Quantificação de RNA/DNA | Thermo Fisher Scientific

RNA and DNA quantification instruments offered by Thermo Fisher Scientific: Qubit, NanoDrop and plate reader platforms

Comparação de tecnologia
Espectrofotômetros UV-Vis
Fluorímetros
Informações de pedidos
FAQs e recursos

Tecnologias de detecção usadas para quantificação de RNA/DNA

A quantificação de DNA e a quantificação de RNA, geralmente chamadas de quantificação de ácido nucleico, são comumente realizadas para determinar a concentração média de DNA ou RNA em uma amostra antes de prosseguir com os experimentos posteriores. A pureza da amostra também é uma consideração importante para calcular com precisão a quantidade de DNA ou RNA em uma amostra. Existem duas tecnologias ópticas normalmente usadas para quantificar ácidos nucleicos: Medição de UV-Vis e medição de fluorescência. A escolha da tecnologia certa para as suas amostras, o fluxo de trabalho e o rendimento resulta em uma quantificação precisa de RNA ou DNA e pode poupar tempo e dinheiro significativos, ajudando a evitar falhas experimentais posteriores.

	Fotometria (UV-Vis)	Fluorescência
Como o sinal óptico é gerado?	A medição fotométrica dos ácidos nucleicos baseia-se nas propriedades de capacidade de absorção intrínseca dos ácidos nucleicos (DNA e RNA). Quando um espectro de absorção é medido, os ácidos nucleicos absorvem a luz com um pico característico a 260 nm.	A medição fluorométrica de ácidos nucleicos baseia-se na utilização de moléculas fluorescentes que se ligam seletivamente ao DNA ou ao RNA.
	Espectro típico de absorção de RNA/DNA.	Os fluoróforosse ligam seletivamente ao DNA, RNA ou proteína. Os fluoróforos só emitem sinal quando ligados ao alvo.
Como o sinal óptico é medido?	O sinal é medido por espectrofotômetros ou espectrômetros. A atenuação na luz que chega ao detector após passar pela amostra é medida em relação à luz incidente e expressa como valores de absorção da amostra na solução.	O sinal é medido por fluorômetros. A amostra é excitada com luz filtrada (no comprimento de onda de excitação, e a luz emitida (no comprimento de onda de emissão) é registrada por um detector.

	A separação do comprimento de onda pode ocorrer antes ou depois de a luz passar pela amostra, e o caminho da luz óptica pode ser horizontal ou vertical.	A separação do comprimento de onda pode ocorrer de várias maneiras (por exemplo, com filtros ou com monocromadores)
Como é calculada a concentração de ácidos nucleicos?	As concentrações de ácidos nucleicos podem ser calculadas diretamente a partir de seus valores medidos de absorbância a 260 nm, usando a equação de Beer-Lambert: em que: C = concentração de ácido nucleico em molar (M) A = absorção de UV em unidades de absorção (AU) ε = coeficiente de capacidade de absorção molar dependente do comprimento de onda (ou coeficiente de extinção) em M^-1cm^-1 L = caminho da luz em cm (cm) Esse cálculo de concentração é automatizado em muitos instrumentos.	As concentrações de ácidos nucleicos são medidas usando o sinal de fluorescência da amostra, e uma curva de calibração é gerada a partir de amostras padrão de concentração conhecida e ajustada aos modelos de regressão apropriados. Curva padrão de fluorescência típica. O limite de detecção e a resposta linear das medições são específicos para cada ensaio.
Quais são as vantagens?	É simples: corantes, preparação de amostras ou padrões não são necessários É possível fornecer medições diretas das relações de pureza – A260/280 e A260/230 É possível fornecer informações sobre contaminantes – pode-se identificar contaminação em amostras (proteínas, fenol, sais de guanidina) e fornecer concentrações corrigidas (aplicável a instrumentos NanoDrop ^C)	É específico – a medição realizada é seletiva para DNA, ds DNA, ssDNA e RNA É sensível – pode medir pg/mL; é o método recomendado para amostras de ácido nucleico muito diluídas É preciso, apesar de a contaminação estar presente na amostra, incluindo contaminantes de ácidos nucleicos
Quais são as desvantagens?	Não é seletivo, não distingue entre DNA ou RNA Tem sensibilidade limitada: os limites de detecção são maiores do que os métodos baseados em fluorescência	Leva mais tempo: é necessária a preparação do reagente e da amostra Nenhuma informação de pureza é fornecida

