LIVE/DEAD细胞活力检测试剂盒

本页内容：

• LIVE/DEAD 细胞活力检测选择指南
• LIVE/DEAD 细胞活力检测
• LIVE/DEAD 细菌活力检测
• LIVE/DEAD 真菌和酵母细胞活力检测
• 用于流式细胞术的 LIVE/DEAD 可固定活力检测染料

LIVE/DEAD 细胞活力检测试剂盒内含 2 到 3 色，根据细胞膜完整性、酯酶活性、代谢活性或细胞结构，对活细胞和死细胞群体进行区分。这些活力检测试剂盒已经过优化，可用于荧光显微镜、流式细胞仪和酶标仪检测。

LIVE/DEAD 细胞活力/细胞毒性试剂盒是一种基于细胞膜完整性和酯酶活性的快速易用型双色活力检测试剂盒（图 1）。质膜完整性由乙锭同源二聚体-1 确定，其进入质膜受损的细胞，与 DNA 结合后发出红色荧光；活细胞由钙黄绿素 AM 识别，钙黄绿素 AM 是一种细胞透化性荧光染料，与细胞内酯酶相互作用后转化为绿色荧光。

LIVE/DEAD 细胞活力检测试剂盒，C₁₂ 刃天青/SYTOX Green 是一种易用的双色活力检测试剂盒，用于区分死细胞/受损细胞和代谢活跃的活细胞（图 2）。在代谢活跃的细胞中，C_12-刃天青被还原成 C_12-试卤灵，发出红色荧光。C_12-刃天青是亲脂版本的刃天青，对活细胞的透化性更强，而 C_12-试卤灵产物能够更好地保留在细胞中。SYTOX 绿色染料进入死细胞和临死细胞的受损质膜中，与 DNA 结合，发出绿色荧光。受损细胞的红色荧光减弱、绿色荧光增强。

LIVE/DEAD 细菌活力检测试剂盒是方便易用的双色荧光检测试剂盒，可根据细胞膜完整性区分活细菌群体和死细菌群体。这些试剂盒含有 SYTO 9 绿荧光染色剂和 PI 红色荧光染色剂，二者进入细菌的能力不同。单独使用时，SYTO 9 会对细菌群体中的所有细菌进行染色，不论细胞膜完整性如何；而 PI 只进入细胞膜受损的细菌，导致 SYTO 9 荧光减弱。使用经过优化的混合试剂染色后，死细菌会发出红色荧光，而活细菌会发出绿色荧光。这些检测试剂盒已经优化，可用于荧光显微镜（图 3）、流式细胞仪（图 4）和酶标仪检测。

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图 4.采用 LIVE/DEAD BacLight 细菌活力检测和计数试剂盒分析细菌培养物。按照 LIVE/DEAD BacLight 细菌活力检测和计数试剂盒操作方案，使用流式细胞仪对活的（未处理）和死的（乙醇处理）金黄色葡萄球菌（图 A 和图 C）和大肠杆菌（图 B 和图 D）进行染色和分析。根据绿色或红色荧光与侧向散射图（图 A 和图 B），对细菌群体和微珠群体分别进行圈门区分（左框和右框）。细菌群体继而以红色荧光-绿色荧光散点图的形式显示（图 C 和图 D）。每毫升活细菌和死细菌可以从荧光-侧向散射图或绿色荧光-红色荧光散点图中计算得到，可以根据哪一个图能更好地将活细胞群体和死细胞群体分开选择。活细胞群体和死细胞群体在这些散点图中的位置可能取决于细菌类型和革兰氏阴阳性。一些样品的散点图结果可能会落在限定的区域以外，需要进行评估后适当地调整（例如，参见图 D）。

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LIVE/DEAD 酵母细胞活力检测试剂盒可轻松、可靠地定量检测单一培养物或混合培养物。每个试剂盒均可根据细胞膜完整性/代谢活性和真菌细胞壁标记进行双色区分。

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酵母细胞活性检测试剂盒（图 5）含有 FUN 1 染料和植物细胞壁钙荧光白 M2R，其中 FUN 1 染料利用活细胞群体的质膜完整性和代谢活性将黄绿荧光细胞内染色转化为橘红色囊泡结构，而植物细胞壁钙荧光白 M2R 使用蓝色荧光标记细胞壁几丁质。

LIVE/DEAD FungaLight 酵母细胞活力检测试剂盒使用 2 种核酸染色剂——SYTO9 绿色荧光染色剂和 PI 红色荧光染色剂（图 6）。单独使用时，SYTO 9 会对酵母群体中的所有酵母进行染色；而 PI 只进入细胞膜受损的酵母，导致 SYTO 9 荧光减弱。因此，细胞膜未受损的活酵母发出绿色荧光，而细胞膜受损的死酵母发出红色荧光。

图 6.使用 SYTO 9 染料和 PI 进行染色，并使用 BD FACSCalibur 流式细胞分析系统进行分析 (Becton Dickinson and Co.) 的酵母细胞悬浮液。图 A：未处理的酵母培养液经洗涤并使用 SYTO 9 染料和 PI 按 LIVE/DEAD FungaLight 酵母细胞活力检测试剂盒操作方案说明染色后，前向散射和侧向散射散点图。R1 区含有正常大小的酵母细胞微粒；设置前向散射阈值以排除样品中的碎片。图 B：对混有活酵母细胞和加热灭活酵母细胞样品分析、圈出 R1 后的染色结果。

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使用LIVE/DEAD可固定死细胞染色试剂盒进行流式胞内染色后能够准确区分活细胞和死细胞（图 7）。此外，试剂盒中的染料与蛋白发生共价反应，从而在使用甲醛固定样品（使病原体失活的处理方法）后，染色结果不会发生改变。

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图 7.固定细胞后，LIVE/DEAD 可固定死细胞染料仍保留在细胞内。使用 Invitrogen LIVE/DEAD 可固定水绿色死细胞染色试剂盒对活细胞（左侧峰）和热处理 Jurkat 细胞（右侧峰）的混合物进行染色。(A) 中的细胞没有固定；(B) 中的细胞在 3.7% 甲醛中固定后进行染色。在流式细胞仪上采用 405 nm 激发波长及 ~525 nm 发射波长分析样品。

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