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다양한 애플리케이션 요구 사항 충족
iBright 이미징 시스템은 최대 다섯 가지의 이미징 모드를 통해 다양한 애플리케이션을 지원합니다. 단백질 젤, 핵산 젤, 웨스턴 블랏 등에서 데이터를 효율적이고 간편하게 수집할 수 있습니다.
| 이미지 모드 | 어떤 종류의 신호를 캡처하겠습니까? |
| Protein gel | 젤 염색(예: Coomassie, silver) 및 멤브레인(예: Ponceau S, Thermo Scientific Pierce Reversible Protein Stain), 젤 형광 염색(예: Invitrogen SYPRO Ruby stain) |
| Nucleic acid gel | Ethidium bromide 및 Invitrogen SYBR 염색 |
| Chemiluminescent blot | HRP 및 AP 기질을 이용한 Chemiluminescence (예: Thermo Scientific SuperSignal 및 Invitrogen WesternBreeze substrate) |
| Fluorescent blot | RGB(visible range) 및 near-IR fluorophore와 같은 Fluorescence (예: Invitrogen Alexa Fluor 및 Alexa Fluor Plus conjugate) |
| Universal | Chemiluminescence, fluorescence, colorimetric stains, and/or visible image 등 여러 신호를 동시 이미징하는 맞춤형 모드: Fluorescent blot과 유사하며 임의 색상을 지정해 이미징할 수 있습니다. |
핵심 이미징 애플리케이션
특수 플레이트 기반 이미징 애플리케이션
정성적 가시(visible) 이미징 애플리케이션*
형광 웨스턴 블랏, 염색된 핵산 젤, 비색 염색된 단백질 젤, GFP 발현 콜로니, 가시(visible) 염색 콜로니, 잎 단면을 보여주는 이미지는 의사 색상(임의 색상 적용)으로 표시됩니다. 데이터는 회색조로 캡처됩니다.* 정성적 가시(visible) 이미징 애플리케이션은 물질의 정성적 시각화 또는 신호의 존재 확인을 제공하며 정량화에는 권장되지 않습니다.
최적화된 E-Gel precast agarose gel 이미징 및 분석
E-Gel Agarose Gel용 iBright Tray Adapter를 활용하면 iBright transilluminator 위에 E-Gel을 중앙에 적절히 배치하고 E-Gel 라벨 또는 바코드가 비특이적 형광을 유발하는 것을 차단함으로써 11, 22, 48, 96-well E-Gel 구성의 이미지 캡처 및 분석을 간소화할 수 있습니다.
또한 디컨볼루션 워크플로우는 간편하면서 레인 간 데이터를 검토할 수 있어 결과를 더 잘 이해할 수 있으므로 고처리량 96-well E-gel 결과 해석을 크게 간소화할 수 있습니다.
터치스크린 인터페이스
12.1인치 LCD 터치스크린 인터페이스는 단순하고 정돈된 레이아웃을 가져 간단한 교육으로도 시스템을 쉽게 사용할 수 있습니다. 워크플로우는 샘플 유형에 상관없이 이미징 모드 간에 비슷합니다.
강력한 카메라 기술
9.1 메가픽셀 냉각식 CCD 카메라는 선명하고 깨끗한 논문 품질의 이미지를 캡처합니다. 해상도가 높으면 더 많은 binning(픽셀 결합) 옵션을 사용할 수 있어 필요에 따라 해상도와 감도를 유연하게 조정할 수 있습니다.
Smart Exposure 기술로 최적의 노출 시간을 신속하게 결정하고 이미지의 잠재적인 과다 또는 과소 노출을 최소화하며 원하는 신호를 얻기 위해 노출을 반복해야 할 필요성을 최소화합니다.
