流式细胞样品制备

样品制备是实现流式细胞术实验的统计学价值的重要步骤。用于流式细胞术的样品制备试剂包括细胞表面染色、胞内和转录因子染色缓冲液套装、细胞裂解试剂、封闭试剂和细胞分离磁珠。使用这些缓冲液的好处包括:

  • 保留原有的生物学特性
  • 减少背景染色
  • 使用优化的套装可以更快、更轻松地进行样品制备

阅读下表,选择适合您实验的缓冲液。

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流式细胞分析缓冲液选择指南

 Cal-Lyse 溶液高回收裂解解决方案
用途
  • 预混裂解液,用于全血或骨髓单克隆抗体染色后裂解红细胞

了解更多:细胞储存和裂解缓冲液更多信息
  • 预混、无固定剂的红细胞裂解溶液,用于从全血中去除红细胞,以进行流式分析,同时将稀有血细胞群的损失降至最低
了解更多:细胞储存和裂解缓冲液更多信息
组分
  • 全血裂解缓冲液
  • 甲醛固定剂
  • 不含固定剂的全血裂解缓冲液
规格25 mL100 mL500 mL
货号GAS010GAS010S100HYL250
监管状态用于体外诊断。用于体外诊断。
何时使用

用途声明:

旨在协助各种人源样品(包括血液和骨髓)中已用单克隆抗体染色的白细胞的流式分析。

用途声明:

旨在用于从全血中去除红细胞,以进行流式分析,同时将稀有血细胞群的损失降至最低。

 eBioscience 流式细胞分析染色缓冲液
用途
  • 用于抗体和细胞稀释,以及表面染色和流式细胞分析涉及的洗涤步骤
  • 可用于所有细胞类型(人、小鼠等)
  • 可调整体积,以用于管和孔板
了解更多:流式细胞分析染色缓冲液相关信息
组分缓冲盐水溶液:
  • 胎牛血清
  • 叠氮化钠(0.09%)作为防腐剂
规格200 mL
货号00-4222-57
 eBioscience 胞内固定&透化缓冲液套装FIX&PERM细胞固定&透化试剂盒
用途
  • 对细胞质内的蛋白、分泌蛋白(如趋化因子和细胞因子)进行染色
  • 不建议用于核内染色
  • 可用于所有细胞类型(人、小鼠等)
  • 可调整体积,以用于管和孔板

了解更多: Fix&Perm细胞内固定透化缓冲液套装有关信息
  • 对细胞内标志物进行染色,比如细胞质酶或细胞核酶、肿瘤蛋白、细胞因子和免疫球蛋白等
  • 温和地固定和透化细胞,同时保证细胞形态的散射特性不受影响
  • 可用于所有细胞类型(人、小鼠等)
  • 可调整体积,以用于管和孔板
了解更多:FIX&PERM细胞固定透化试剂盒有关信息
组分
  • IC 固定缓冲液
  • 透化缓冲液(10X)
  • 固定剂(试剂 A)
  • 透化剂(试剂 B)
规格1 试剂盒50 次实验
货号88-8824-00GAS003
监管状态RUO – 仅供科研使用。不可用于诊断目的。GPR - 通用试剂。
何时使用仅用于研究(即任何样品类型的研究实验)可用在常规实验室,可用于诊断目的人源样品的收集、制备和检测。
 eBioscience Foxp3/转录因子染色缓冲液套装
用途
  • 针对转录因子和细胞核蛋白(如Foxp3和Ki-67)的抗体染色进行配制和优化
  • 也适用于细胞核和细胞质(细胞因子和转录因子)同时染色
  • 可用于所有细胞类型(人、小鼠等)
  • 可调整体积,以用于管和孔板
了解更多:Foxp3/转录因子染色缓冲液套装有关信息
组分
  • 固定/透化浓缩液
  • 固定/透化稀释液
  • 透化缓冲液 (10X)
规格1 试剂盒
货号00-5523-00
 eBioscience Super Bright 染色缓冲液
用途
  • 适用于同一实验中共用多种Super Bright染料偶联抗体。该缓冲液有助于防止非特异性聚合物相互作用,避免产生需补偿调节的数据
  • 可用于所有细胞类型(人、小鼠等)
  • 可调整体积,以用于管和孔板
了解更多:Super Bright 染料抗体相关信息
组分
  • Super Bright染色缓冲液
规格100 次实验
货 号SB-4401-42
 Cal-Lyse 溶液高回收裂解解决方案
用途
  • 预混裂解液,用于全血或骨髓单克隆抗体染色后裂解红细胞

