cas9는 T 세포에서 RUO Cas9에 필적하는 세포 생존력 및 편집 효율 달성. CTS TrueCut Cas9 단백질 및 TrueCut Cas9 단백질 v2(7.5 pmol)는 각각 TrueGuide Synthetic sgRNA (7.5 pmol)와 혼합되어 4개의 세포 치료 관련 유전자에서 7개의 유전자 자리를 표적으로 하는 RNP 복합체 2개를 형성했습니다. 각 RNP 복합체는 Neon 형질 주입 시스템(10 μL 키트)을 사용하여 5x105 T 세포를 형질 주입하는 데 사용되었습니다. 세포는 72시간 배양 후 수확되었으며 모든 반응은 3회 수행되었습니다. (A) 유세포 분석으로 측정 및 분석한 세포 생존력은 90%를 초과했으며 7개 자리 모두에서 유사했습니다. (B) Ion Torrent NGS 시스템을 사용한 타겟 앰플리콘 염기서열 분석 검증(TAV)으로 측정된 편집 효율.
데이터: CTS TrueCut Cas9 단백질은 일차 T 세포에서 높은 knock-in 효율 달성
그림 2. CTS Cas9는 10x electroporation scale에서 높은 HDR 기반 knock-in 효율 달성. CTS TrueCut Cas9 단백질 및 TrueCut Cas9 단백질 v2 (12.5 μg 또는 75 pmol)는 TrueGuide 합성 sgRNA (75 pmol) 및 ssODN donor(150 pmol)와 혼합되어 4개의 치료 유전자를 표적으로 하는 RNP-ssODN을 형성했습니다. 각 RNP는 더 큰 규모의 Neon Transfection System (100 μL 키트)을 사용하여 5x106 T 세포에 transfection되었습니다. 세포는 72시간 배양 후 회수되었으며 모든 반응은 3회 수행되었습니다. (A) 유세포 분석으로 측정 및 분석한 세포 생존율은 테스트된 모든 유전자 및 유전자 자리에 대해 90%를 초과했습니다. (B) Ion Torrent NGS 시스템을 사용한 타겟 앰플리콘 염기서열 분석 검증(TAV)으로 측정된 HDR 및 indel을 통한 donor 통합의 백분율로 계산된 편집 효율은 모든 타겟 유전자 자리에 대해 두 Cas9 간에 유사했습니다.
데이터: CTS TrueCut Cas9 단백질 knockout 효율은 일차 T 세포의 경쟁사 능가
그림 3. CTS Cas9는 경쟁사보다 높은 knockout 효율 달성. CTS TrueCut Cas9 단백질 및 경쟁사의 Cas9는 Cas9-RNP 복합체를 생성하기 위해 알파 및 베타 T 세포 수용체 유전자(TRAC 및 TBC) 영역을 표적으로 하는 TrueGuide Synthetic sgRNA 와 혼합되었습니다. 각 Cas9-RNP 복합체는 Neon 형질 주입 시스템을 사용하여 5x105 T 세포를 transfection하는 데 사용되었습니다. 모든 반응은 3회 실시되었습니다. (A) TCR에 대한 샘플 유세포 분석 데이터. 전체적으로 CTS Cas9는 88.7%의 KO 효율로 A 제조사의 Cas9에 비해 61.7%로 높은 효율을 달성하였습니다. (B) GS 기반 TAV로 측정한 CTS Cas9는 다양한 타겟(**p< 0.01)에서 A 제조사의 Cas9에 비해 평균 KO 효율이 더 높았습니다.
다양한 온도에서 lot 간 일관성 및 안정성을 포함한 더 많은 샘플 데이터는 아래의 CTS TrueCut Cas9 단백질 애플리케이션 노트를 참조하십시오.
CTS TrueCut Cas9 단백질의 specification
| 파라미터 | 사양 |
|---|---|
| 농도 | 9.0-11.0 mg/mL |
| 활성 어세이, 체외 | >In vitro에서 절단되지 않은 90% reference DNA가 절단 산물로 전환됨 |
| Endotoxin | <10.0 EU/mg |
| 멸균 | 성장 없음 |
| RP-HPLC 순도 | ≥ 95% |
| SDS-PAGE 순도 | ≥ 95% |
| Aggregates | ≤ 5% |
| 식별, RP-HPLC | 준수 |
| 식별, SDS-PAGE | 준수 |
| pH | 7.0–7.8 |
| 잔류 DNase | |
| 잔류 RNase | |
| 잔류 숙주 세포 단백질 | |
| 잔류 숙주 세포 DNA | |
| Mycoplasma | |
| * LOQ = 정량 한계, ** LOD = 검출 한계 | |
CTS TrueCut Cas9 단백질 관련 자주 묻는 질문(FAQ)
두 제품 모두 동일한 Cas9 단백질이지만, CTS TrueCut Cas9 단백질은 세포, 유전자 및 조직 기반 제품용 보조 물질에 대한 표준을 충족하도록 제조되었습니다. 이를 통해 추적성 문서화, 광범위한 안전성 검사, 무균 제조, 멸균 충전, 고농도 및 대량 포장 크기라는 이점이 위에 설명된 바와 같이 추가됩니다.
관련 지침은세포 치료 시스템 지원에서 확인할 수 있습니다.
당사의 Cas9 단백질은 10 mM Tris pH 8.0(4°C), 100 mM NaCl, 200 mM Na2SO4, 50% 글리세롤로 구성된 저장 완충액 용액에 저장됩니다.
Cas9 제품과 관련된 Thermo Fisher Scientific의 라벨 라이선스 사용이 제한된 항목(LULLs)†에 따라 CTS TrueCut Cas9 단백질을 사용하여 35 U.S.C. §271(e)(1)의 규정을 따르는 과학적 발견 연구, 전임상 연구 및 임상 연구 활동에 활용할 수 있습니다. 35 U.S.C. §271(e)(1)이 적용되는 활동의 범위는 고객이 판단해야 합니다. 이 범위를 벗어나는 활동의 경우, 필요한 제 3자 권리를 획득하는 것은 고객의 책임입니다.
† LULLs를 보려면 아래의 CTS Cas9 단백질 주문하기 섹션에서 해당 제품 페이지 링크를 클릭하십시오.
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연구용 또는 임상 연구용 세포 기반 제품의 비상업적 제조용. 주의: 사람이나 동물에게 직접적으로 사용할 수 없습니다.