발현 수준이 매우 다양한 화학 발광 웨스턴 블랏 샘플의 경우, Smart Range HDR(high dynamic range) 기술을 사용하면 선형 다이내믹 레인지를 극대화할 수 있습니다. 이 기능은 동일한 샘플에 대해 두 가지 다른 노출, 즉 중간~고농도의 단백질을 캡처하기 위한 짧은 노출과 낮은 농도의 단백질을 캡처하기 위한 긴 노출을 활용합니다. 캡처 후 두 개의 서로 다른 이미지는 중간~고신호 강도와 저신호 강도를 모두 포함하는 단일 16비트 HDR 이미지로 결합됩니다. 이는 선형 다이내믹 레인지를 단 한 번의 짧은 노출 시간 또는 단 한 번의 긴 노출 시간으로 달성할 수 있는 것 이상으로 효과적으로 확장합니다.
자동화를 통한 조작 간소화
iBright 1500 시리즈 이미징 시스템은 자동으로 샘플의 위치를 결정하며, 기계적으로 회전하는 샘플 스테이지에서 샘플을 왼쪽 또는 오른쪽으로 최대 10° 회전할 수 있습니다. 이 자동화를 통해 샘플의 위치를 정렬하기 위해 반복적으로 샘플 드로어를 열어 볼 필요가 없습니다. 또한 디지털 방식이 아닌 기계식으로 샘플을 회전해 움직이므로 데이터가 온전하게 유지됩니다.
디지털 회전 vs. 기계식 회전. (A) 픽셀이 디지털 회전으로 회전하므로 밴드가 톱니처럼 나타납니다. 기계식 회전을 사용하면 샘플 자체가 회전하므로, 픽셀이 정렬된 상태로 유지되어 밴드가 매끄러운 모양으로 유지됩니다. (B) 회전 전후의 iBright 이미징 시스템 샘플 스테이지를 보여주는 그래픽.
또한 iBright 이미징 시스템은 22.5cm x 18.0cm 관측시야를 최대한 활용할 수 있도록 각 레벨의 줌(zoom) 초점을 자동으로 조정합니다. 싱글 블랏을 촬영하는 경우, 카메라가 자동으로 최대 2배 줌(1-2X 줌은 iBright 1500 시리즈 이미징 시스템의 기계식 줌, 1-2X 줌은 iBright CL750 이미징 시스템의 디지털 줌)까지 확대합니다. 기계식 줌(zoom)은 카메라를 샘플 스테이지에 더 가깝게 이동하게 함으로써 감도를 극대화하고 초점 거리를 줄여 줍니다. 또한 iBright 1500 시리즈 이미징 시스템은 1-8X의 줌 레벨 결합을 위한 1-4X 디지털 줌을 추가로 제공합니다.
줌(zoom) 기능. (A) 줌이 되지 않은 형광 웨스턴 블랏 이미지. (B) 2X 줌 된 블랏. (C) 4X 줌 된 블랏. (D) 8X 줌 된 블랏. (연속 줌 중에 블랏이 재배치되지 않음)
작은 공간을 차지하며 넓은 관측시야 제공
넓은 관측시야(22.5 x 18.0 cm)로 최대 4개의 미니 블랏 또는 젤을 캡처할 수 있습니다.
형광 멀티플렉스 웨스턴 블랏으로 작업 속도를 높이십시오
가능성을 확장하십시오—iBright FL1500 모델은 다섯 개의 형광 채널을 통해 최대 4개의 컬러 형광 웨스턴 블랏 멀티플렉싱을 가능하게 하고 싱글 블랏으로 다수의 단백질을 연구할 수 있도록 고객의 가능성을 확장시켜 드립니다. 실험을 개선하기 위해 의미있고 대표적인 비교를 얻을 수 있습니다. Smart Exposure 기술은 각 형광 채널에 대한 신호대잡음비(signal-to-noise ratio)를 최적화해 멀티플렉스 형광 웨스턴 블랏 데이터 수집을 더욱 향상시킵니다.
가시 광선 범위(RGB) 및 근적외선 범위(NIR) 형광 웨스턴 블랏 애플리케이션을 위해 iBright FL1500 이미징 시스템에 사전 설치된 필터 세트는 다음 표에 요약되어 있습니다.
