Invitrogen Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼ

ユニバーサルなアニーリングによるシンプルな PCR

Invitrogen Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase は、お客様の研究をより早く目的地へ到達させるためにデザインされたものです。ユニバーサルなプライマーアニーリングによって最適化の工程が必要なく、全ての PCR アッセイを同時に進行できます。革新的なバッファー、高性能の Taq DNA ポリメラーゼ、優れたホットスタート技術の組み合わせは、非常にタフなアプリケーションにおいても優れた PCR 結果を達成します。

特長

  • 60 °C のユニバーサルなプライマーアニーリング。手間のかかる最適化ステップを削減し、すべての PCR アッセイを同時に進行可能
  • 4 倍速い DNA 合成と阻害物質耐性。非常に堅牢性の高い遺伝子組換え Taq Polymerase を使用
  • Platinum ホットスタート技術。室温での反応液調製が可能であり、優れた特異性、感度、収量を提供
  • グリーンバッファーフォーマット。直接ゲル添加により、ピペッティングによる誤差を低減

 

このページの内容

より良い PCR のための遺伝子組換え

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酵素の利点に関するビデオ

Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼの利点

共通のアニーリングプロトコル

従来の試薬による PCR アッセイでは、プライマーのアニーリング温度や伸長時間が異なるため、それぞれの DNA 断片に特化した増幅プロトコルが必要です。そのため、個々のアッセイを同一の PCR 実験で実施することはできません。Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼを使用すれば、ユニバーサルなプライマーアニーリング温度と最も長い断片に合わせた伸長ステップにより、異なる PCR アッセイを同一のプロトコルで並行して実施することができます。さらに、Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼは、次世代の「速い」DNA ポリメラーゼです。ユニバーサルなプロトコルと組み合わせることで、すべてのアッセイをわずか 30 分で行うことができます。

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図 1.アッセイの同時進行による時間の節約従来の試薬による PCR アッセイでは、プライマーのアニーリング温度や伸長時間が異なるため、それぞれの DNA 断片に特化した増幅プロトコルが必要です。そのため、複数のターゲットを同一の PCR 実験で増幅することはできません。Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼを使用すれば、ユニバーサルなプライマーアニーリング温度と増幅する最も長い断片に合わせた伸長ステップにより、異なる PCR アッセイを一つのプロトコルで同時に実施することができます。さらに、Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼは、高速 DNA ポリメラーゼです。PCR の結果をわずか 30 分で得ることができます。

Time saving enabled by assay co-cycling

図 2.Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼは、短いアンプリコンと長いアンプリコンを同時に増幅できます。Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼまたは他のホットスタート DNA ポリメラーゼを使用して、50 μL に含まれる 50 ng のヒトゲノム DNAから、132 bp、251 bp、1,005 bp、そして 3.9 kb の断片を増幅しました。（A） NEB OneTaq Hot Start DNA ポリメラーゼ、（B） Qiagen Fast Cycling PCR キット、（C） Roche FastStart Taq DNA ポリメラーゼ。図に示したアニーリングおよび伸長条件で、4 種類全てのターゲット断片に同じプロトコルを使用しました。サイズマーカーには、Thermo Scientific ZipRuler Express DNA Ladder 2 を使用しました。

迅速なサイクリング

Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼは、DNA の合成速度を向上させた遺伝子組換え酵素です。そのため、Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼによる PCR では、他のホットスタート Taq DNA ポリメラーゼと比べて 2 倍以上速く結果を得ることができます。

Fast cycling reduces PCR run time

図 3.迅速なサイクリングによる PCR ランタイムの短縮Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼと他社のホットスタート DNA ポリメラーゼを使用して、50 μL に含まれる 50 ng のヒトゲノム DNA から、529 bp の断片を 35 サイクルで増幅しました。（A） Sigma-Aldrich KAPA2G Fast HotStart PCR キット、（B） NEB OneTaq Hot Start DNA ポリメラーゼ、（C） Promega GoTaq G2 DNA ポリメラーゼ、（D） Toyobo Quick Taq HS DyeMix、（E） Roche FastStart Taq DNA ポリメラーゼ、（F） Sigma-Aldrich JumpStart Taq DNA ポリメラーゼ。各ポリメラーゼのサイクリング時間を紫色で、ProFlex PCR System （6 °C／秒 ピークブロック傾斜率）におけるランピング時間を赤色でそれぞれ示しています。1％ TAE アガロースゲルによる PCR プロダクトの分析結果をグラフの下に示しています。サイズマーカーには、ZipRuler Express DNA Ladder 2 を使用しました。

高い感度と特異性

出発材料の量が限られている、またはサンプル中のターゲット DNA の濃度が低いといった場合でも、高感度な Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼを使用すれば、特定のプロダクトを良好に増幅することができます。 

High sensitivity and reliable amplification from low amounts of input DNA

図 4.少量のインプット DNA で、高感度かつ信頼性の高い増幅を実現。Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼ、または他社の DNA ポリメラーゼ（A—KAPA2G Fast HotStart、B—NEB OneTaq Hot Start、C—Promega GoTaq G2、D—Sigma JumpStart Taq、E—Takara Taq HS Perfect Mix）を使用して、0（テンプレート無しのネガティブコントロール）、0.016、0.08、0.4、2、10、50、250 ng のヒトゲノム DNA から 529 bp の断片を 50 μL の PCR 反応によって増幅しました。推定コピー数は、0.016 ng のヒトゲノム DNA あたり、約 5 コピーです。分子量マーカーは、ZipRuler Express DNA Ladder 2 です。

