体外转录 siRNA

不要因仅检测少量 siRNA 而限制您的研究
小干扰 RNA (siRNA) 由约 21bp 的双链 RNA 和 3’ 端二核苷酸突出碱基组成，现在常用于在哺乳动物细胞中通过 RNA 干扰途径诱导基因特异性沉默。最有效的 siRNA 能使目标基因表达降低> 90%。遗憾的是，一些 siRNA 只有很轻微甚至可忽略不计的效果。为了找到能够有效抑制基因敲低的 siRNA，通常会针对每个基因设计和检测 3-5 条 siRNA。因此涉及多个不同基因敲低的研究需要合成和检测很多不同的 siRNA。

减少 siRNA 制备时间和成本
使用化学合成 siRNA 时，单次实验的成本会迅速提高。此外，定制 siRNA 所需的周转时间通常为数天。 Silencer™ siRNA 构建试剂盒能以化学合成几分之一的成本产生可用于转染的 siRNA。本试剂盒基于一种正在申请专利的体外转录方法，可在 24 小时内生成多达 15 条纯化 siRNA。使用 Silencer siRNA 构建试剂盒可节省您的时间和成本，帮助您筛选更多基因以及更多的目标基因潜在靶标，以便找到最有效的 siRNA。

试剂盒工作原理
Silencer siRNA 构建试剂盒所包含的体外转录方法使用 T7 RNA 聚合酶生成 siRNA 单链。反应模板是由两个可编码目标 siRNA 链的廉价 DNA 寡核苷酸生成。设计这些寡核苷酸时包含了与试剂盒中 T7 启动子引物 3’ 端互补的 8 个碱基序列。这些寡核苷酸与 T7 启动子引物一一进行退火处理，并通过与 Klenow 片段的填充反应生成可直接用于体外转录反应的双链模板。转录之后，将反应物相结合，以便两条 siRNA 链退火。然后用 DNase（去除模板）和 RNase（修饰双链 RNA 的末端）处理 siRNA 制备品，随后再进行柱式纯化。整个过程只需很少的手动操作，可以在 24 小时内完成。

完整的 siRNA 合成解决方案
Silencer siRNA 构建试剂盒包含合成和纯化双链 siRNA 所需的所有试剂，最多可制备 15 条可直接用于转染的 双链siRNA。本试剂盒还包含详细的说明手册和一个 GAPDH siRNA 对照模板。在对照反应中制备的 GAPDH 特异性 siRNA 可用于优化转染实验方案。

欢迎使用我们的 siRNA Target Finder（网址：Ambion.com）来确定 mRNA 中潜在的靶标序列。得到的靶标序列可以直接发送至 Silencer 构建试剂盒模板设计工具，以生成使用本试剂盒所需的寡核苷酸模板。或者直接访问模板设计工具（网址：Ambion.com）并粘贴您自己的 siRNA 靶标序列。