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Thermo Scientific Selectris 和 Selectris X 成像过滤器为镜筒后成像过滤器,可在Thermo Scientific Krios和Glacios Cryo-TEM上使用,可提高 TEM 图像的对比度,从而生成高达原子分辨率的高分辨率结构。Selectris 过滤器的零损失过滤消除了由非弹性散射电子引起的噪声,从而提高了信噪比 (SNR) ,获得了更好的对比度。Selectris 过滤器的零损耗峰值位置专为高稳定性而设计,最大限度地降低了对环境温度变化的敏感度,无需频繁调整。

借助 Selectris 过滤器,由于软件和硬件的完全集成以及广泛的自动化和出色的稳定性,零损失能量过滤变得简单。每个机械和电子光学元件的设计都具有稳定性和数据可重复性,能够在无人值守的情况下可靠地采集具有窄能量狭缝宽度(10 eV)的大型数据集。使用这些窄狭缝宽度的能力为单颗粒冷冻电子显微术(冷冻电镜)提供了额外的对比度提升,增强了信号强度,提高了分辨率和通量。

与最新一代Thermo Scientific Falcon 4i 直接电子探测器搭配使用,Selectris 过滤器可让您快速获得高分辨率结构,揭示新的生物学见解。结合Falcon 4i摄像头和电子事件表示(EER)功能,可实现高效的文件大小压缩、超分辨率功能,并最大限度地提高所有使用案例的灵敏度。为了进一步提高用于单颗粒分析和冷冻电子断层扫描的冷冻电镜工作流程的生产力和易用性,这些过滤器已完全集成到Thermo Scientific EPU 软件、Thermo Scientific 断层扫描软件和我们的仪器操作软件中。

Cryo-electron microscopy atomic-resolution of apoferritin.
使用配备 Selectris X 成像过滤器的冷冻电子显微镜解析脱铁铁蛋白的原子分辨率结构,分辨率为 1.2 Å。

Selectris X 过滤器——迈向原子分辨率的下一步

Selectris X 专为寻求行业领先光学性能的研究人员而设计,而 Selectris 则是那些需要最高效率和高通量的研究人员的理想选择。Selectris X 成像过滤器扩展了 Selectris 平台的稳定性、易用性和性能,提供了更复杂的电子光学系统,用于进一步的像差校正。这使得图像和能量域的失真度都极低,为真正的原子分辨率结构开辟了道路。

能量过滤透射电子显微镜的工作原理是怎样的呢?

在与样品相互作用时,电子可以发生弹性或非弹性的散射。Selectris 成像过滤器允许弹性散射的电子通过,从而增强了图像的对比度。其内在机制是通过消除非弹性散射电子引起的噪声,提高信噪比(SNR)和对比度。

使用非常稳定的窄缝宽度 (10 eV) 的能力为单颗粒冷冻电子显微术(冷冻电镜)和冷冻断层扫描 (cryo-EM) 提供了额外的对比,同时也提高了了分辨率和通量。

例如,让我们比较一下具有相同数量粒子的蛋白酶体 20S 的重建(见表)。与较大的狭缝宽度(20 keV)相比,较窄的能量狭缝(即较低的能量)可获得更高的分辨率,并且与未过滤的图像相比甚至更优化。这是因为 B 因子已降低,这意味着获得一定分辨率所需的粒子更少。

此外,与使用更宽的能量狭缝相比,更窄的能量狭缝宽度 (10 eV) 意味着获得等效分辨率(370k) 所需的粒子数量更少(见图和图表)。因此,使用 Selectris X 成像过滤器,您可以基于更少的数据更快地获得结果,或者最大限度地提高分辨率。

Energy-Filtering Transmission

实验

# 粒子

分辨率 (Å)

B因子

10 eV102,2002.1489.3
20 eV102,2002.2699.5
未过滤102,2002.34106.1
Proteasome graph
Proteasome protein

要获得较低的能量狭缝宽度,例如 5 或 10 eV,需要一个非常稳定的过滤器,以避免由于调整过滤器造成的中断。

“硬件和软件的稳定性给我们留下了深刻的印象。由于增强了性能和稳定性,我们所有的有关 COVID-19 工作现在都在配置了 Selectris X 成像过滤器的仪器上完成。我们定期收集 5 eV 断层图,这在以前是不可能的。”

Alistair Siebert,英国国家同步加速器科学设施钻石光源电子生物成像中心 (eBIC) 首席电子显微镜专家。

Alistair Siebert, Principal Electron Microscopist
Dr. Juergen Plitzko, Max Planck Institute for Biochemistry, Martinsried Germany

Selectris X 成像过滤器因其稳定性和鲁棒性而受到我们的青睐,尤其是在延长的时间内执行的冷冻电镜和冷冻电子断层扫描数据收集方面。经调整后的过滤器可以稳定运行超过一个月的时间。零损失峰值仅在一周甚至两周后移动 1 eV!”

