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细胞溶质中的细胞内 pH 值通常约为 6.8-7.4，而细胞酸性细胞器中的细胞内 pH 值通常约为 4.5-6.0。与细胞内游离 Ca2+ 浓度可能快速变化100倍不同，细胞内 pH 值的变化仅为一个 pH 单位的几分之一，并且这种变化可能发生得非常缓慢。
我们提供用于跟踪细胞溶质或特定细胞器中细胞内 pH 值的一系列指示剂。我们还提供靶向细胞器的染料偶联物以及构建独特荧光探针的活性染料，以适应特定应用。
用于跟踪细胞溶质 pH 值的指示剂
- 用于多重检测的红色与绿色染料
- 可选择比率式或基于强度的测量
可以使用荧光强度或比率式测量方法在生理范围内进行灵敏的 pH 值测定。BCECF 及其 AM 酯可用于在窄 pH 值范围内进行比率式测量，而 pHrodo 染料可在 pH 2 至 pH 9 范围内提供信号强度调制及荧光波长选择。
用 pHrodo Green AM 细胞内 pH 值指示剂标记的 U2OS 细胞（将 U2OS 细胞与 10 µM pHrodo Green AM 细胞内 pH 值指示剂 在室温下孵育30分钟）。使用共聚焦显微镜采集图像。
校准和测量
pHrodo AM variety pack 为 pH 值测量提供了红色或绿色两种指示剂。当与细胞内 pH 值校准缓冲液试剂盒配合使用时，pHrodo 染料为活细胞中的免洗 pH 值测定提供了完整的解决方案。
使用 BCECF（左图）和 pHrodo Red（右图）染料进行的细胞内 pH 值测定。pHrodo 染料在中性 pH 值时几乎不发荧光，并且具有极高的光稳定性，能够实现可重现的测量。它们可在 pH 2 至 pH 9 范围内提供信号强度调制及荧光波长选择。
追踪囊泡中的 pH 值
追踪荧光葡聚糖的内化是分析细胞区室内 pH 值变化的一种常规方法。pHrodo 染料的葡聚糖偶联物可区分从早期内体到溶酶体的囊泡，为此提供完整的解决方案，且无需淬灭和洗涤。
pHrodo 染料在中性 pH 值时几乎不发荧光，且可在 pH 2 至 pH 9 范围内提供信号强度调制及荧光波长选择。通过将 pHrodo Red 与 Rhodamine Green 偶联到 10,000 MW 葡聚糖上，双标记探针还可提供用于跟踪的参考信号。
采用 pHrodo Green E. coli BioParticles 偶联物，利用 pH 值变化监测 MMM 细胞中的吞噬作用。
| pHrodo Green AM 细胞内 pH 值指示剂 | pHrodo Red AM 细胞内 pH 值指示剂 | 2′,7′-双(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素，乙酰氧基甲基酯（BCECF，AM） | |
|---|---|---|---|
| 结果 | pHrodo 染料在中性 pH 值条件下不发荧光，酸化后荧光发射强度增加 | 染料在 ~490 nm 处激发的发射强度（535 nm 处测得）与在 ~440 nm 处激发的发射强度的 pH 依赖性比例 | |
| 检测范围 | 从 pH 8 到 pH 4，荧光增加 | pH 值范围6.2至9.5 | |
| 标准滤光片组 | FITC | TRITC | 需要激发比来定量 pH 值 |
| 荧光基团 | pHrodo Green | pHrodo Red | BCECF |
| 激发/发射波长 (nm) | 509/533 | 560/585 | ~440-490/535 |
| 是否可透过细胞？ | 可透过 | 可透过 | 可透过 |
| 使用说明 | 上样到细胞培养基中 | ||
| 检测平台 | 流式细胞仪、微孔板读数仪、成像 | 微孔板读数仪 | |
| 产品规格 | 50 µL 5 mM (1,000x) | 50 µL 5 mM (1,000x) | 20 x 50 µg |
| 货号 | P35373 | P35372 | B1170 |
| pHrodo (AM) Variety pack | 细胞内 pH 校准试剂盒 | ||
|---|---|---|---|
