iBlotドライブロッティングとセミドライ式・ウェット式との比較

ウェスタンブロッティング実験の成功は、ゲルからメンブレンへのタンパク質転写効率にかかっています。実験結果の正確さは、ウェスタンブロッティングに使用する転写方法の効率と確実性で決まります。従来のウェット式転写は高い効率で行えますが、費用と時間がかかります。便利で時間も節約できるためセミドライ式転写に切り替えた研究者もいますが、この方法では多くの場合、転写効率が低下します。これらの方法はともに広く使用されていますが、どちらの方法も、サーモフィッシャーサイエンティフィックのiBlotドライブロッティングシステムのように高い転写効率と時間の節約、簡便性を同時に実現することはできません。

ウェスタンブロット転写対決：ウェット式ブロットとドライ式ブロット

タンパク質のウェスタンブロット転写をバッファーを使用せずに7分間で行えることをご存じですか？ウェスタンブロット転写をユニークに比較した動画をご覧ください。

3つの電気泳動転写装置の比較

iBlotドライブロッティングシステムを従来のセミドライ式転写システムおよびウェット式転写システムと比較しました。その結果、iBlotドライブロッティングシステムは、セミドライ式やウェット式の転写システムに比べ検出感度（すなわち、転写効率）が高いことが証明されました（図1および2）。さらに、iBlotドライブロッティングシステムは他のブロッティング法に比べ時間がかからず高い効率が得られます（表1）。

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図1. iBlotドライブロッティングシステムを使用することで、高い効率で転写が可能。（A）ニトロセルロースへのiBlotドライ転写と、B）ニトロセルロースへのセミドライ式転写。NuPAGE™ Novex™ 12% Bis-Trisミニゲル。レーン1～6：0.0625 µg、0.125 µg、0.25 µg、0.5 µg、1.0 µg、2.0 µg SW480ヒト結腸癌細胞ライセート。レーン7および12：5 µL SeeBlue™ Plus2タンパク質分子量マーカー、レーン8～11：0.5 µL、1.0 µL、2.0 µL、4.0 µL MagicMark™ XPウェスタン用タンパク質分子量マーカー。

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図2. iBlotドライブロッティングシステムを使用することで、高品質な転写が実現。 （A）ニトロセルロースへのiBlotドライ転写と、（B）ニトロセルロースへのウェット（タンク）式転写。NuPAGE Novex 12% Bis-Trisミニゲル。レーン2～7：0.0625 µg、0.125 µg、0.25 µg、0.5 µg、1.0 µg、2.0 µg SW480ヒト結腸癌細胞ライセート。レーン1および8：5 µL SeeBlue Plus2タンパク質分子量マーカー、レーン9～12：0.5 µL、1.0 µL、2.0 µL、4.0 µL MagicMark™ XPウェスタンブロット用分子量マーカー。


Figure 2. High transfer quality achieved using the iBlot® Dry Blotting System. (A) iBlot® dry transfer to nitrocellulose and (B) wet (tank) transfer to nitrocellulose of NuPAGE® Novex® 12% Bis-Tris mini gels. Lanes 2–7: 0.0625 µg, 0.125 µg, 0.25 µg, 0.5 µg, 1.0 µg, and 2.0 µg SW480 human colon cancer cell lysate; lanes 1 and 8: 5 µL SeeBlue® Plus2 Pre-stained protein standards; lanes 9–12; 0.5 µL, 1.0 µL, 2.0 µL, 4.0 µL MagicMark® XP Western Protein Standard.

Figure 2. High transfer quality achieved using the iBlot® Dry Blotting System. (A) iBlot® dry transfer to nitrocellulose and (B) wet (tank) transfer to nitrocellulose of NuPAGE® Novex® 12% Bis-Tris mini gels. Lanes 2–7: 0.0625 µg, 0.125 µg, 0.25 µg, 0.5 µg, 1.0 µg, and 2.0 µg SW480 human colon cancer cell lysate; lanes 1 and 8: 5 µL SeeBlue® Plus2 Pre-stained protein standards; lanes 9–12; 0.5 µL, 1.0 µL, 2.0 µL, 4.0 µL MagicMark® XP Western Protein Standard.

