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随着配备绿色(532 nm)和黄色(561 nm)激光的流式细胞仪的日益普及,绿光可激发和黄光可激发荧光染料在标准多参数流式细胞术中发挥着越来越重要的作用。 广泛的Alexa Fluor染料和eFluor染料组合支持通过流式细胞术进行的多色免疫表型分析,并且包含分别与绿色激光器的532 nm谱线和黄色激光器的561 nm谱线相容的各种染料。
第 1 步: 搜索感兴趣的标记物(如“CD4”或“CD45”)。
第 2 步: 使用筛选器,通过荧光染料、目标物种和其他标准进一步缩小搜索结果。
下表列出了黄绿色激光最常用荧光染料的特性。
荧光基团 | 荧光基团类型 | 最大激发波长/最大发射波长 (nm) | 相对强度* (1 =最低,5 =最高) | 建议的带通滤波器 (nm) | 用途 |
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Alexa Fluor 532 | 有机染料 | 532/554 | 3 | 555/20 | 激发波长非常适合532 nm激光器的黄色荧光染料 |
R-Phycoerythrin (R-PE, PE) | 蛋白质 | 496, 565/575 | 5 | 575/26 | 广泛使用、量子产率高的荧光染料,是检测低密度抗原的理想选择 |
PE-Texas Red | 偶联 | 496, 565/615 | 3 | 590/40 | 偶联染料,将共振能量从PE分子传递到Texas Red染料 |
PE-Alexa Fluor 610 | 偶联 | 496, 565/628 | 3 | 590/40 | 偶联染料,将共振能量从PE分子传递到Alexa Fluor 610染料 |
PE-eFluor 610 | 偶联 | 496, 565/607 | 3 | 610/20 | 偶联染料,将共振能量从PE分子传递到eFluor 610染料;可用作更明亮的PE-Texas Red染料替代品 |
PE-Cyanine 5 (TRI-COLOR) | 偶联 | 496, 565/667 | 3 | 670/14 | 偶联染料,将共振能量从PE分子传递到Cyanine 5染料 |
PE-Cyanine 5.5 | 偶联 | 496, 565/694 | 4 | 695/40 | 偶联染料,将共振能量从PE分子传递到Cyanine 5.5染料 |
PE-Alexa Fluor 700 | 偶联 | 496, 565/723 | 3 | 695/40 | 偶联染料,将共振能量从PE分子传递到Alexa Fluor 700染料 |
PE-Cyanine 7 | 偶联 | 496, 565/767 | 4 | 780/60 | 偶联染料,将共振能量从PE分子传递到Cyanine 7染料 |
* 任何荧光染料的相对强度取决于所研究的细胞类型、使用的试剂、仪器和仪器配置。 上述相对强度可用作参考;观察到的强度可能不同。 |