| 结果 | pHrodo 染料在中性 pH 值条件下不发荧光，酸化后荧光发射强度增加 | 利用 pHrodo red AM 和 pHrodo green AM 测定活细胞内的准确 pH 值 | |
| 检测范围 | 从 pH 8 到 pH 4，荧光增加 | pH 值范围4.5至7.5 | |
| 标准滤光片组 | FITC | TRITC | 缬氨霉素和尼日利亚菌素形成膜孔 |
| 荧光基团 | pHrodo Green | pHrodo Red | |
| 激发/发射波长 (nm) | 509/533 | 560/585 | |
| 是否可透过细胞？ | 可透过 | 可透过 | 透化细胞膜 |
| 使用说明 | 上样到细胞培养基中 | 用培养基平衡细胞 pH 值 | |
| 检测平台 | 流式细胞仪、微孔板读数仪、成像 | ||
| 产品规格 | 1 个试剂盒 | 1 个试剂盒 | |
| 货号 | P35380 | P35379 | |
| pHrodo Green Dextran，10,000 MW | pHrodo Red Dextran，10,000 MW | 葡聚糖，BCECF，10,000 MW，阴离子 | |
|---|---|---|---|
| 结果 | pHrodo 染料在中性 pH 值条件下不发荧光，酸化后荧光发射强度增加 | 染料在 ~490 nm 处激发的发射强度（535 nm 处测得）与在 ~440 nm 处激发的发射强度的 pH 依赖性比例 | |
| 检测范围 | 从 pH 8 到 pH 4，荧光增加 | pH 值范围6.2至9.5 | |
| 载体 | 葡聚糖 10,000 MW | 葡聚糖 10,000 MW | 葡聚糖 10,000 MW |
| 标准滤光片组 | FITC | TRITC | 需要激发比来定量 pH 值 |
| 荧光基团 | pHrodo Green | pHrodo Red | BCECF |
| 激发/发射波长 (nm) | 509/533 | 560/585 | ~440-490/535 |
| 是否可透过细胞？ | 不可透过 | 不可透过 | 不可透过 |
| 使用说明 | 通过内吞作用、显微注射、膜片移液器或胞饮细胞上样剂进行上样 | 通过内吞作用、显微注射、膜片移液器或胞饮细胞上样剂进行上样 | |
| 检测平台 | 流式细胞仪、微孔板、成像 | 成像 | |
| 产品规格 | 0.5 mg | 0.5 mg | 10 mg |
| 货号 | P35368 | P10361 | D1878 |
| pHrodo Green AM 细胞内 pH 值指示剂 | pHrodo Red AM 细胞内 pH 值指示剂 | 2′,7′-双(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素，乙酰氧基甲基酯（BCECF，AM） | |
|---|---|---|---|
| 结果 | pHrodo 染料在中性 pH 值条件下不发荧光，酸化后荧光发射强度增加 | 染料在 ~490 nm 处激发的发射强度（535 nm 处测得）与在 ~440 nm 处激发的发射强度的 pH 依赖性比例 | |
| 检测范围 | 从 pH 8 到 pH 4，荧光增加 | pH 值范围6.2至9.5 | |
| 标准滤光片组 | FITC | TRITC | 需要激发比来定量 pH 值 |
| 荧光基团 | pHrodo Green | pHrodo Red | BCECF |
| 激发/发射波长 (nm) | 509/533 | 560/585 | ~440-490/535 |
| 是否可透过细胞？ | 可透过 | 可透过 | 可透过 |
| 使用说明 | 上样到细胞培养基中 | ||
| 检测平台 | 流式细胞仪、微孔板读数仪、成像 | 微孔板读数仪 | |
| 产品规格 | 50 µL 5 mM (1,000x) | 50 µL 5 mM (1,000x) | 20 x 50 µg |
| 货号 | P35373 | P35372 | B1170 |
| pHrodo (AM) Variety pack | 细胞内 pH 校准试剂盒 | ||
|---|---|---|---|