Figure 2. High transfer quality achieved using the iBlot® Dry Blotting System. (A) iBlot® dry transfer to nitrocellulose and (B) wet (tank) transfer to nitrocellulose of NuPAGE® Novex® 12% Bis-Tris mini gels. Lanes 2–7: 0.0625 µg, 0.125 µg, 0.25 µg, 0.5 µg, 1.0 µg, and 2.0 µg SW480 human colon cancer cell lysate; lanes 1 and 8: 5 µL SeeBlue® Plus2 Pre-stained protein standards; lanes 9–12; 0.5 µL, 1.0 µL, 2.0 µL, 4.0 µL MagicMark® XP Western Protein Standard.

Figure 2. High transfer quality achieved using the iBlot® Dry Blotting System. (A) iBlot® dry transfer to nitrocellulose and (B) wet (tank) transfer to nitrocellulose of NuPAGE® Novex® 12% Bis-Tris mini gels. Lanes 2–7: 0.0625 µg, 0.125 µg, 0.25 µg, 0.5 µg, 1.0 µg, and 2.0 µg SW480 human colon cancer cell lysate; lanes 1 and 8: 5 µL SeeBlue® Plus2 Pre-stained protein standards; lanes 9–12; 0.5 µL, 1.0 µL, 2.0 µL, 4.0 µL MagicMark® XP Western Protein Standard.

表1. iBlotドライブロッティングシステムと他のブロッティング法とのタンパク質転写時間の比較

 iBlotドライブロッティングシステムSemi-dry
transfer		Wet or semi-wet transfer
Buffer preparation0 minutes30 minutes30 minutes
Soaking gel in transfer buffer0 minutes20 minutes0 minutes
Assembling layers2 minutes10 minutes10 minutes
Transfer7 minutes45–90 minutes1–3 hr
Cleanup0 minutes10 minutes10 minutes
Total elapsed time9 minutes1 hr, 55 min–
2 hr, 40 min		1 hr, 50 min–
3 hr, 50 min
Time saved with the
iBlot® Dry Blotting System		—
1 hr, 45 min–
2 hr, 30 min
1 hr, 40 min–
3 hr, 40 min

3つの転写方法の概要

iBlotドライブロッティングシステム

Semi-dry transfer

Wet or semi-wet transfer

特徴の比較

 iBlotドライブロッティングシステムSemi-dry transferWet or semi-wet transfer
Transfer buffer required?No100–250 mL, or just enough to construct a bubble-free sandwich1–1.5 L, or enough to fill the transfer tank
Transfer time7 min, plus 2 min transfer preparation45–90 min, plus 70 min preparation and assembly1 hr–overnight, plus 50 min preparation and assembly
Transfer qualityReproducible and good transfer quality for proteins between 11 and 220 kDa:*
  • Transfer protocols optimized for immunodetection, e.g., iBlot® system–transferred membranes exhibit higher immunodetection sensitivity, using chromogenic and chemiluminescent procedures
Variable and inefficient transfer quality:
  • Reduced buffer capacity limits transfer time, especially for mid- to large molecular weight proteins
  • Small molecular weight proteins may be transferred through membrane and onto filter paper below
  • Membrane and filter paper MUST be cut to exact gel size, otherwise current will short-circuit around the edge of the gel
Reliable and good transfer quality:
  • Increase temperature during blotting, unless buffer is mixed and cooled during blotting keeps current relatively constant
  • High-current power source is typically required for 1–2 hour transfer
Supplemental equipment requiredNoneExternal power supplyExternal power supply
Post-transfer requirementNone
  • Wet-soaking filter paper for clean-up
  • Salt deposits on electrodes require regular maintenance
  • Large amount of hazardous buffer to discard
  • Wet-soaking sponges for clean-up
  • Salt deposits on electrodes require regular maintenance

リソース

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.