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Invitrogen SYTOX死细胞染色剂难以穿透完整的细胞膜且在与dsDNA结合后具有更强的荧光信号,因而成为我们最出色的死细胞染色剂(图 1)。 SYTOX死细胞染色剂在水相介质中不发荧光,因此在使用时仅需直接加入细胞中便可进行观察,并不需要洗涤步骤。该系列染色剂可提供多种颜色形式并兼容多种激光,具有高度灵活性。 这类染色剂可用于多种平台,包括荧光显微镜、流式细胞仪和微孔板。
图1: 用SYTOX 死细胞染色剂进行活细胞gating。 在采用 488 nm和 635 nm 激发光进行流式细胞仪分析前,经热处理和未经热处理的人类外周血白细胞通过 Invitrogen Alexa Fluor 488 染料偶联的抗人CD3抗体、R-PE偶联的抗人CD8抗体以及 5 nM SYTOX Red 死细胞染色剂进行了染色。 (A) 展示两种细胞群分布的直方图 — 死细胞发出明显的 Invitrogen SYTOX Red 荧光信号,而活细胞并无荧光。 (B) 活细胞设门后CD8和CD3染色双参数图。
经典的非膜通透的DNA结合染料包括碘化丙啶(图 2)和 7-AAD。 这两种染料可被 488 或 532 nm 激光激发并在 610 nm 以上波长散射,因而广泛用于流式细胞术活性检测。
图 2. 采用碘化丙啶进行死细胞染色。 用 10 uM 喜树碱处理 Jurkat 细胞4小时,然后采用带有 Annexin V Alexa Flour 488 及碘化丙啶的死细胞凋亡试剂盒进行染色。 在 Invitrogen Attune 流式细胞仪上采用 488 nm 激发波长以及 530/30 和 575/24 带通滤波器对细胞进行分析,并用标准的 100 uL/min 收集速率进行收集。 死(坏死)细胞相对于凋亡或活细胞具有更高的碘化丙啶水平。 A = 凋亡细胞,V = 活细胞,N = 坏死细胞。
Invitrogen CellTrace Calcein AM 染料可被动上样进粘附和非粘附的细胞中。 这些膜通透性的酯酶底物可作为活性探测器,检测激活荧光所必需的酶活性,以及相应荧光产品在细胞内发生滞留所必需的细胞膜完整性。 该染料可发蓝色、紫色以及绿色荧光,非常适合于活细胞的短期染色并用于多重流式细胞实验(图 3)。
图 3. CellTrace 钙黄绿素 AM 染色活细胞。 利用钙黄绿素 AM 和乙锭均二聚物-1 对乙醇固定的人的活 B 细胞混合物进行 1:1 染色。 5分钟后,用488 nm激发波长进行流式细胞仪分析。 二元频率分布结果显示标记有绿色荧光(530 nm)的活细胞群体和标记有红色荧光(585 nm)的死细胞群体被清晰的区别开来。
Invitrogen LIVE/DEAD Violet 活性/活力试剂盒提供了一种双色荧光细胞活性和活力检测的方法,基于对细胞健康公认的标准——即代表细胞活性的质膜完整性以及细胞活力的胞内酯酶活力——对活细胞和死细胞同时进行检测(图 4)。 Invitrogen CellTrace Calcein Violet AM 及Invitrogen LIVE/DEAD Fixable Aqua 荧光反应染料是适用于该应用的最佳染料;这两种染料均利用紫色激光,使得其他激光通道可用其他更为传统的标记。
图4: 染色热灭活及未处理 Jurkat 细胞。 根据 LIVE/DEAD Violet 活性/活力试剂盒中的实验方法对 Jurket 胞进行染色。 采用带有 405 nm 激光的流式细胞仪对细胞进行分析:450/50 nm 带通滤光器用于calcein violet标记的活细胞 (L),525/50 nm 带通滤光器用于 auqa 染料标记的死细胞 (D)。
SYTOX Blue 死细胞染色剂 | SYTOX Green 死细胞染色剂 | SYTOX Orange 死细胞染色剂 | SYTOX AADvanced 死细胞染色试剂盒 | SYTOX Red 死细胞染色剂 | SYTOX
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检测基本原理 | SYTOX 死细胞染料可进入细胞膜受损的细胞并与 dsDNA/RNA 发生结合。 这些染料在核酸结合前几乎没有荧光。 它们不能穿透完整的细胞膜并且不能进行固定。 它们可能还可用于固定细胞 DNA 含量细胞周期分析,但必须加入 RNase。 并可根据流式细胞分析结果轻松排除死细胞。 | ||||||||
读取 | 死细胞具有高度的荧光;活细胞不会发生染色。 | ||||||||
激光(nm) | 405 | 488 | 488 | 532 | 488 | 532 | 561 | 633/635 | 多种 |
Ex/Em (nm) | 444/480 | 504/523 | 547/570 | 546⁄647 | 640/658 | 多种 | |||
参考文献 | 引用文献 | ||||||||
多重 |
是
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是
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是
| 是 |
是
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是