| 结果 | pHrodo 染料在中性 pH 值条件下不发荧光，酸化后荧光发射强度增加 | 利用 pHrodo red AM 和 pHrodo green AM 测定活细胞内的准确 pH 值 | |
| 检测范围 | 从 pH 8 到 pH 4，荧光增加 | pH 值范围4.5至7.5 | |
| 标准滤光片组 | FITC | TRITC | 缬氨霉素和尼日利亚菌素形成膜孔 |
| 荧光基团 | pHrodo Green | pHrodo Red | |
| 激发/发射波长 (nm) | 509/533 | 560/585 | |
| 是否可透过细胞？ | 可透过 | 可透过 | 透化细胞膜 |
| 使用说明 | 上样到细胞培养基中 | 用培养基平衡细胞 pH 值 | |
| 检测平台 | 流式细胞仪、微孔板读数仪、成像 | ||
| 产品规格 | 1 个试剂盒 | 1 个试剂盒 | |
| 货号 | P35380 | P35379 | |
| pHrodo Green Dextran，10,000 MW | pHrodo Red Dextran，10,000 MW | 葡聚糖，BCECF，10,000 MW，阴离子 | |
|---|---|---|---|
| 结果 | pHrodo 染料在中性 pH 值条件下不发荧光，酸化后荧光发射强度增加 | 染料在 ~490 nm 处激发的发射强度（535 nm 处测得）与在 ~440 nm 处激发的发射强度的 pH 依赖性比例 | |
| 检测范围 | 从 pH 8 到 pH 4，荧光增加 | pH 值范围6.2至9.5 | |
| 载体 | 葡聚糖 10,000 MW | 葡聚糖 10,000 MW | 葡聚糖 10,000 MW |
| 标准滤光片组 | FITC | TRITC | 需要激发比来定量 pH 值 |
| 荧光基团 | pHrodo Green | pHrodo Red | BCECF |
| 激发/发射波长 (nm) | 509/533 | 560/585 | ~440-490/535 |
| 是否可透过细胞？ | 不可透过 | 不可透过 | 不可透过 |
| 使用说明 | 通过内吞作用、显微注射、膜片移液器或胞饮细胞上样剂进行上样 | 通过内吞作用、显微注射、膜片移液器或胞饮细胞上样剂进行上样 | |
| 检测平台 | 流式细胞仪、微孔板、成像 | 成像 | |
| 产品规格 | 0.5 mg | 0.5 mg | 10 mg |
| 货号 | P35368 | P10361 | D1878 |
pHrodo 指示剂是什么？
pHrodo 染料是一种新型荧光染料，当周围环境 pH 值显示酸性增强时，其荧光强度显著增加。pHrodo Green 染料及其偶联物的最佳吸收波长和最大荧光发射波长分别约为 509 nm 和 533 nm，pHrodo Red 的激发和发射波长分别为 560 nm 和 585 nm。pHrodo Green 与 pHrodo Red 均可由 488 nm 氩离子激光器激发，大部分的流式细胞仪、显微镜和微孔板读数仪均配有这一光源。
MMM 细胞中的吞噬作用。将培养的 MMM 巨噬细胞重悬于含有 0.5 mg/mL pHrodo Red（左图）或 Green（右图）Zymosan BioParticles 试剂的活细胞成像溶液中。在 37°C 条件下孵育90分钟后，添加 NucBlue 活细胞染色剂对细胞核进行染色，并对细胞进行成像。细胞吞噬后，BioParticles 探针从不发荧光变为发出强荧光，从而明确指示吞噬活性。
pHrodo red（左图）和 pHrodo Green（右图）染料荧光发射光谱。pHrodo 染料标记的大肠杆菌的荧光发射光谱采用 pH 值介于4至10之间的一系列 50 mM 磷酸钾缓冲液测定。大肠杆菌浓度为 0.1 mg/mL，使用 Hitachi F4500 荧光计在 532 nm 激发波长下读取结果。
用 pHrodo Green AM 细胞内 pH 值指示剂和 pHrodo Red 10,000 MW 葡聚糖标记鼠 J774A.1 巨噬细胞。使用细胞内 pH 值校准缓冲液试剂盒将 pH 值调节至指定范围。
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