Excitation channel | Filter range (nm) | Emission channel | Filter range (nm) | 사용 가능한 형광단의 예 |
EX1 | 455~485 | EM1 | 508-557 | Alexa Fluor Plus 488, Alexa Fluor 488 |
EX2 | 515~545 | EM2 | 568-617 | Alexa Fluor Plus 555, Alexa Fluor 546 |
EX3 | 608~632 | EM3 | 675-720 | Alexa Fluor Plus 647, Alexa Fluor 594 |
EX4 | 610~660 | EM4 | 710-730 | Alexa Fluor Plus 680, Alexa Fluor 680 |
EX5 | 745~765 | EM5 | 800-850 | Alexa Fluor Plus 800, Alexa Fluor 790 |
Green-LED transilluminator
iBright 이미징 시스템은 green LED를 기반으로 한 transilluminator를 활용하여 ethidium bromide과 SYBR Green 염료와 같은 일반적인 DNA 염료를 효과적으로 사용할 수 있으며 추가적인 이점을 제공합니다.
유해한 UV 광선 없음: UV 광선은 많은 형광 염료 및 염색제를 효과적으로 자극하지만 건강에 해로울 수 있습니다. 또한 UV 광선에 장시간 노출되면 DNA 샘플이 망가지고 후속 애플리케이션에 사용될 샘플이 손상될 수 있습니다.
수은 폐기물 없음: UV transilluminator는 수은, 유해 물질을 포함할 수 있으므로 취급 및 폐기에 특별한 주의가 필요합니다.
더 긴 수명: LED 전구는 형광 UV 전구보다 실시간 수명이 훨씬 길기 때문에 기기의 수명기간 동안 상당한 비용 절감 효과를 얻을 수 있습니다.
Protein normalization 워크플로우
단백질 샘플 농도의 불균일성, 젤 상에 일관적이지 않은 샘플 로딩, 그리고 젤에서 멤브레인으로의 일정하지 않은 단백질 트랜스퍼 등으로 인한 샘플의 변동성을 조정하기 위해 타겟 단백질을 GAPDH, β-tubulin, β-actin 등 housekeeping 단백질과 대조하여 비교하는 Normalization 단계를 추가적으로 수행하게 됩니다. housekeeping 단백질은 역사적으로 normalization에 널리 사용되었지만 타겟 단백질과 total 단백질을 비교하는 새로운 방법이 보다 정확한 대안으로 떠오르고 있습니다.
실험에 가장 적합한 방법을 지원하기 위해 iBright 이미징 시스템 및 iBright 분석 소프트웨어는 실험 또는 샘플 변동성을 모니터링하거나 수학적으로 보정할 수 있는 다양한 정량 및 normalization 옵션을 제공합니다.
No-Stain Protein Labeling Reagent를 사용한 total protein normalization. Invitrogen™ Bolt™ 4~12% Bis-Tris Plus 젤에 10~50µg 범위의 HeLa lysate를 로드하고 MES running buffer를 사용하여 전기영동을 수행하였습니다. iBlot 2 Transfer Stacks(P0 프로토콜, 7분)이 있는 Invitrogen™ iBlot™ 2 Gel Transfer Device를 사용하여 젤에서 나온 단백질을 mini PVDF 멤브레인으로 트랜스퍼하였습니다. PVDF 멤브레인을 20mL의 D.W.로 2분씩 2회 워싱한 후, 10mL의 working solution(No-Stain Protein Labeling Reagent)으로 10분 동안 라벨링했습니다. 그 뒤, 멤브레인을 20mL의 D.W.로 2분씩 3회 워싱한 후, β-actin(카탈로그 번호 AM4302), GAPDH(카탈로그 번호 398600) 및 α-tubulin(카탈로그 번호 138000)에 대해 Invitrogen™ 1차 항체를, 그리고, Invitrogen™ Goat Anti-Mouse IgG Alexa Fluor™ Plus 680 2차 항체(카탈로그 번호 A21058)를 첨가했습니다. Invitrogen™ iBright™ FL1500 이미징 시스템을 사용하여 블랏을 찍었습니다. 레인의 total protein 신호를 정량화하는 데 iBright 소프트웨어가 사용되었습니다. total protein 신호의 전체 범위에 대해 플롯된 데이터의 R² 값은 0.9990으로 측정되었고, β-actin, GAPDH 및 α-tubulin의 R² 값은 각각 0.8851, 0.9438 및 0.8332였습니다.