TMT 定量

tandem mass tag（TMT）はアイソバリックな化学タグであり、相対定量プロテオミクス分析においてマルチプレックス分析を実現します。複数サンプルを並行して MS 分析できるためスループットが向上し、細胞、組織、生体液由来の最高 10 種類の異なるサンプルを相対定量分析できます。タグは、MS／MS レポーター、スペーサーアーム、アミノ反応基から構成されます。アミノ反応基はラベリングの際、ペプチド N-末端またはリジンに結合します。 

相対定量実験では、実験条件に応じて異なるアイソバリックタグを用います。ラベリング後、すべてのサンプルを混合し、1 度の液体クロマトグラフィー質量分析（LC-MS）測定で分析します。アイソバリックタグは同じ化学特性を有するため、異なる TMT-標識サンプルに由来するすべてのペプチドは LC 分離では共溶出します。ペプチドが質量分析計に注入されると、共溶出したペプチドは質量で識別できない単一のプリカーサーイオンピークとして同時検出されます。

フラグメンテーション後、各実験条件由来のタグは MS／MS スペクトルにおいて、低 m/z 領域に固有のシグネチャーレポーターイオンを生成します。タンパク質の同定は、得られたイオンピークをフラグメントデータベース内のイオンピークと照合することにより行います。データベースで同定されたタンパク質に対し、レそれぞれのポーターイオンの強度と比較することで、タンパク質定量に不可欠な情報が得られます。

Orbitrap Fusion トライブリッドのセグメント化された四重極は、狭い単離ウィンドウでのイオン透過を向上させます。このことは干渉を最小限に抑えるうえで不可欠です。改良されたイオン源を用いると、 0.4 Th の単離ウィンドウで十分強度のイオンを検出でき、相対比の不確かさを最小化できます。