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翻訳後修飾 (PTM) または活性結合部位に基づいて細胞タンパク質を分離するには、数々の技術があります。タンパク質エンリッチメントは、少量のタンパク質または複数のタンパク質の種類から分離するために欠かせません。特定のタンパク質またはタンパク質複合体のエンリッチメントは、ターゲット特異的固定化抗体またはPTM特異的なアフィニティー結合を使用すると、最も簡単に達成できます。新しいThermo Scientific™ ActivX™ プローブとエンリッチメントキットでは、キナーゼ、GTPアーゼ、セリンヒドロラーゼなど、数種類の酵素の特異的ターゲッティングが可能です。
Phospho- protein Enrichment Kit | Glycoprotein Enrichment Kit, ConA | Glycoprotein Enrichment Kit, WGA | Ubiqitin Enrichment Kit | Kinase Enrichment Kit with ATP Probe | ActivX™ TAMRA-FP Serine Hydrolase Probe | |
Target | Phosphorylated proteins | α-linked mannose and terminal glucose residues | N-acetyl glucosamine (GlcNAc) | Polyubiquin-ated proteins | ATP binding sites | Active serine hydrolase enzymes |
Binding/ labeling mechanism | Metal chelate affinity to phosphate groups | Lectin affinity to sugars | Lectin affinity to sugars | Antibody affinity to target | Biotinylated ATP analog to active-site lysine | TAMRA-labeled fluoro phosphanate binds to active site serine |
Processing time | 2 hr | <1 hr | <1 hr | <45 min | 6.5 hr | 3 hr |
Enrichment format | IMAC-agarose | Immobilized conA-lectin-agarose | Immobilized WGA-lectin-agarose | Immobilized polyubiqitin affinity-agarose | Immobilized strepavidin-agarose | Immobilized anti-TAMRA mAb-agarose |
90003 (10 columns) | 89804 (10 rxn) | 89805 (10 rxn) | 89899 (15 rxn) | 88310 (16 rxn) | 88318 (6.8 µg) |
下流の質量分析法では、ペプチドエンリッチメントおよび/または分取が、ペプチドを少量のタンパク質から検出するため、および/またはプロテオミクス分析目的でサンプルの複雑性を減らすためにしばしば必要になります。
キット | Phosphoprotein yield (ug)* | Enrichment time (hours) |
---|---|---|
Pierce® Phosphoprotein Enrichment Kit | 300 | 1.5 |
Supplier Q kit | 88 | 4.5 |
Supplier I kit | 52** | 3.5 |
Supplier C kit | 160 | 3 |
Supplier E kit | Too dilute to determine | 5 |
*From 2 mg total protein.
**Based on maximum 1 mg load per manufacturer’s protocol.*総タンパク2 mgより。
**メーカーの 1 プロトコル当たり最大1 mgロードに基づいています。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.