德国马丁斯里德 马克斯·普朗克研究所-生物化学研究所 Juergen Plitzko 博士

Selectris 在 200 kV 和 300 kV 下的潜力

Selectris 和 Selectris X 成像过滤器与 Glacios Cryo-TEM 完全兼容,配备 200 kV XFEG 光学元件。Glacios冷冻透射电镜将所有这些集成于一台小型仪器上,并简化了安装过程。

Human hemoglobin collected on Glacios Cryo-TEM with Selectris X Imaging Filter resolved at 3.4 Å.
使用配备 Selectris X 成像过滤器的 Glacios Cryo-TEM 解析人血红蛋白,分辨率为 3.4 Å。
Human hemoglobin collected on Krios Cryo-TEM with Selectris X Imaging Filter resolved at 2.0 Å.
使用配备 Selectris X 成像过滤器的 Krios Cryo-TEM 解析人血红蛋白,分辨率为 2.0 Å。

主要特点

专为稳定性而设计

  • 窄能量 (10 eV) 零损耗过滤为更高分辨率的重建提供增强的对比度
  • 更精密的像差校正、低图像失真和在整个视场内均匀的能量分辨率
  • 对温度变化的敏感性最小化

操作简便

  • 与 Thermo Scientific 仪器操作软件以及用于数据收集的EPU软件和断层扫描软件完全集成。
  • 可在几分钟内完成自动过滤器调整
  • 零损失对中无需中断数据采集

Falcon 4i 直接电子探测器

  • 通过更高的 DQE 获得无与伦比的图像质量
  • 具有高信噪比 (SNR) 的大像素
  • 更高的吞吐量,每小时可获得更多图像
  • 使用电子事件表示 (EER)进行无损数据压缩

快速、低频的调整

  • 调整可以在几分钟内自动完成,在极少数情况下需要过滤器调整
  • 实验运行期间不间断,日常运行顺畅,数据采集高效

性能数据

产品表格规范样式表


成像过滤器

位置底部安装
稳定性狭缝漂移± 1.5eV/24hr
零损失对中自动
过滤器调整自动
TEM工作电压200 kV、300 kV


Falcon 4i 直接电子探测器相机

传感器4096 × 4096 像素,~ 5.7 x 5.7 cm
像素尺寸14 x 14 um2像素尺寸
文件格式
  • EER 超分辨率高达 16k x 16k。所有计数的帧(帧率约 240 fps)均可访问/写入磁盘,不需要分级
  • MRC
检测模式
  • 电子计数模式
  • 测量模式(快速线性模式)
自动化
  • 集成在 Thermo Scientific EPU 和断层扫描软件中
  • 通过 TEM scripting 与第三方软件兼容

相关资源

使用Selectris X在Glacios Cryo TEM上进行10 eV过滤,解析脱铁铁蛋白,分辨率为 1.7 Å。

GABA-A 受体人膜蛋白解析分辨率为 2.4 Å (~200 kDa),需求颗粒数为 94k,相比之下,使用配备 Selectris X 的 Glacios Cryo-TEM 解析未过滤样品的分辨率为 2.8 Å,需求颗粒数为 127k。样品由 MRC-LMB Cambridge 提供。

使用配备 Selectris X 的 Glacios Cryo-TEM 解析人血红蛋白(小分子蛋白,64 kDa),分辨率为 3.4 Å。

 

冷冻电镜:下一步是什么

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注册以查看包含Selectris功能的演示、RD过滤器开发的幕后工作,以及使用Selectris过滤器进行单粒子分析和细胞冷冻层析成像的破纪录结构分辨率结果。了解小蛋白质(100kDa)的高分辨率、适当的模型构建和相关化学成分的潜在应用。

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应用

使用冷冻电镜进行结构生物学研究

结构生物学研究

借助冷冻电镜(Cryo-EM)对具有挑战性的生物靶标(例如大型复合物、柔性物质和膜蛋白)进行结构分析。

使用冷冻电镜进行药物发现研究

药物发现

学习如何借助冷冻电镜,将合理的药物设计用于多种主要的药物靶点,进而开发出一流的药物。

使用冷冻电镜进行传染病研究

传染病研究

冷冻电镜技术可在近天然状态下对生物大分子的 3D 结构进行多尺度的观察,有助于提高治疗方法的开发速度和效率。

技术

单颗粒分析

单颗粒分析(SPA)是一种冷冻电镜技术,可实现近原子分辨率的结构表征,揭示动态生物学过程以及生物分子复合物/组装体的结构。

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冷冻电子断层扫描

冷冻电子断层扫描(cryo-ET)既能够提供单个蛋白的结构信息,又能够提供它们在细胞内的空间排列信息。这使该方法成为一种真正独特的技术,在细胞生物学领域具有巨大的潜力。冷冻ET可以将光学显微镜和近原子分辨率技术(如单颗粒分析)结合在一起。

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整合结构生物学

要了解蛋白质功能,您需要单个蛋白质之外的复杂和结构信息。整合结构生物学将质谱分析法和冷冻电镜(Cryo-EM)结合起来用于大型动态复杂结构的确定。

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