Gateway入门克隆载体

• RNAi 表达—通过慢病毒和腺病毒 Gateway 克隆载体，在任何哺乳动物细胞类型中均可高效递送并长期稳定或瞬时表达 shRNA
• 病毒表达—在任何哺乳动物细胞类型中高水平、稳定和瞬时基因表达
• 蛋白合成—无需特殊设备，只需 2 小时即可在单个反应管中直接合成高产量的重组蛋白。缩放反应以达到从微克到毫克级别的蛋白水平
• 生物素化—表达、纯化和检测生物素化重组蛋白的简便有效方法。
• 按需标记技术—从某种载体产生天然或标记的蛋白。
   

导向入门克隆的三种可能方法如图 1。使用 TOPO 载体和 PCR 扩增/限制酶载体是构建入门克隆的最常见方法。

图 1.入门克隆载体的构建策略构建入门克隆载体的方法有三种：(A) BP 克隆； (B) TOPO 克隆，和 (C) 限制酶和连接酶克隆。红色箭头表示目的片段。摘自 Katzen F (2007) Expert Opin Drug Discov 2(4):571–589。

我们提供两种类型的 TOPO 载体，这些载体可轻松进行 TOPO 克隆以创建 Gateway入门载体。pCR8/GW/TOPO 载体试剂盒和 pENTR / D-TOPO 载体系列均可提供 5 分钟的高效TOPO 克隆，效率 > 95%。

pENTR/D-TOPO 载体利用了快速高效的定向 TOPO 克隆技术，可以以正确的方向表达您的插入片段。这些载体包含必需的 attL 序列，可重组进任何目标载体中，某些载体带有 TEV 蛋白酶酶切位点，可用于表达后天然蛋白的制备（图 2）。

图 2.多种 pENTR 载体可用于定向 TOPO 克隆，可直接使用多种Gateway 表达载体。

pCR8/GW/TOPO 克隆载体可实现高效 TOPO-TA 克隆。这些载体有利于实现多种用途：快速重组进多种 Gateway目标载体中，方便的测序，利用壮观霉素抗性在大肠杆菌中进行稳定地筛选，以及轻松切除两端带有 EcoR I 位点的插入 DNA（图 3）。

图 3.pCR8/GW/TOPO 入门载体允许 TOPO TA 克隆用于多个下游应用。