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AmpliTaq Gold DNA ポリメラーゼ
Applied Biosystems AmpliTaq Gold および AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼは、室温での酵素活性の抑制に化学修飾を使用するホットスタート酵素です。活性化すると、修飾因子は永続的に放出され、結果として、プライマーのアニーリング温度を超える温度で活性化する酵素になります。したがって、伸長および増幅される唯一の生成物は、プライミングの特異性が高いものとなります。
AmpliTaq Gold 製品フォーマット
どちらのフォーマットもホットスタート反応用に設計されていますが、GC リッチなテンプレートをより良好に処理でき、搬送、保管、および取り扱いの柔軟性がより高いため、AmpliTaq Gold 360 ポリメラーゼは特に汎用性が高い製品です。
| AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase1 | AmpliTaq Gold DNA Polymerase | |
|---|---|---|
| ホットスタート修飾 | 化学的 | 化学的 |
| アンプリコン長 | 最長 5 kb | 最長 5 kb |
| ポリメラーゼの活性段階 | 95 °C で 10 分 | 95 °C で 10 分 |
| GC リッチな配列の増幅 | はい | いいえ |
| スタンドアローン酵素 | ||
| 保管温度 | -20 °C または +4 °C | -20 °C |
| 室温出荷 | はい | いいえ |
| マスターミックスフォーマット | はい | いいえ |
1 AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼは、AmpliTaq Gold DNA ポリメラーゼと同じ酵素ですが、さらに精製され、残余 DNAが低レベルに抑えられています：ヒト DNA 2 コピー以下／10ユニット、細菌 DNA 1.4 コピー以下 E.coli DNA／5 ユニット。
AmpliTaq Gold DNA ポリメラーゼとAmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼの違いとは？
元の AmpliTaq Gold DNA ポリメラーゼと比較して、AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼは、追加的な独自の分離プロセスによって精製されており、酵素調製から残余細菌の DNA 配列を低減させます。この超高純度酵素は、増強された 360 Gold バッファーとともに使用したとき、ホットスタート機能に加えて、偽陽性結果を低減させ、低レベルのターゲット配列を増幅し、雑菌からヒトのゲノムまでさまざまなテンプレートの増幅を促進します。
AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼは、その純度の高さにより、低コピーターゲットを効率的に増幅するため、まれな配列や劣化した配列の検出に適しています。AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼは、5 kb までの配列を増幅できます。
AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼの利点
図 1.AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼは広範なターゲットを増幅します。パネルは、AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼで増幅した生成物を示しています。PCR は、各反応あたり 1 ng のテンプレート DNA を使用して二重反復で行いました。アンプリコン長は、300 ～ 1,400 塩基対（bp）で、平均長は 553 bp でした。アンプリコンは以下のように標識しました：High AT；Easy Amplification；Primer Dimer；Homopolymer；Sequencing Challenge Long；High GC。GC 含有量の高いアンプリコンの反応には、360 GC エンハンサーを 5 µL 添加しました。
図 2.低コピーターゲットの検出のための AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼの感度。ゲルの画像は、2.0 mM MgCl2 および標準的な熱サイクル条件を使用して、0 ～ 80 コピーのインプット DNA で実施した、β-actin 遺伝子の増幅生成物を示しています。
図 3.AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼにより生成された PCR 生成物によって得られる高品質なシーケンシングデータ。AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼおよび AmpliTaq Gold DNA ポリメラーゼによって生成された標準的なターゲット（パネル A）と GC 含有量の高いターゲット（パネル B）の増幅生成物を配列決定しました（シーケンシング反応あたり 10 ng の PCR 生成物）。サンプルに対して、BigDye Terminator v3.1 と標準的な熱サイクル条件を使用してサイクルシーケンスを行いました。BigDye XTerminator Purification Kit を使用して、サイクルシーケンスの反応の精製をしし、サンプルを POP-7 ポリマーを使用して Applied Biosystems 3730xl DNA Analyzer に注入しました。
図 1.AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼは広範なターゲットを増幅します。パネルは、AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼで増幅した生成物を示しています。PCR は、各反応あたり 1 ng のテンプレート DNA を使用して二重反復で行いました。アンプリコン長は、300 ～ 1,400 塩基対（bp）で、平均長は 553 bp でした。アンプリコンは以下のように標識しました：High AT；Easy Amplification；Primer Dimer；Homopolymer；Sequencing Challenge Long；High GC。GC 含有量の高いアンプリコンの反応には、360 GC エンハンサーを 5 µL 添加しました。
図 2.低コピーターゲットの検出のための AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼの感度。ゲルの画像は、2.0 mM MgCl2 および標準的な熱サイクル条件を使用して、0 ～ 80 コピーのインプット DNA で実施した、β-actin 遺伝子の増幅生成物を示しています。
図 3.AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼにより生成された PCR 生成物によって得られる高品質なシーケンシングデータ。AmpliTaq Gold 360 DNA ポリメラーゼおよび AmpliTaq Gold DNA ポリメラーゼによって生成された標準的なターゲット（パネル A）と GC 含有量の高いターゲット（パネル B）の増幅生成物を配列決定しました（シーケンシング反応あたり 10 ng の PCR 生成物）。サンプルに対して、BigDye Terminator v3.1 と標準的な熱サイクル条件を使用してサイクルシーケンスを行いました。BigDye XTerminator Purification Kit を使用して、サイクルシーケンスの反応の精製をしし、サンプルを POP-7 ポリマーを使用して Applied Biosystems 3730xl DNA Analyzer に注入しました。
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