Cas9 nuclease

CRISPR cas9 유전자 편집을 위한 Cas9 nuclease 형식

CRISPR-Cas9 유전자 편집 실험에서 Cas9 nuclease가 gRNA에 결합하여 특정 유전체 타겟 염기서열에서 DNA 이중 가작의 절단을 유도합니다. Cas9 효소의 기능이 작동하려면 이 타겟 염기서열이 원하는 절단 위치 부근에 proto-spacer adjacent motif (PAM) 부위가 있어야 합니다. Cas9 nuclese가 실험 설계 및 선호 워크플로우에 맞는 여러 가지 형태로 제공되므로, 정밀한 DNA 분할 및 knockout을 수행할 수 있습니다.

Cas9 nuclease 선택 가이드

	Cas9 단백질	Cas9 mRNA	Cas9 플라스미드	Cas9 Lentivirus
설계 용도	대부분의 CRISPR 연구 및 전임상 응용 분야			안정적 세포주 생성
주요 이점	전사와 번역 생략 가능 Off-target effect 최소화 다음과 같은 세 가지 형식으로 제공 가장 일반적인 연구 응용 분야를 위한 야생형 TrueCut Cas9 단백질 v2 Off-target effet에 민감한 응용 분야를 위한 TrueCut HiFi Cas9 단백질 임상 연구 응용 분야를 위한 CTS TrueCut Cas9 단백질	기존 mRNA 프로토콜에 적합 Microinjection에 이상적 Bypasses transcription 여러 gRNA와 함께 동시 transfection 가능	기존 플라스미드 프로토콜에 적합 GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kit를 사용하여 올인원 Cas9 및 gRNA 벡터로 통합 가능	gRNA 라이브러리 배열 또는 풀링에 이상적 다양한 세포 유형에서 안정적인 Cas9 발현 유도 2개의 nuclear localization signal과 함께 human codon에 최적화된 Cas9 포함
주요 제한 사항	없음	번역 필요	준비 시간과 노력 필요 Off-target effect를 감소시킬 수 있음 유전체 DNA에 통합될 수 있음 전사와 번역이 필요함	바이러스 transduction에 대한 세포 반응 가능성
권장 도입 방식의 옵션	Lipofectamine CRISPRMAX Transfection Reagent	Lipofectamine MessengerMAX Transfection Reagent	Lipofectamine 3000 Transfection Reagent	Lentivirus Transduction
권장 도입 방식의 옵션	Neon Transfection System CTS Xenon Electroporation System(large-scale electroporation)			Lentivirus Transduction
자세히 알아보기	Cas9 단백질 옵션	Cas9 mRNA 옵션	Cas9 플라스미드 옵션	Cas9 Lentivirus 옵션

다양한 CRISPR-Cas9 유전자 편집 기법의 세포 처리

플라스미드 및 mRNA 형식과 대조적으로 당사의 TrueGuide 합성 gRNA와 복합체를 형성한 TrueCut Cas9 단백질의 형질 주입은 전사와 번역 단계를 생략하여 실험에서 Cas9 효소의 편집 효율을 크게 높일 수 있습니다. 또한 CRISPR 플라스미드는 72시간 이상 세포에 남아 있고 off-target effect를 최소화시킬 수 있지만, TrueCut Cas9 단백질은 24시간 내에 세포에서 제거되어 타겟 이탈 효과를 최소화합니다.

Methods of nuclear entry and genome targeting for three different Cas9 nuclease formats

그림 1. CRISPR-Cas9 유전자 편집 형식 비교. Cas9 및 가이드 RNA는 DNA, RNA 또는 사전 형성된 ribonucleoprotein (RNP) complex 형태로 세포에 전달될 수 있습니다. 플라스미드 DNA 벡터(왼쪽 상단)를 사용할 때 Cas9 유전자는 먼저 핵에서 전사하여 세포질로 내보낸 후 번역해야 하며 mRNA/gRNA 혼합(아래쪽)을 번역해야 합니다. 당사의 TrueGuide 합성 gRNA와 결합된 TrueCut Cas9 단백질과 같은 시약 단백질 복합체(오른쪽 위)는 이러한 사전 단계(즉, 전사 및 번역)를 생략하여 더욱 간단하고 효율적인 유전자 편집이 가능합니다.