Search Thermo Fisher Scientific
由于向个性化医学推动并继续研究罕见疾病治疗方法的开发,寡核苷酸疗法领域正在扩大。针对寡核苷酸日益增加的需求需要从研发环境中使用的数量简单,经济实惠地扩大至商业需求,因为寡核苷酸难以获得高产量且纯度高,并配制用于高效递送和稳定性。
寡核苷酸生产过程中的异常情况会导致形成常见杂质,例如缺失一个或多个核苷酸 (N-1 , N-2 等) 的快捷寡核苷酸和包括超过预期核苷酸 (N+1 , N+2 等) 的长链寡核苷酸。
寡核苷酸的准确表征需要使用分析工具和工作流程解决方案,这些解决方案可提供稳健,准确的分析表征,以确认身份并测定纯度,质量和强度,从而提高效率并实现监管合规性。
HPLC 和 UHPLC 色谱分析方法是治疗性寡核苷酸过程开发和生产中用于满足监管要求的纯度和杂质表征的典型纯化方案的一部分。
对于非质谱 (MS) 应用,离子交换色谱是分析或纯化寡核苷酸的最佳方法。使用高 pH 洗脱液获得的变性条件消除了 Watson-Crick 氢键合,可以解决问题序列,如自赠送序列和 poly G 延伸。在高 pH 值下的阴离子交换色谱已成为寡核苷酸分析的首选方法。Thermo Scientific DNAPac PA200 和 PA200 RS 色谱柱 包含一种聚合树脂固定相,该固定相使用表面阴离子交换配体作为分离方式。由于其离子交换能力,这些色谱柱可在短时间内有效分离各种物种,使其成为复杂样品的良好选择。 关于这种分析 的示例,请参见应用说明薄膜阴离子交换 UHPLC 色谱柱上的寡核苷酸超高分离度分离。您还可以使用我们的 Thermo Fisher Scientific HPLC 色谱柱选择指南 查找适合您的生物分析应用的色谱柱和耗材。
对于 MS 应用,由于洗脱流动相的高盐含量,离子交换色谱不适用。但是,反相 (RP) 离子对分析是寡核苷酸 MS 应用的极佳替代选择。使用挥发性离子对试剂将有助于完全保留极性寡核苷酸分子,并更有利于质谱分析过程中的快速蒸发。Thermo Scientific DNAPac µm 色谱柱是一种基于球形超大孔 4 μ m 聚合树脂的反相液相色谱柱,设计用于寡核苷酸和双链核酸的离子对反相 (IP-RP) 分离。其固定相是稳定的,可 在全 pH 值范围 (pH 值 0-14) 内显示其粒子与极性寡核苷酸之间的二次相互作用更少,因为粒子是聚合物。这与市场上其他色谱柱相反,它们通常重新调整用途的 C18 色谱柱。通过使用聚合物树脂固定相,可以实现更高的效率和分离度,因为所得的色谱峰将更对称。
有关通过 HPLC 和 UHPLC 方法分析 寡核苷酸的更多信息,请参见寡核苷酸 HPLC 和 UHPLC 色谱柱。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.