Sanger Sequencing With Ampliseq Primers and Libraries

포르말린 고정 파라핀 포매(FFPE) 조직은 조직학 및 병리학 실험실의 표준 샘플 유형이지만, 고정 과정 중에 흔히 DNA가 손상되어 분자 유전자 분석을 위한 시작 물질의 양이 제한적입니다. 최소의 샘플량에서 최대한의 정보를 추출할 수 있도록 1ng 미만의 FFPE DNA에서 확실한 유전형분석 결과를 확보할 수 있는 workflow를 개발했습니다. 이 workflow에서는 Sanger 시퀀싱과 함께 Ion AmpliSeq™ 기술을 사용하므로, 소량의 샘플/표적으로 연구를 실시하는 일반 실험실뿐 아니라 작은 대립유전자를 확인하기 위해 직교 방법을 필요로 하는 고효율 실험실에 이상적인 솔루션입니다.

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Researchers who need a fast and economical solution for confirmation of uncertain NGS results can rely on the robustness and sensitivity of PCR coupled with Sanger sequencing.

  • Sanger sequencing results can be obtained using Ion AmpliSeq library primer sequences or from existing Ion AmpliSeq library pools
  • Robust genotyping results using both Ion AmpliSeq next-generation sequencing (NGS) and confirmatory sequencing can be generated from less than 1 ng of FFPE DNA
  • Previously sequenced NGS libraries can be used as a direct input for confirmatory Sanger sequencing

Application note: Sanger sequencing using Ion AmpliSeq primers and libraries

This study demonstrates how Ion AmpliSeq panels analyzed by Sanger sequencing can be used to verify the presence of unusual or low-frequency alleles in a sample.

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Sanger sequencing workflow

Our simple and fast Sanger sequencing workflow can be completed in less than one workday, from sample to answer. We offer Applied Biosystems products to support many steps of our recommended workflow, from PCR amplification to data analysis. Learn more about each step of our recommended Sanger sequencing workflow.

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Build your knowledge

Get bite-sized answers to your everyday Sanger sequencing and fragment analysis questions

Learn about the history of sequencing and how to pick the right platform for your research needs

workflow에 대한 자세한 정보는 위의 어플리케이션 노트에 나와 있습니다. 특징:

  • Sanger 시퀀싱 결과는 Ion AmpliSeq™ 라이브러리 primer 염기서열을 사용하거나 기존 Ion AmpliSeq 라이브러리 풀에서 확보할 수 있음
  • Ion AmpliSeq™ NGS(next-generation sequencing)와 확실한 Sanger 시퀀싱을 사용한 정확한 유전형분석 결과를 1ng 미만의 FFPE DNA에서 도출할 수 있음
  • 이전에 시퀀싱한 NGS 라이브러리를 확실한 Sanger 시퀀싱에 직접 입력할 수 있음

FFPE DNA 시퀀싱 workflow


1 FFPE DNA 분리
identify variants

1ng의 FFPE DNA로 시작

3primer 설계
choose primers

Primer Designer 도구를 사용해 Ion AmpliSeq primer에 보편적 M-13 꼬리 첨가

4시퀀싱
run sequence

3500 Genetic Analyzer를 사용해 Sanger 시퀀싱 실시

5데이터 분석
analyze data

NGC 모듈 또는 Minor Variant Finder Software를 사용해 데이터 분석

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.