了解更多:细胞储存和裂解缓冲液更多信息
  • 预混、无固定剂的红细胞裂解溶液,用于从全血中去除红细胞,以进行流式分析,同时将稀有血细胞群的损失降至最低
了解更多:细胞储存和裂解缓冲液更多信息
组分
  • 全血裂解缓冲液
  • 甲醛固定剂
  • 不含固定剂的全血裂解缓冲液
规格25 mL100 mL500 mL
货号GAS010GAS010S100HYL250
监管状态用于体外诊断。用于体外诊断。
何时使用

用途声明:

旨在协助各种人源样品(包括血液和骨髓)中已用单克隆抗体染色的白细胞的流式分析。

用途声明:

旨在用于从全血中去除红细胞,以进行流式分析,同时将稀有血细胞群的损失降至最低。

 eBioscience 流式细胞分析染色缓冲液
用途
  • 用于抗体和细胞稀释,以及表面染色和流式细胞分析涉及的洗涤步骤
  • 可用于所有细胞类型(人、小鼠等)
  • 可调整体积,以用于管和孔板
了解更多:流式细胞分析染色缓冲液相关信息
组分缓冲盐水溶液:
  • 胎牛血清
  • 叠氮化钠(0.09%)作为防腐剂
规格200 mL
货号00-4222-57
 eBioscience 胞内固定&透化缓冲液套装FIX&PERM细胞固定&透化试剂盒
用途
  • 对细胞质内的蛋白、分泌蛋白(如趋化因子和细胞因子)进行染色
  • 不建议用于核内染色
  • 可用于所有细胞类型(人、小鼠等)
  • 可调整体积,以用于管和孔板

了解更多: Fix&Perm细胞内固定透化缓冲液套装有关信息
  • 对细胞内标志物进行染色,比如细胞质酶或细胞核酶、肿瘤蛋白、细胞因子和免疫球蛋白等
  • 温和地固定和透化细胞,同时保证细胞形态的散射特性不受影响
  • 可用于所有细胞类型(人、小鼠等)
  • 可调整体积,以用于管和孔板
了解更多:FIX&PERM细胞固定透化试剂盒有关信息
组分
  • IC 固定缓冲液
  • 透化缓冲液(10X)
  • 固定剂(试剂 A)
  • 透化剂(试剂 B)
规格1 试剂盒50 次实验
货号88-8824-00GAS003
监管状态RUO – 仅供科研使用。不可用于诊断目的。GPR - 通用试剂。
何时使用仅用于研究(即任何样品类型的研究实验)可用在常规实验室,可用于诊断目的人源样品的收集、制备和检测。
 eBioscience Foxp3/转录因子染色缓冲液套装
用途
  • 针对转录因子和细胞核蛋白(如Foxp3和Ki-67)的抗体染色进行配制和优化
  • 也适用于细胞核和细胞质(细胞因子和转录因子)同时染色
  • 可用于所有细胞类型(人、小鼠等)
  • 可调整体积,以用于管和孔板
了解更多:Foxp3/转录因子染色缓冲液套装有关信息
组分
  • 固定/透化浓缩液
  • 固定/透化稀释液
  • 透化缓冲液 (10X)
规格1 试剂盒
货号00-5523-00
 eBioscience Super Bright 染色缓冲液
用途
  • 适用于同一实验中共用多种Super Bright染料偶联抗体。该缓冲液有助于防止非特异性聚合物相互作用,避免产生需补偿调节的数据
  • 可用于所有细胞类型(人、小鼠等)
  • 可调整体积,以用于管和孔板
了解更多:Super Bright 染料抗体相关信息
组分
  • Super Bright染色缓冲液
规格100 次实验
货 号SB-4401-42


细胞分离和扩增试剂

 用于细胞分离的DynabeadsMagniSort 磁珠细胞分离技术
用途
  • 细胞分离
  • 细胞活化与扩增
  • 临床和非临床研究
  • 细胞分离,包括细胞富集和去除
技术Dynabeads活化与扩增技术模拟体内T细胞活化。

该产品适用于人类和小鼠的基础研究以及相关的临床研究。

了解更多
从T细胞特异性混合液开始,使用MagniSort平台获得富集T细胞,比传统柱分离方法更简单、快速,且更节约成本。

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用于胞内和胞质染色的流式细胞分析缓冲液

固定剂对于保存样本以供以后使用、或查看胞内或核内靶点是必需的。即用型固定套装针对流式细胞分析应用进行了优化。这些试剂的优势如下:

