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用于流式细胞术的可固定细胞活性染料
轻松简单地分析出活细胞和死细胞，结果十分可靠。
采用细胞活性染料对活细胞染色并在固定后依然可以保持染色图案，对于细胞内免疫分型至关重要。 从数据中排除死细胞将会实现细胞群更为准确的分离与鉴定。Invitrogen LIVE/DEAD Fixable细胞活性检测试剂盒是一种有助于确认在固定或通透处理后可对细胞活性进行准确评估的可固定活性染料。
这些基于流式细胞术的试剂盒具有如下优势：
- 灵活—14种不同的LIVE/DEAD荧光染料，涵盖 UV、405、488、532、561 及 633nm 激光，灵活满足实验的需求
- 特异—活细胞和死细胞可被清晰的区分；在固定后保存30天，样本仍然可用。
- 简便性—几乎兼容所有染色及免疫分型方案
- 每种LIVE/DEAD都有独特的光谱特征，充分适用于光谱流式细胞仪。
本页内容：
LIVE/DEAD Fixable 细胞活性检测技术介绍
LIVE/DEAD Fixable 流式细胞检测试剂盒是基于荧光反应染料与细胞蛋白（胺）的反应。 这些染料不能穿透活细胞膜，所以仅有细胞表面的蛋白可与染料发生反应，产生微弱染色（图1，活细胞）。 这些反应染料可穿透受损的死细胞细胞膜并对内部和外部的胺进行染色，从而实现更明亮的染色（图1，死细胞）
图1： LIVE/DEAD 可固定死细胞染色原理。 非细胞通透的胺反应染料仅能结合到活细胞的表面，产生非常微弱的荧光。 这些染料可穿透死细胞的细胞膜并与内部的蛋白发生结合，从而产生极强的荧光。
活细胞和死细胞群之间的荧光强度差异通常在50倍以上，因此两者之间可实现完全区分（图 2A）。 此外，染料与蛋白之间的共价结合方式使得在通过福尔马林固定（常用于细胞内的免疫分型以及病原体失活）后依然可以保留活细胞和死细胞群之间的差异（图2B）。而，非可固定细胞活性染料在固定之后会失去染料，比如碘化丙啶（PI）（图3）。
图 2. 固定对LIVE/DEAD染色没有明显影响。LIVE/DEAD Fixable Aqua 细胞活性检测试剂盒用于对活细胞（左峰）和热处理过的 Jurkat 细胞（右峰）进行流式染色。 (A) 中的细胞都没有固定；(B)中的细胞都在 3.7% 福尔马林中固定后进行染色。 在流式细胞仪上采用 405nm 激光激发及 ~525nm 通道检测荧光来分析样品。
图 3. 固定对PI染色有着明显影响。碘化丙啶(PI)用于对活细胞（左峰）和热处理过的 Jurkat 细胞（右峰）进行流式染色。 (A) 中的细胞都没有固定；(B)中的细胞都在 3.7% 福尔马林中固定后进行染色。 在流式细胞仪上采用 488nm 激光激发及 ~617nm 通道检测荧光来分析样品。
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图 4. LIVE/DEAD的荧光溢出很小，可以实现更大、更加准确的流式实验。用LIVE/DEAD Fixable Near IR (876)流式细胞活性检测试剂盒标记的人PBMC ，用于808 nm激光激发（货号 L34981）、CD4 Alexa Fluor 647流式抗体（货号 51-0049-42）和 CD8 APC-Cy7流式抗体。全部由 808 nm 激光激发。
步骤 1：用LIVE/DEAD染色死细胞
使用LIVE/DEAD流式细胞染色实验方案
将 FBS 或 BSA 或蛋白缓冲液浓度最小至 <1%。
步骤 2：如果染色细胞内蛋白或保存染色后的细胞，请使用流式固定破膜缓冲液（货号88-8824-00）。请勿在 LIVE/DEAD加入前使用固定试剂。
步骤 3：最后用流式抗体对细胞进行染色。
可以在Panel Builder流式配色工具上选择合适的荧光染料、克隆以及试剂。
还可以参考流式细胞术细胞内染色方案。
活细胞与死细胞的画门方法
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图 5. LIVE/DEAD是与细胞表面蛋白结合，所以活细胞的荧光会弱。死细胞将是最右边的细胞群；当LIVE/DEAD穿过受损的细胞膜并与内部蛋白结合时，死细胞会表现出明亮的信号。中间细胞群是结构破损的细胞，它们会比死细胞吸收更少的染料。Jurkat细胞与LIVE/DEAD Fixable Lime (506)细胞活性检测试剂盒一起孵育，由405 nm激光激发20分钟，然后固定。死细胞是由热处理诱导的。
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图 6. 不同 LIVE/DEAD 荧光染料染色的Jurkat细胞直方图。死细胞群是由热处理产生的。细胞样品用LIVE/DEAD Fixable细胞活性检测试剂盒染色 20 分钟。
| LIVE/DEAD Fixable Blue 荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Violet 荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Lime 荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Aqua 荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Yellow 荧光染料 | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 测定基础 | LIVE/DEAD可固定细胞死活染色试剂盒是灵活的细胞活性检测染料，可根据细胞膜完整性以及与胺基发生反应来区分活细胞和死细胞。 细胞可被固定以便进行细胞内抗原检测，而不会出现传统细胞染色方法产生的细胞损失。 并可根据流式细胞术结果轻松排除死亡细胞。 | |||||
| 读取 | 死细胞发出强烈的荧光，而活细胞的荧光强度极低，两者易于区分。 | |||||
