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iBright 成像系统提供多达五种成像模式,支持多种应用。从蛋白质凝胶、核酸凝胶、化学发光Western Blot、荧光Western Blot等应用中有效且轻松地采集、分析数据。
图像模式 | 可捕获哪种信号? |
蛋白预制胶 |
凝胶(例如,考马斯亮蓝染色、银染)和膜(例如,丽春红、Thermo Scientific Pierce Reversible Protein Stain)的比色染色,凝胶的荧光染色(例如,Invitrogen SYPRO Ruby 染色) |
核酸凝胶 |
溴化乙锭和 Invitrogen SYBR 染色 |
化学发光 Western Blot |
使用各种常用 HRP 和 AP 底物(如 Thermo Scientific SuperSignal 和 Invitrogen WesternBreeze 底物)的化学发光印迹 |
荧光印迹 |
使用常用 RGB(可见光范围)和近红外荧光基团(如 Invitrogen Alexa Fluor 和 Alexa Fluor Plus 偶联物)进行荧光染色 |
通用 |
自定义模式,用于对包含多种信号的样品进行成像,例如化学发光、荧光、比色染色和/或可见图像;图像显示类似于荧光印迹模式,允许为任意样品添加伪彩色 |
核心成像应用
基于培养板的成像应用
可见光成像定性应用*
为荧光 Western Blot、染色核酸凝胶、比色染色蛋白凝胶、GFP 表达菌落、比色染色菌落和叶片拍摄的图像显示为伪彩色(应用假色)。数据以灰度图形式捕获。* 请注意,定性可见成像应用的用途是样本的可视化定性或信号存在确认,不推荐用于定量。
通过利用 E-Gel 琼脂糖凝胶专用 iBright 托盘适配器,可以在 iBright 透照仪上令 E-Gel 凝胶适当居中,并防止 E-Gel 标签或条形码产生非特异性荧光,从而帮助精简我们的 11、22、48 和 96 孔 E-Gel 配置的图像采集和分析。
此外,我们的反卷积工作流程大幅简化了高通量 96 孔 E-Gel 结果的解读,因为反卷积可简化不同泳道数据的审查,从而更充分地解读结果。
12.1 英寸 LCD 触摸屏界面上的功能和布局简洁合理,简化了使用流程,只需简单培训即可快速上手。不同成像模式的工作流程相似,不论哪种样品类型均可获得流畅的成像体验。
910 万像素冷却 CCD 摄像头可捕捉并拍摄出清晰的高品质的图像。高分辨率可实现更多合并(像素组合)选项,从而可根据需要灵活调整分辨率和灵敏度。
Smart Exposure 智能曝光技术可快速确定最佳曝光时间,有助于将图像过度曝光或曝光不足的可能性降至最低,无需重复曝光即可获得理想的信号。
对于表达水平差异很大的化学发光免疫印迹样品,Smart Range HDR(高动态范围)技术可以帮助较大限度提升线性动态范围。此功能利用了同一样品的两种不同曝光,用于捕获中高丰度蛋白质的短曝光和用于捕获低丰度蛋白质的长曝光。捕获后,两张不同的图像将合并为单张 16 位 HDR 图像,其中同时包含中高丰度和低丰度信号强度,从而有效地扩展线性动态范围,使其超过单一的短曝光时间或长曝光时间所能达到的范围。
iBright 1500 系列成像系统可自动确定样品位置,并通过机械式旋转样品台,左右旋转最大 10°。这一自动化功能使得您无需重复打开样品抽屉重新调整样品即可对齐。 此外,机械旋转无需对样品进行数字旋转,保持了数据的完整性。
数字旋转与机械旋转。 (A)像素随着数字旋转发生旋转,使得条带呈锯齿状。机械旋转使样本本身发生物理旋转,因此在像素上保持对齐,条带在外观上保持原态。(B)图示为旋转前后的 iBright 成像系统样品台。
此外,iBright 成像系统可在各缩放级别下自动调整对焦,从而最大限度地利用了 18.0 cm x 22.5 cm 的视野。对单一印迹成像时,相机可最高自动缩放 2 倍(iBright 1500 系列成像系统采用机械方式缩放 1-2 倍;iBright CL750 成像系统采用数字方式缩放 1-2 倍)。 机械缩放通过将相机移近样品台来尽可能提高灵敏度,从而减少焦距。iBright 1500 系列成像系统还可提供额外的 1-4 倍的数字缩放,使得总缩放倍数高达 1-8 倍。