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染料相容性 | 不可与 Invitrogen Pacific Blue 染料、CellTrace Violet 染色剂、 FxCycle Violet染色剂、LIVE/DEAD Fixable Violet 染色剂、BV421 或 eFluor 450结合使用 | 不可与 Invitrogen FITC、Alexa Fluor 488、GFP、CellTrace CSFE 染色剂或 LIVE/DEAD Fixable Green 染色剂结合使用 | 不可与 Invitrogen R-PE、碘化丙啶、SYTOX AADvanced 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 和 PE-Texas Red 串联染料一起使用 | 不可与碘化丙啶、SYTOX orange 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 和 PE-Texas Red 串联染料一起使用 | 不可与 Invitrogen APC、 Alexa Fluor 647、FxCycle Far Red 和 CellTrace Far Red 染色剂一起使用 |
—
| |||
可固定 |
否
|
否
|
否
| 否 |
否
|
否
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样品类型 |
活细胞
| ||||||||
产品规格 |
1,000 个反应
|
1,000 个反应
|
1,000 个反应
| 参见下文 |
1,000 个反应
|
每中染色剂 50 个反应
| |||
货 号 | 100 个反应 (S10349), 500 个反应 (S10274) |
碘化丙啶 | 7-AAD(7-氨基放线菌素D) | |||
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检测基本原理 | 经典 DNA 结合死细胞染料可进入细胞膜受损的细胞并与 dsDNA/RNA 发生结合。 它们不能穿透完整的细胞膜并且不能进行固定。 它们可能还可用于固定细胞 DNA 含量细胞周期分析,但需要加入 RNase。 并可根据流式细胞分析结果轻松排除死细胞。 | |||
读取 | 死细胞具有高度的荧光;活细胞不会发生染色。 | |||
激光(nm) | 488 | 532 | 488 | 532 |
Ex/Em (nm) | 535/617 | 546/647 | ||
参考文献 |
引用文献
|
引用文献
| ||
多重 |
是
|
是
| ||
染料相容性 | 不可与 Invitrogen R-PE、碘化丙啶、SYTOX SYTOX Orange 死细胞染色剂、SYTOX AADvanced 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 或 PE-Texas Red 串联染料一起使用 | 不可与 R-PE、碘化丙啶、SYTOX SYTOX Orange 死细胞染色剂、SYTOX AADvanced 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 或 PE-Texas Red 串联染料一起使用 | ||
可固定 |
否
|
否
| ||
样品类型 |
活细胞
| |||
产品规格 |
100 mg
|
100 mg
| ||
货 号 |
CellTrace Calcein Blue, AM | CellTrace Calcein Violet, AM | CellTrace Calcein Green, AM | |
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检测基本原理 | CellTrace calcein AM 染料在 AM 酯完整时不发荧光并可穿过所有细胞的细胞膜。 一旦进入活细胞后,活性酯酶将会切除 AM 基团并使得染料产生荧光。 死细胞中的 AM 基团不会被切除并且染料也不会发出荧光。 最佳的使用方式是采用短期标记作为染料,一旦 AM 基团被切除,便可在数小时内被主动转运至细胞外。 | ||
读取 | 活细胞发出高亮度荧光;死细胞荧光可忽略不计 | ||
激光(nm) | UV | 405 | 488 |
Ex/Em (nm) | 322/425 | 400/452 | 495/515 |
参考文献 |
引用文献
|
引用文献
|
引用文献
|
多重 |
是
|
是
|
是
|
染料相容性 | 不可与 Indo-1(蓝色)、DAPI 或 Hoechst 33342 一起使用 | 不可与 Invitrogen Pacific Blue 染料、CellTrace Violet 染色剂、 FxCycle Violet染色剂、LIVE/DEAD Fixable Violet 染色剂、BV421 或 eFluor 450 结合使用 | 不可与 Invitrogen FITC、Alexa Fluor 488、GFP或CellTrace CSFE 染色剂一起使用 |
可固定 |
否
|
否
|
否
|
样品类型 |
活细胞
| ||
产品规格 |
20 x 50 µg
|
20 x 50 µg
|
20 x 50 µg
|
货 号 |
检测基本原理 | LIVE/DEAD Violet 活性/活力试剂盒提供了一种双色荧光细胞活性和活力检测的方法,基于对细胞健康公认的标准——即代表细胞活性的质膜完整性以及细胞活力的胞内酯酶活力——对活细胞和死细胞同时进行检测。 | |
荧光标记 | Calcein Violet, AM | LIVE/DEAD Aqua 染色剂 |
读取 | 活细胞发出高亮度荧光;死细胞荧光明显更弱 | 活细胞发出可忽略不计的荧光;死细胞发出高亮度荧光 |
激光(nm) | 405 | 405 |
Ex/Em (nm) | 400/452 | 367/526 |
多重 |
是
|
是
|
染料相容性 | 不可与 Invitrogen Pacific Blue 染料、CellTrace Violet 染色剂、 FxCycle Violet染色剂、LIVE/DEAD Fixable Violet 染色剂、BV421 或 eFluor 450 结合使用 | 不可与Invitrogen Pacific Green 染料、F2N12S 凋亡检测试剂盒、AmCyan 或 BV510 一起使用 |
