Transfection 및 편집 세포 선택을 위한 올인원 CRISPR 플라스미드 시스템

All-in-one CRISPR-Cas9 Vector를 이용해 실험을 진행할 때에는 Invitrogen GeneArt Nuclease Vector Kit를 사용하십시오. 본 제품은 Cas9 nuclease cassette와 targeted RNA (gRNA) cloning cassette 모두에 적용할 수 있으며, 단일 구성의 Cas9 플라스미드로부터 원하는 유전자 자리를 편집할 수 있습니다.

이 제품은 CRISPR-Cas9 벡터 설계, 제작 및 증식에 필요한 시약을 함께 제공하며, transfection된 개체를 선별하거나 증식하는데 필요한 리포터도 포함하고 있습니다.

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단일 CRISPR-Cas9 벡터에서 Cas9 nuclease, gRNA 및 리포터 결합


GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kit는 Cas9 endonuclease를 발현하는 플라스미드 벡터를 사용하여 guide RNA(crRNA 및 tracrRNA 포함)를 쉽게 발현시킬 수 있습니다.  crRNA 발현 세포 모집단의 유세포분석 기반 분류용 GeneArt CRISPR Nuclease Vector with OFP(오렌지 형광 단백질) 또는  crRNA 발현 세포의 비드 기반 농축을 위한 GeneArt CRISPR Nuclease Vector with CD 4를 선택하십시오.
 

Image of product box and tubes for the GeneArt CRISPR Nuclease Vector with Orange Fluorescent Protein Reporter Kit

도움말: CRISPR 편집이 처음인 경우 Cas9 DNA 플라스미드가 아닌 TrueGuide 합성 gRNA를 TrueCut Cas9 단백질과 함께 사용하는 것이 좋습니다. Ribonucleoprotein (RNP) complex는 형질 주입 즉시 활성화 되며 CRISPR 플라스미드에 비해 핵에서 더 빠르게 제거되어, off-target effect 또는 DNA integration이 줄어듭니다.

Plasmid maps of Cas9 nuclease expression vectors with OFP reporter or CD4 reporter.

그림 1. GeneArt CRISPR nuclease vector map 벡터는 target-specific crRNA를 인코딩하는 이중 가닥 DNA 올리고를 쉽게 클로닝하기 위해 그림과 같이 5-bp 5’ 돌출부가 있는 선형화 형태로 제공됩니다. 맵은 (A) OFP 리포터 및 (B) CD4 리포터를 사용한 벡터로 표시됩니다. gRNA, Cas9 및 리포터가 동일한 벡터에서 발현됩니다. Cas9는 핵 국소화 신호(NLS1 및 NLS2)를 통해 핵으로 유도됩니다.
 

GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kit를 사용한 CRISPR 플라스미드 생성 및 발현

그림 2에는 CRISPR 벡터 생성 및 세포 발현에 필요한 3단계 워크플로우가 요약되어 있습니다. 

 

  1. CRISPR gRNA의 타겟 특이적 부분을 코딩하는 단일 가닥 DNA 올리고뉴클레오티드를 설계할 수 있습니다. 이 DNA 올리고를 CRISPR-Cas9 벡터로 어닐링 및 클로닝합니다. TrueDesign 유전체 편집기 소프트웨어를 사용하여 원하는 편집에 최적인 gRNA 타겟 영역을 결정할 수 있습니다.




  2. CRISPR 벡터를 적격 E. coli 세포(키트로 제공)로 형질 전환하여 충분한 발현 플라스미드를 생성합니다.




  3. CRISPR 벡터를 사용하여 타겟 세포를 형질 주입하고 OFP 또는 CD4 리포터를 사용하여 형질 주입된 세포를 정렬하거나 농축해 나중에 사용할 수 있습니다.
     

그림 2. GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kit의 활용을 위한 워크플로우. 타겟 특이적 crRNA를 위한 DNA 올리고 코딩을 Cas9 Nuclease Vector로 어닐링 및 클로닝한 후 벡터는 E. coli 세포로 transfection됩니다. E. coli는 원하는 CRISPR 클론에 대해 스크리닝된 다음 유전자 편집 및 분석을 위해 세포 내로 transfection됩니다.
 

  GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kit 사용자 가이드 다운로드

CRISPR 플라스미드 설계를 위한 GeneArt CRISPR Nuclease Vector kit 주문하기

고객의 자체 CRISPR 벡터 생성을 위한 제품

올인원 CRISPR 플라스미드 시스템용 GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kit를 사용하는 것 외에도 별도의 Cas9 플라스미드 및 gRNA 플라스미드를 선택할 수 있습니다.

Cas Nuclease 발현 및 gRNA 클로닝 벡터에 사용되는 플라스미드는 오픈 액세스 리소스(예: 비영리 글로벌 플라스미드 저장소인 Addgene)에서 얻을 수 있습니다. gRNA 발현을 위한 자체 플라스미드를 생성하려면 자체 gRNA 염기서열을 포함한 oligonucleotide와 함께 FastDigest 제한 및 클로닝 효소가 필요할 수 있습니다.
 

CRISPR 플라스미드 워크플로우용 추가 제품

CRISPR 플라스미드의 형질 전환용 제품

당사는 플라스미드 분리 및 정제용 PureLink Expi Endotoxin-Free Maxi 플라스미드 정제 키트와 함께 One Shot MAX Efficiency DH5a T1R 화학적 적격 세포와 같은 Cas9 플라스미드의 증식을 위한 다양한 적격 E. coli 세포를 제공합니다. 
 

CRISPR 플라스미드 세포 전달 및 CRISPR 편집 검증용 제품

CRISPR 벡터의 효과적인 전달을 위한 형질 주입 제품
유전자 편집 결과를 검증하는 방법
Cas9 단백질 
 

CRISPR 플라스미드를 위한 리소스 및 지원

분자 클로닝 교육
클로닝 지원 센터
 

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