缩放功能。 (A)荧光免疫印迹的未缩放图像。(B)2X 缩放时的印迹图像。(C)4X 缩放时的印迹图像。(D)8X 缩放时的印迹图像。(连续缩放期间印迹位置不发生改变)
大视野(22.5 x 18.0 cm)最多可采集 4 块小型印迹膜或凝胶。
无限可能—iBright FL1500 具有五个荧光通道,可同时对 4 色荧光蛋白质免疫印迹进行多重检测,扩大了在单块印迹上同时研究多个蛋白的可能。从而您可获取更有意义且更具代表性的比较数据,完善您的实验结果。Smart Exposure 智能曝光技术优化了每个荧光通道的信噪比,进一步改善了多重荧光免疫印迹数据的质量。
下表概述了预装在 iBright FL1500 成像系统中并且适用于可见光范围(RGB)和近红外范围(NIR)荧光免疫印迹的滤光片组
激发通道 | 滤光片范围 (nm) | 发射通道 | 滤光片范围 (nm) | 兼容荧光基团示例 |
EX1 | 455-485 | EM1 | 508/-557 | Alexa Fluor Plus 488, Alexa Fluor 488 |
EX2 | 515/-545 | EM2 | 568/-617 | Alexa Fluor Plus 555, Alexa Fluor 546 |
EX3 | 608/-632 | EM3 | 675/-720 | Alexa Fluor Plus 647, Alexa Fluor 594 |
EX4 | 610/-660 | EM4 | 710/-730 | Alexa Fluor Plus 680, Alexa Fluor 680 |
EX5 | 745/-765 | EM5 | 800/-850 | Alexa Fluor Plus 800, Alexa Fluor 790 |
iBright 成像系统采用绿色 LED 透射光源,可有效激发溴化乙锭和 SYBR Green 染料等常用 DNA 染料,同时具有更多优点。
不使用有害的紫外线:尽管紫外光可有效激发许多荧光染料和染色剂,但紫外线会危害健康。此外,长时间暴露于紫外光可能会损伤 DNA 样本,并影响用于下游应用(如亚克隆)的样品完整性。
无汞废物: 紫外透射灯可能含有有害物质汞,因此在处理和处置时需要特别小心。
更长的使用寿命: LED 灯珠的实际使用寿命比紫外灯管长更长,因此,在仪器的使用寿命内可以节省大量成本。
为了消除不均一的蛋白样品浓度、不一致的凝胶上样量以及从凝胶到膜的不均匀转印所带来的样品变异,通常会通过比较目标蛋白与 GAPDH、β-tubulin、β-actin 等内部管家蛋白对照,进行一个归一化步骤。尽管管家蛋白过去一直是归一化的首选,但比较目标蛋白与总泳道蛋白的策略可成为更准确的归一化方法。
iBright 成像系统和 iBright 分析软件提供多种定量和归一化选项,补偿实验或样品的变异,从而让您找到最适合的实验方法。
使用 No-Stain 免染型蛋白标记试剂进行总蛋白归一化。在 Invitrogen™ Bolt™ 4-12% Bis-Tris Plus 凝胶中加入 10 至 50 μg 的 Hela 裂解物,并使用 MES 电泳缓冲液进行电泳分离。使用 Invitrogen™ iBlot™ 2 干转系统和 iBlot 2 小型 PVDF 转印膜组(7 分钟 P0 方案),将凝胶中的蛋白质转移到小型 PVDF 膜上。在摇床上用 20 mL 超纯水漂洗 PVDF 膜两次(每次 2 分钟)后,用 10 mL 的 No-Stain 免染型蛋白标记试剂工作液摇动标记 10 分钟。然后在摇床上用 20 mL 超纯水洗膜 3 次(每次 2 分钟),最后加入 Invitrogen™ β-actin 一抗(货号 AM4302)、GAPDH(货号号 398600)和 α-tubulin(货号 138000)以及 Invitrogen ™ 山羊抗小鼠 IgG Alexa Fluor ™ Plus 680 二抗(货货号 A21058)。使用 Invitrogen ™ iBright™ FL1500 成像系统成像。通过 iBright 软件来定量泳道中的总蛋白信号。总蛋白信号整个范围内绘制数据的 R² 值定为 0.9990、而 β-actin、GAPDH 和 α-tubulin 的 R² 值分别为 0.8851、0.9438 和 0.8332。