  • 细胞染色的方法考虑到了靶蛋白的位置
  • 固定和透化方法维持细胞的形态光散射特性不变
  • 试剂盒中的试剂有助于减少背景染色

选择合适的活化试剂将取决于 (1) 细胞类型,(2) 目标蛋白的表达水平和动力学,以及 (3) 实验条件。

了解更多:eBioscience 流式细胞分析染色缓冲液Invitrogen FIX PERM™ 细胞透化试剂盒(RUO 和 GPR)、胞内固定和透化缓冲液套装 (RUO) 和 eBioscience Foxp3/转录缓冲液套装 (RUO) 相关信息。 

流式细胞术样品制备工作流程

图1.胞质和胞内染色流程。在选择适当的缓冲液和染色方案时,目标蛋白在细胞内的位置是一个重要的考虑因素。对于细胞因子或磷酸化蛋白,在染色前需要按计划进行刺激剂和蛋白质转运抑制剂的处理。


胞质和细胞因子染色试剂盒

活化细胞通常表达更高水平的转录因子、细胞因子、趋化因子和可通过流式细胞术检测到的其他分子。流式胞内蛋白染色通常需要固定步骤来交联蛋白质和稳定细胞膜,以及透化步骤使得抗体接触细胞内抗原。Invitrogen eBioscience 胞内固定和透化缓冲液旨在优化细胞器和囊泡中的胞质和分泌蛋白的检测。优势包括:

了解更多:eBioscience 流式细胞分析染色缓冲液Invitrogen FIX &PERM™ 细胞透化试剂盒相关信息。

两个点图,左边是未受刺激的,右边是受刺激的,细胞转移到右上角

图2.巨噬细胞中小鼠 CCL3 (MIP-1α) 的染色结果。在有 Invitrogen eBioscience 蛋白质转运抑制剂混合物(货号 00-4980) 存在的情况下,未刺激(左)或用 LPS(货号 00-4976)(右)刺激5小时的巯基乙酸诱导的 BALB/c 小鼠腹腔巨噬细胞。使用 Invitrogen eBioscience 胞内固定&透化缓冲液套装(货号 88-8824)和相应实验方案,用 Anti-Mouse CD11b PerCP-Cyanine5.5(货号 45-0112) 和抗小鼠 CCL3 (MIP-1α) PE(货号12-7532)进行胞内染色。分析涉及 Invitrogen eBioscience 可固定活力染料 eFluor 450(货号 65-0863)测定的活细胞总数。


细胞核染色试剂盒

流式细胞术可检测异质细胞群体中离散免疫细胞亚群中的转录因子,是一种分析免疫反应的灵敏方法。在进行任何转录因子染色分析之前,请参阅以下有关胞内染色缓冲液的部分。优势包括:

  • 兼容所有荧光基团,包括聚合物染料,如 Brilliant Violet 和 Super Bright 染料。
  • 较低的信噪比,有助于检测低丰度信号。
  • FoxP3 染色缓冲液已在许多针对转录因子的抗体染色中进行了测试,并针对核蛋白染色进行了优化。

了解有关 Foxp3 缓冲液的更多信息,并查看数据

两个点图,左边是未受刺激的,右边是受刺激的,细胞转移到右上角

图 3.在刺激后的 NK 细胞中小鼠 E4BP4 (NFIL3) 的染色结果。未刺激的小鼠脾脏细胞(左)或用Invitrogen eBioscience 小鼠 IL-15/IL-15R 复合无载体重组蛋白(货号 34-8152 [右])刺激过夜的小鼠脾脏细胞(右),用抗小鼠NK1.1 PE-Cyanine7(货号 25-5941) 和抗小鼠 E4BP4 (NFIL3) PE(货号 12-5927)进行染色。使用Invitrogen eBioscience Foxp3/转录因子染色缓冲套装(货号 00-5523)和相应实验方案对 E4BP4 进行胞内染色。分析淋巴细胞门中的细胞。
 

五步实现流式胞内染色

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资源

流式细胞分析实验方案

光谱流式基础知识

流式胞内染色示意小视频—细胞因子和核内靶点检测

流式细胞术学习中心—获取流式细胞术学习资源,以轻松计划、顺利开展流式实验。

Panel Builder流式配色工具—这款简单、定制化的在线工具可助您轻松解决多色流式实验的配色难题。

5步法实验资源

支持

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不可转售。Super Bright聚合物染料由Becton, Dickinson and Company授权销售。

*IVD——体外诊断使用
** GPR——通用试剂。