可固定 |
否
| |
样品类型 |
活细胞
| |
产品规格 |
20 个反应
| |
货 号 |
SYTOX Blue 死细胞染色剂 | SYTOX Green 死细胞染色剂 | SYTOX Orange 死细胞染色剂 | SYTOX AADvanced 死细胞染色试剂盒 | SYTOX Red 死细胞染色剂 | SYTOX
| ||||
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检测基本原理 | SYTOX 死细胞染料可进入细胞膜受损的细胞并与 dsDNA/RNA 发生结合。 这些染料在核酸结合前几乎没有荧光。 它们不能穿透完整的细胞膜并且不能进行固定。 它们可能还可用于固定细胞 DNA 含量细胞周期分析,但必须加入 RNase。 并可根据流式细胞分析结果轻松排除死细胞。 | ||||||||
读取 | 死细胞具有高度的荧光;活细胞不会发生染色。 | ||||||||
激光(nm) | 405 | 488 | 488 | 532 | 488 | 532 | 561 | 633/635 | 多种 |
Ex/Em (nm) | 444/480 | 504/523 | 547/570 | 546⁄647 | 640/658 | 多种 | |||
参考文献 | 引用文献 | ||||||||
多重 |
是
|
是
|
是
| 是 |
是
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是
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染料相容性 | 不可与 Invitrogen Pacific Blue 染料、CellTrace Violet 染色剂、 FxCycle Violet染色剂、LIVE/DEAD Fixable Violet 染色剂、BV421 或 eFluor 450结合使用 | 不可与 Invitrogen FITC、Alexa Fluor 488、GFP、CellTrace CSFE 染色剂或 LIVE/DEAD Fixable Green 染色剂结合使用 | 不可与 Invitrogen R-PE、碘化丙啶、SYTOX AADvanced 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 和 PE-Texas Red 串联染料一起使用 | 不可与碘化丙啶、SYTOX orange 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 和 PE-Texas Red 串联染料一起使用 | 不可与 Invitrogen APC、 Alexa Fluor 647、FxCycle Far Red 和 CellTrace Far Red 染色剂一起使用 |
—
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可固定 |
否
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否
|
否
| 否 |
否
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否
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样品类型 |
活细胞
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产品规格 |
1,000 个反应
|
1,000 个反应
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1,000 个反应
| 参见下文 |
1,000 个反应
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每中染色剂 50 个反应
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货 号 | 100 个反应 (S10349), 500 个反应 (S10274) |
碘化丙啶 | 7-AAD(7-氨基放线菌素D) | |||
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检测基本原理 | 经典 DNA 结合死细胞染料可进入细胞膜受损的细胞并与 dsDNA/RNA 发生结合。 它们不能穿透完整的细胞膜并且不能进行固定。 它们可能还可用于固定细胞 DNA 含量细胞周期分析,但需要加入 RNase。 并可根据流式细胞分析结果轻松排除死细胞。 | |||
读取 | 死细胞具有高度的荧光;活细胞不会发生染色。 | |||
激光(nm) | 488 | 532 | 488 | 532 |
Ex/Em (nm) | 535/617 | 546/647 | ||
参考文献 |
引用文献
|
引用文献
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多重 |
是
|
是
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染料相容性 | 不可与 Invitrogen R-PE、碘化丙啶、SYTOX SYTOX Orange 死细胞染色剂、SYTOX AADvanced 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 或 PE-Texas Red 串联染料一起使用 | 不可与 R-PE、碘化丙啶、SYTOX SYTOX Orange 死细胞染色剂、SYTOX AADvanced 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 或 PE-Texas Red 串联染料一起使用 | ||