阻害物質に対する耐性。

Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼは、阻害物質に耐性のある組換え体であり、純度の低いサンプルでも増幅が可能です。

Resistance to inhibitors

図 5.阻害物質に対する耐性。Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼ、または他社の DNA ポリメラーゼ（A—KAPA 2G Robust HotStart、B—NEB OneTaq Hot Start、C—Promega GoTaq G2、D—Takara Taq Hot Start Version）を使用して、ヒトゲノム DNAから 1 kb の断片を増幅しました。反応液に含まれる阻害物質は以下の通りです：1—フミン酸（最終濃度 1.3 µg/mL まで）、2—ヘミン（最終濃度 6 µM まで）、3—キシラン（最終濃度 0.26 mg/mL まで）、4—阻害物質無しのネガティブコントロール。分子量マーカーは、ZipRuler Express DNA Ladder 2 です。

Amplification of DNA extracted from FFPE tissue samples

図 6.FFPE 組織サンプルから抽出した DNA の増幅。Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼを使用して、マウス FFPE 組織サンプル由来の様々な量の DNA から 527 bp の断片を増幅しました。DNA の抽出には、RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation Kit for FFPE を使用しました。NTC： テンプレート無しのネガティブコントロール。PC： 1 ng の精製マウスゲノム DNA によるポジティブコントロール。分子量マーカーは、ZipRuler Express DNA Ladder 2 です。

堅牢な増幅

Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼおよび 2X Master Mixes の組成は、AT リッチから GC リッチまで、幅広いターゲットの増幅を可能にします。また、高 GC 含量ターゲットの特異的な増幅と収量の改善に役立つ、Platinum GC Enhancer を個別にご提供しています。

Robust amplification of AT-rich and GC-rich targets

図 7.AT リッチおよび GC リッチなターゲットの堅牢な増幅。100 ng のヒトゲノム DNA から、GC 含量の異なる（各レーンの上部に示す）さまざまな DNA 断片を、50 µL の PCR 反応により増幅しました。GC 含量が 65％よりも多いターゲットには、Platinum GC Enhancer を使用しました。分子量マーカーは、ZipRuler Express DNA Ladder 2 です。

Sanger シーケンシング対応

Platinum II Taq Hot-start DNA ポリメラーゼで生成した PCR 断片は、Sanger シーケンシングと良好に機能します。酵素の優れたパフォーマンス、ユニバーサルなプライマーアニーリング、迅速な合成により、Sanger シーケンシング用の PCR アンプリコン生成が容易で簡素化されます。

高品質の Sanger シーケンシング結果

図 8.高品質の Sanger シーケンシング結果。Platinum II Taq Hot-start DNA ポリメラーゼで増幅した 1.6 kb PCR 断片について、Applied Biosystems 3130xl Genetic Analyzer を使って Sanger シーケンシングを実施しました。内蔵シーケンシング分析ソフトウェアの KB Basecaller で報告されたデータを示します。クリア範囲読み取り長（CRL）は、任意の品質値（QV）におけるベースの最長未中断セグメントとして定義されます。QV20 はベースコールエラーに関する 1％ の確率に相当し、QV30 は 0.1％に相当します。QV>20 は、多くの場合、高品質と受容可能性があるとみなされます。

Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼと Platinum Taq DNA ポリメラーゼの違いは何ですか？

Platinum Taq DNA ポリメラーゼは、20 年以上にわたって研究者の皆様に支持され、数千の論文で使用されてきました。Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼは、次世代のホットスタート DNA ポリメラーゼであり、迅速で堅牢な性能を持った新しい組換え酵素です。下の表に示すように、優れた性能により多くの利点を得ることができるため、新しいプロジェクトを開始される研究者の方々には、Platinum II Taq DNA ポリメラーゼの使用をお勧めいたします。

Platinum II Taq Hot-Start および Platinum Taq DNA ポリメラーゼの仕様の比較

 Platinum II Taq Hot-Start DNA ポリメラーゼPlatinum Taq DNA ポリメラーゼ
技術仕様
共通のアニーリングプロトコルはいいいえ
速度15 秒／kb1 分／kb
柔軟な伸長ステップaはいいいえ
阻害剤耐性はいいいえ
ターゲットの鎖長最長 5 kb最長 5 kb
Hot-start 変異抗体抗体
Taq DNA ポリメラーゼに対するフィデリティ1x1x
平滑または 3’A 末端3’A3’A
全 PCR 反応実験における安定性24 時間24 時間
GC リッチテンプレートありあり
残存ヒトおよび細菌 DNA のコントロールされた低レベルdはい
（≤1 コピーの細菌 gDNA／酵素ユニット） 		いいえ
フォーマット
マスターミックス無色／グリーンb無色／グリーンb
スタンドアローン酵素無色／グリーンc無色／グリーンb

a伸長ステップは 60 秒／kb まで延長でき、特異性に対する影響はありません。bグリーンバッファーオプションによる直接ゲル添加。cグリーンバッファーは個別に提供しており、スタンドアローン酵素に使用できます。dPlatinum II Taq Hot- Start DNA ポリメラーゼの製造過程において、ポリメラーゼ 1 ユニットあたり 1 コピー以上の細菌ゲノム DNA が残存しないようにコントロールし、厳密に検査しています。

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