| 激光(nm) | UV | 405 | 405 | 405 | 405 | |
| Ex/Em (nm) | 350/450 | 416/451 | 405/506 | 367/526 | 400/575 | |
| 参考文献 |
引用文献
| |||||
| 多重 |
是
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是
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是
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是
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是
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| 染料兼容性 | 不可与Indo-1（蓝色）、DAPI或Hoechst 33342等一起使用 | 不可与 Pacific Blue 染料、CellTrace Violet 染色剂、FxCycle Violet 染色剂、BV421 或 eFluor 450 等一起使用 | 不可与eFluor 506 和Pacific Orange等一起使用。 | 不可与Pacific Green染料、F2N12S凋亡检测试剂盒、AmCyan或BV510等一起使用 | 不可与Pacific Orange染料、Qdot 605、F2N12S凋亡检测试剂盒或BV605等一起使用 | |
| 可固定 |
是
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是
|
是
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是
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是
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| 样品类型 |
活细胞
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| 货 号 | 80 个反应 | L34989 | ||||
| 200 个反应 | L34990 | |||||
| 400 个反应 | L34991 | |||||
| LIVE/DEAD 可固定细胞死活绿色荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Olive 荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Orange 荧光染料 | LIVE/DEAD 可固定细胞死活红色荧光染料 | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 测定基础 | LIVE/DEAD可固定细胞死活染色试剂盒是灵活的细胞活性检测染料，可根据细胞膜完整性以及与胺基发生反应来区分活细胞和死细胞。 细胞可被固定以便进行细胞内抗原检测，而不会出现传统细胞染色方法产生的细胞损失。 并可根据流式细胞术结果轻松排除死亡细胞。 | |||||
| 读取 | 死细胞发出强烈的荧光，而活细胞的荧光强度极低，两者易于区分。 | |||||
| 激光(nm) | 488 | 488 | 561 | 488 | 561 | |
| Ex/Em (nm) | 495/520 | 480/557 | 580/602 | 595/615 | ||
| 参考文献 |
引用文献
| |||||
| 多重 |
是
|
是
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是
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是
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| 染料兼容性 | 不可与NB510、NB530及NB555一起使用 | 可以与NB510、FITC、AF488同时使用；不可与NB555和NB585一起使用 | 可以与NB610同时使用；不可与NY590和NY610一起使用 | 不可与NY610和NY590一起使用 | ||
| 可固定 |
是
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是
|
是
|
是
| ||
| 样品类型 |
活细胞
| |||||
| 货 号 | 80 个反应 | L34977 | L34983 | |||
| 200 个反应 | L34978 | L34984 | ||||
| 400 个反应 | L34979 | L34985 | ||||
| LIVE/DEAD 可固定细胞死活远红外荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Scarlet 荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Near-IR (775) 荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Near-IR (780) 荧光染料 | ||
|---|---|---|---|---|---|
| 测定基础 | LIVE/DEAD可固定细胞死活染色试剂盒是灵活的细胞活性检测染料，可根据细胞膜完整性以及与胺基发生反应来区分活细胞和死细胞。 细胞可被固定以便进行细胞内抗原检测，而不会出现传统细胞染色方法产生的细胞损失。 并可根据流式细胞术结果轻松排除死亡细胞。 | ||||
| 读取 | 死细胞发出强烈的荧光，而活细胞的荧光强度极低，两者易于区分。 | ||||