Oferecemos uma gama de instrumentos para a quantificação de ácido nucleico utilizando fotometria ou medições de fluorescência.

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Instrumentos de escolha para quantificação fotométrica de RNA/DNA UV-Vis

Os instrumentos da Thermo Scientific populares para quantificação de RNA/DNA UV-Vis incluem o espectrofotômetro NanoDrop One/One^C para uma análise conveniente de microvolume de amostra única, o espectrofotômetro NanoDrop 8000 para análise de microvolume de 8 amostras e a escolha do Espectrofotômetro de multiplacas Multiskan SkyHigh ou do Leitor multimodo Varioskan LUX para até 16 amostras de microvolume, bem como placas de 96 a 384 poços. A tabela abaixo fornece detalhes adicionais sobre o desempenho do instrumento.

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Instrumentos de escolha para quantificação de RNA/DNA por fluorescência

Os instrumentos populares e de alto desempenho para a realização de quantificação de RNA ou DNA por fluorescência incluem o fluorímetro Invitrogen Qubit 4 para medições de fluorescência de microvolume de amostra única, o fluorímetro Invitrogen Qubit Flex para medições de fluorescência de microvolume de 8 amostras, o fluorímetro de microplacas Thermo Scientific Fluoroskan para medições de fluorescência de microplacas de 96 a 384 poços com base em filtros e o leitor de microplacas multimodo Thermo Scientific Varioskan LUX para medições de fluorescência baseadas em monocromadores de microplacas de 96 a 1536 poços. A tabela abaixo fornece detalhes adicionais sobre o desempenho do instrumento.