可固定 |
否
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否
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样品类型 |
活细胞
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产品规格 |
100 mg
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100 mg
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货 号 |
CellTrace Calcein Blue, AM | CellTrace Calcein Violet, AM | CellTrace Calcein Green, AM | |
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检测基本原理 | CellTrace calcein AM 染料在 AM 酯完整时不发荧光并可穿过所有细胞的细胞膜。 一旦进入活细胞后,活性酯酶将会切除 AM 基团并使得染料产生荧光。 死细胞中的 AM 基团不会被切除并且染料也不会发出荧光。 最佳的使用方式是采用短期标记作为染料,一旦 AM 基团被切除,便可在数小时内被主动转运至细胞外。 | ||
读取 | 活细胞发出高亮度荧光;死细胞荧光可忽略不计 | ||
激光(nm) | UV | 405 | 488 |
Ex/Em (nm) | 322/425 | 400/452 | 495/515 |
参考文献 |
引用文献
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引用文献
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引用文献
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多重 |
是
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是
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是
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染料相容性 | 不可与 Indo-1(蓝色)、DAPI 或 Hoechst 33342 一起使用 | 不可与 Invitrogen Pacific Blue 染料、CellTrace Violet 染色剂、 FxCycle Violet染色剂、LIVE/DEAD Fixable Violet 染色剂、BV421 或 eFluor 450 结合使用 | 不可与 Invitrogen FITC、Alexa Fluor 488、GFP或CellTrace CSFE 染色剂一起使用 |
可固定 |
否
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否
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否
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样品类型 |
活细胞
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产品规格 |
20 x 50 µg
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20 x 50 µg
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20 x 50 µg
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货 号 |
检测基本原理 | LIVE/DEAD Violet 活性/活力试剂盒提供了一种双色荧光细胞活性和活力检测的方法,基于对细胞健康公认的标准——即代表细胞活性的质膜完整性以及细胞活力的胞内酯酶活力——对活细胞和死细胞同时进行检测。 | |
荧光标记 | Calcein Violet, AM | LIVE/DEAD Aqua 染色剂 |
读取 | 活细胞发出高亮度荧光;死细胞荧光明显更弱 | 活细胞发出可忽略不计的荧光;死细胞发出高亮度荧光 |
激光(nm) | 405 | 405 |
Ex/Em (nm) | 400/452 | 367/526 |
多重 |
是
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是
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染料相容性 | 不可与 Invitrogen Pacific Blue 染料、CellTrace Violet 染色剂、 FxCycle Violet染色剂、LIVE/DEAD Fixable Violet 染色剂、BV421 或 eFluor 450 结合使用 | 不可与Invitrogen Pacific Green 染料、F2N12S 凋亡检测试剂盒、AmCyan 或 BV510 一起使用 |
可固定 |
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样品类型 |
活细胞
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产品规格 |
20 个反应
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