| 激光(nm) | 633/635 | 633/635 | 633/635 | 633/780 | |
| Ex/Em (nm) | 650/665 | 702/723 | 750/775 | 633/785 | |
| 参考文献 |
引用文献
| ||||
| 多重 |
是
|
是
|
是
|
是
| |
| 染料兼容性 | 不可与NR660一起使用 | 不可与AF700、APC-Cy5.5、NR700和DRAQ5一起使用 | 不可与APC-AF750、APC-Cy7及Vybrant DyeCycle和Ruby荧光染料一起使用 | 不可与APC-AF750和APC-eFluor 780一起使用 | |
| 可固定 |
是
|
是
|
是
|
是
| |
| 样品类型 |
活细胞
| ||||
| 货 号 | 80 个反应 |
L34973
| L34986 |
L34975
| L34992 |
| 200 个反应 |
L10120
| L34987 |
L10119
| L34993 | |
| 400 个反应 |
L34974
| L34988 |
L34976
| L34994 | |
| LIVE/DEAD Fixable Blue 荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Violet 荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Lime 荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Aqua 荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Yellow 荧光染料 | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 测定基础 | LIVE/DEAD可固定细胞死活染色试剂盒是灵活的细胞活性检测染料，可根据细胞膜完整性以及与胺基发生反应来区分活细胞和死细胞。 细胞可被固定以便进行细胞内抗原检测，而不会出现传统细胞染色方法产生的细胞损失。 并可根据流式细胞术结果轻松排除死亡细胞。 | |||||
| 读取 | 死细胞发出强烈的荧光，而活细胞的荧光强度极低，两者易于区分。 | |||||
| 激光(nm) | UV | 405 | 405 | 405 | 405 | |
| Ex/Em (nm) | 350/450 | 416/451 | 405/506 | 367/526 | 400/575 | |
| 参考文献 |
引用文献
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| 多重 |
是
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是
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| 染料兼容性 | 不可与Indo-1（蓝色）、DAPI或Hoechst 33342等一起使用 | 不可与 Pacific Blue 染料、CellTrace Violet 染色剂、FxCycle Violet 染色剂、BV421 或 eFluor 450 等一起使用 | 不可与eFluor 506 和Pacific Orange等一起使用。 | 不可与Pacific Green染料、F2N12S凋亡检测试剂盒、AmCyan或BV510等一起使用 | 不可与Pacific Orange染料、Qdot 605、F2N12S凋亡检测试剂盒或BV605等一起使用 | |
| 可固定 |
是
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是
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是
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是
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是
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| 样品类型 |
活细胞
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| 货 号 | 80 个反应 | L34989 | ||||
| 200 个反应 | L34990 | |||||
| 400 个反应 | L34991 | |||||
| LIVE/DEAD 可固定细胞死活绿色荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Olive 荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Orange 荧光染料 | LIVE/DEAD 可固定细胞死活红色荧光染料 | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 测定基础 | LIVE/DEAD可固定细胞死活染色试剂盒是灵活的细胞活性检测染料，可根据细胞膜完整性以及与胺基发生反应来区分活细胞和死细胞。 细胞可被固定以便进行细胞内抗原检测，而不会出现传统细胞染色方法产生的细胞损失。 并可根据流式细胞术结果轻松排除死亡细胞。 | |||||
| 读取 | 死细胞发出强烈的荧光，而活细胞的荧光强度极低，两者易于区分。 | |||||
| 激光(nm) | 488 | 488 | 561 | 488 | 561 | |
| Ex/Em (nm) | 495/520 | 480/557 | 580/602 | 595/615 | ||
| 参考文献 |
引用文献