	Qubit 4	Qubit Flex	Família Fluoroskan	Varioskan LUX

Qual é o limite de concentração inferior (dsDNA)?	0,005 ng/µL	0,005 ng/µL	Depende do kit de ensaio Quant-iT, das concentrações padrão e dos pontos da curva utilizada** Veja os detalhes0,006 ng/µL	Depende do kit de ensaio Quant-iT, das concentrações padrão e dos pontos da curva utilizada** Veja os detalhes0,003 ng/µL
Qual é o limite superior de detecção (dsDNA)?	2000 ng/µL	2000 ng/µL	Depende do kit de ensaio Quant-iT e das condições do ensaio	Depende do kit de ensaio Quant-iT e das condições do ensaio
Quais são os formatos de amostra disponíveis?	Tubos de ensaio Qubit Veja os detalhesTubos de polipropileno de paredes finas e baixa fluorescência	Tiras de tubo Qubit Flex Veja os detalhesTiras de tubo de PCR de paredes finas e baixa fluorescência	Placas de 96-384 poços	Placas de 96-1536 poços
Quantas amostras podem ser medidas por vez? (rendimento)	1	Até 8	Depende do formato do ensaio Veja os detalhes até 96 com placas de 96 poços até 384 com placas de 384 poços	Depende do formato do ensaio Veja os detalhes até 96 com placas de 96 poços até 384 com placas de 384 poços até 1536 com placas de 1536 poços
Qual volume de amostra é necessário para medir?	1-20 µL	1-20 µL	Dependendo do formato do ensaio, do fluoróforo medido, entre outros	Dependendo do formato do ensaio, do fluoróforo medido, entre outros
Fornece informações sobre pureza da amostra?	Não	Não	Não	Não
Detecta contaminantes na amostra?	Não	Não	Não	Não
Faz distinção entre DNA e RNA na amostra?	Sim Veja os detalhesUsando corantes fluorescentes específicos para DNA ou RNA	Sim Veja os detalhesUsando corantes fluorescentes específicos para DNA ou RNA	Sim Veja os detalhesUsando corantes fluorescentes específicos para DNA ou RNA	Sim Veja os detalhesUsando corantes fluorescentes específicos para DNA ou RNA
Suporta a quantificação de oligonucleótidos?	Sim Veja os detalhesCom o kit de ensaio ssDNA	Sim Veja os detalhesCom o kit de ensaio ssDNA	Sim Veja os detalhesCom o kit de ensaio Quant-iT OliGreen	Sim Veja os detalhesCom o kit de ensaio Quant-iT OliGreen
Fornece protocolos pré-configurados?	Sim Veja os detalhesHá protocolos pré-configurados na tela sensível ao toque da interface do usuário	Sim Veja os detalhesHá protocolos pré-configurados na tela sensível ao toque da interface do usuário	Sim Veja os detalhesHá protocolos pré-configurados na Biblioteca em nuvem do SkanIt, grátis com o software SkanIt	Sim Veja os detalhesHá protocolos pré-configurados na Biblioteca em nuvem do SkanIt, grátis com o software SkanIt
Se conecta ao Thermo Fisher Connect?	Sim	Sim	Sim	Não
Está em conformidade com 21CFR Parte 11?	Não	Não	Sim Veja os detalhescom o software SkanIt Drug Discovery Edition	Sim Veja os detalhescom o software SkanIt Drug Discovery Edition
Oferece compatibilidade com automação robótica?	Não	Não	Sim	Sim
Qual é a facilidade geral de uso?	++++	++++	++	++
Qual é o protocolo básico?	Veja os detalhes Prepare as soluções de trabalho usando a Calculadora de reagentes integrada Pipete amostras e padrões de acordo com as instruções mostradas na tela sensível ao toque Os resultados estão disponíveis em segundos	Veja os detalhes Prepare as soluções de trabalho usando a Calculadora de reagentes integrada Pipete amostras e padrões de acordo com as instruções mostradas na tela sensível ao toque Os resultados estão disponíveis em segundos	Veja os detalhes Prepare reagentes, amostras e padrões de acordo com as instruções específicas do kit Quant-iT Pipete-os em microplacas Selecione o protocolo pré-criado na Biblioteca em nuvem SkanIt ou configure o ensaio usando o software SkanIt Meça as placas com o instrumento	Veja os detalhes Prepare reagentes, amostras e padrões de acordo com as instruções específicas do kit Quant-iT Pipete-os em microplacas Selecione o protocolo pré-criado na Biblioteca em nuvem SkanIt ou configure o ensaio usando o software SkanIt Meça as placas com o instrumento
Qual é a categoria de preço do instrumento?	Baixa	Baixa-Média	Média	Alta
Quais são os custos para o usuário?	Requer ensaios Qubit Requer tubos de polipropileno de parede fina Veja os detalhesRecomendados: Tubos Qubit	Requer ensaios Qubit Requer tiras de tubo PCR Veja os detalhesRecomendados: Tiras de tubo Qubit Flex	Requer ensaios Quant-It Requer placas compatíveis com fluorescência Veja os detalhesRecomendados: Placas Nunc não tratadas	Requer ensaios Quant-It Requer placas compatíveis com fluorescência Veja os detalhesRecomendados: Placas Nunc não tratadas
Aqui são apresentadas as gamas de quantificação inferior e superior medidas com o kit de alta sensibilidade (HS) Qubit dsDNA (Q32851), kit de gama ampla (BR) Qubit dsDNA (Cat. Nº Q32850) respectivamente e usando volume de amostra variável (1-20 µL). ** Limite de detecção (LOD) usando o kit HS de ensaio Quant-iT dsDNA (Cat. Nº Q33120) como instruído. LOD estimado segundo a IUPAC, com base na precisão dos espaços em branco (3*SD). Os resultados variam dependendo das conexões de curva, das concentrações padrão e dos kits usados.