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| 多重 |
是
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是
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是
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| 染料兼容性 | 不可与NB510、NB530及NB555一起使用 | 可以与NB510、FITC、AF488同时使用；不可与NB555和NB585一起使用 | 可以与NB610同时使用；不可与NY590和NY610一起使用 | 不可与NY610和NY590一起使用 | ||
| 可固定 |
是
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是
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是
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| 样品类型 |
活细胞
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| 货 号 | 80 个反应 | L34977 | L34983 | |||
| 200 个反应 | L34978 | L34984 | ||||
| 400 个反应 | L34979 | L34985 | ||||
| LIVE/DEAD 可固定细胞死活远红外荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Scarlet 荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Near-IR (775) 荧光染料 | LIVE/DEAD Fixable Near-IR (780) 荧光染料 | ||
|---|---|---|---|---|---|
| 测定基础 | LIVE/DEAD可固定细胞死活染色试剂盒是灵活的细胞活性检测染料，可根据细胞膜完整性以及与胺基发生反应来区分活细胞和死细胞。 细胞可被固定以便进行细胞内抗原检测，而不会出现传统细胞染色方法产生的细胞损失。 并可根据流式细胞术结果轻松排除死亡细胞。 | ||||
| 读取 | 死细胞发出强烈的荧光，而活细胞的荧光强度极低，两者易于区分。 | ||||
| 激光(nm) | 633/635 | 633/635 | 633/635 | 633/780 | |
| Ex/Em (nm) | 650/665 | 702/723 | 750/775 | 633/785 | |
| 参考文献 |
引用文献
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| 多重 |
是
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| 染料兼容性 | 不可与NR660一起使用 | 不可与AF700、APC-Cy5.5、NR700和DRAQ5一起使用 | 不可与APC-AF750、APC-Cy7及Vybrant DyeCycle和Ruby荧光染料一起使用 | 不可与APC-AF750和APC-eFluor 780一起使用 | |
| 可固定 |
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| 样品类型 |
活细胞
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| 货 号 | 80 个反应 |
L34973
| L34986 |
L34975
| L34992 |
| 200 个反应 |
L10120
| L34987 |
L10119
| L34993 | |
| 400 个反应 |
L34974
| L34988 |
L34976
| L34994 | |
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图7. 在Cytek Aurora 光谱流式上的LIVE/DEAD Fixable荧光染料特点
图8. 在Bigfoot 光谱流式分选仪上的LIVE/DEAD Fixable荧光染料特点
LIVE/DEAD Fixable 细胞活性检测荧光染料尝鲜装
不确定哪种细胞活性染料更适合于您的实验，或者您的实验还需要更多的灵活性？ 试试我们的 LIVE/DEAD Fixable 细胞活性检测荧光染料尝鲜装，其中含有足够每种颜色染料 40 个反应的量。
LIVE/DEAD Fixable 荧光染料的补偿微球
在使用LIVE/DEAD Fixable荧光染料或胺反应染料时，Invitrogen ArC 胺反应补偿微球都会表现出一致、准确并且方便使用的特点，方便流式细胞仪的补偿调节。这些试剂盒的优点包括：
- 无需对细胞进行热处理
- 针对 LIVE/DEAD Fixable荧光染料优化
- 快速而简单的流式细胞补偿微球
- 无需稀少珍贵的样品用于补偿调节
- 准确并一致的结果
图. ArC 补偿微球与LIVE/DEAD Fixable Violet 细胞活性检测试剂盒 (货号 V34955) 共同染色，并通过流式进行分析。使用 LIVE/DEAD Fixable Violet 荧光染料与ArC 补偿微球中的阳性和阴性微球共同进行染色、清洗，并使用有 405/7nm 激光和 450/50 nm 检测通道的流式细胞仪进行分析。结果显示清晰、分群明显的正峰和负峰。
资源
流式胞内染色示意小视频—细胞因子和核内靶点检测
流式细胞术学习中心—获取流式细胞术学习资源，以轻松计划、顺利开展流式实验。
Panel Builder流式配色工具—这款简单、定制化的在线工具可助您轻松解决多色流式实验的配色难题。