Espectrofotometria UV-Vis e Vis

Enfrente seus desafios analíticos com nossa linha completa de espectrofotômetros visíveis por ultravioleta (UV-Vis). Nossos designs premiados e o software de fácil utilização ajudam você a quantificar, avaliar a pureza e muito mais.

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Fluorômetros e fluorescência

Use fluorômetros para quantificar, detectar e monitorar analitos e suas reações medindo a intensidade do sinal fluorescente dos corantes vinculados a moléculas biológicas, bem como moléculas naturalmente fluorescentes baseadas em comprimentos de onda de excitação de assinatura (Ex) e emissão (Em).

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Informações para pedidos

Espectrofotômetros UV-Vis

Número de catálogo	Nome	Preço
ND-ONE-W	Espectrofotômetro NanoDrop One Microvolume UV-Vis com Wi-Fi	Solicite uma cotação
ND-ONEC-W	Espectrofotômetro OneC Microvolume UV-Vis com Wi-Fi	Solicite uma cotação
912A1100	Espectrofotômetro NanoDrop Eight	Solicite uma cotação
NDEIGHT-LAPTOP	Espectrofotômetro NanoDrop Eight com laptop	Solicite uma cotação
A51119700DPC	Multiskan SkyHigh com tela sensível ao toque, cubeta e placa μDrop Duo	Solicite uma cotação

Perguntas frequentes

P: Qual é a diferença entre a quantificação de UV e de DNA de fluorescência? Qual tecnologia de quantificação de DNA devo escolher?
R: As tecnologias UV e de fluorescência funcionam de forma diferente para quantificar o DNA. A quantificação de UV depende da capacidade de absorção intrínseca das moléculas de DNA e RNA, enquanto a quantificação por fluorescência usa corantes que se ligam especificamente à molécula de sua escolha. Com a tecnologia UV, a quantificação não é tão sensível, mas tem o intervalo dinâmico mais amplo e também fornece dados sobre a pureza da amostra. Além disso, é a mais rápido porque não há preparação de reagente. Com a tecnologia de fluorescência, você obtém sensibilidade mais alta e dados específicos de moléculas, mas ela tem um intervalo dinâmico menor e é necessária a preparação de reagentes, o que leva um tempo um pouco maior. A tecnologia de que você precisa depende do que você precisa para o seu experimento.
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P: Qual é o melhor instrumento de quantificação de DNA? Qual é o melhor instrumento de quantificação de RNA?
R: Todos os instrumentos de DNA oferecidos pela Thermo Fisher Scientific são de excelente qualidade. Para encontrar o instrumento certo para quantificar o DNA ou o RNA em seu laboratório, explore a comparação detalhada dos espectrofotômetros UV-Vis (link para #espectrofotômetros) e fluorômetros (link para #fluorômetros). Aspectos como sensibilidade, produtividade e orçamento podem ser considerações iniciais na seleção de um instrumento de quantificação de DNA. Você também pode considerar se precisa de especificidade do alvo, informações de pureza da amostra ou faixa dinâmica ampla.
Veja Espectrofotômetros UV-Vis
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Recursos

Suporte

Centros de suporte de quantificação para ácido nucleico
Encontre dicas, ajuda para solução de problemas e recursos para o fluxo de trabalho de quantificação de ácido nucleico.

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For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

	NanoDrop One/One^c	Nanodrop Eight	Multiskan SkyHigh	Varioskan LUX

Qual é o limite de detecção inferior (dsDNA)?	Pedestal: 2,0 ng/µL Cubeta: 0,2 ng/µL	2,5 ng/µL	Depende do formato da amostra e do volume utilizado (no caso de microplacas)* Veja os detalhes Cubeta: 0,45 ng/µL Placa µDrop: 9 ng/µL Microplacas: Placas de 96 poços (normal) 70 µL (mínimo) 2,1 ng/µL 140 µL (bom) 1,1 ng/µL 370 µL (máximo) 0,4 ng/µL Placas de 96 poços (meia área) 35 µL (mínimo) 2,1 ng/µL 60 µL (bom) 1,2 ng/µL 180 µL (máximo) 0,5 ng/µL Placas de 384 poços 20 µL (mínimo) 2,5 ng/µL 40 µL (bom) 1,3 ng/µL 120 µL (máximo) 0,5 ng/µL	Depende do formato da amostra e do volume utilizado (no caso de microplacas)* Veja os detalhes Cubeta: 0,15 ng/µL Placa µDrop: 3 ng/µL Microplacas: Placas de 96 poços (normal) 70 µL (mínimo) 0,7 ng/µL 140 µL (bom) 0,4 ng/µL 370 µL (máximo) 0,5 ng/µL Placas de 96 poços (meia área) 35 µL (mínimo) 0,7 ng/µL 60 µL (bom) 0,4 ng/µL 180 µL (máximo) 0,1 ng/µL Placas de 384 poços 20 µL (mínimo) 0,8 ng/µL 40 µL (bom) 0,4 ng/µL 120 µL (máximo) 0,2 ng/µL
Qual é o limite superior de detecção (dsDNA)?	Pedestal: 27 500 ng/µL Cubeta: 75 ng/µL	10000 ng/µL	Depende do formato da amostra e do volume utilizado (no caso de microplacas) Veja os detalhes Cubeta: 125 ng/µL Placa µDrop: 2500 ng/µL Microplacas: Placas de 96 poços (normal) 70 µL (mínimo) 590 ng/µL 140 µL (bom) 310 ng/µL 370 µL (máximo) 120 ng/µL Placas de 96 poços (meia área) 35 µL (mínimo) 560 ng/µL 60 µL (bom) 320 ng/µL 180 µL (máximo) 110 ng/µL Placas de 384 poços 20 µL (mínimo) 690 ng/µL 40 µL (bom) 350 ng/µL 120 µL (máximo) 120 ng/µL	Depende do formato da amostra e do volume utilizado (no caso de microplacas) Veja os detalhes Cubeta: 200 ng/µL Placa µDrop: 4000 ng/µL Microplacas: Placas de 96 poços (normal) 70 µL (mínimo) 950 ng/µL 140 µL (bom) 500 ng/µL 370 µL (máximo) 190 ng/µL Placas de 96 poços (meia área) 35 µL (mínimo) 900 ng/µL 60 µL (bom) 520 ng/µL 180 µL (máximo) 190 g/µL Placas de 384 poços 20 µL (mínimo) 1100 ng/µL 40 µL (bom) 570 ng/µL 120 µL (máximo) 200 ng/µL
Quais são os formatos de amostra disponíveis?	Gota (1 µL) cubetas	Gota (1 µL)	Placas de 96-384 poços Placa µDrop (2-10 µL) cubetas (nem todos os modelos)	Placas de 6-384 poços Placa µDrop (2-10 µL) cubetas (nem todos os modelos)
Quantas amostras podem ser medidas por vez? (rendimento)	Uma amostra por vez	Até 8	Depende do formato do ensaio Veja os detalhes uma amostra por vez com cubetas até 16 com placa µDrop até 96 com placas de 96 poços até 384 com placas de 384 poços	Depende do formato do ensaio Veja os detalhes uma amostra por vez com cubetas até 16 com placa µDrop até 96 com placas de 96 poços até 384 com placas de 384 poços
Qual volume de amostra é necessário para medir?	1 µL	1 µL	Apenas 2 µL, dependendo do formato do ensaio Veja os detalhes 2-10 µL com placa µDrop (o menor volume necessário) 70-300 µL com placas de 96 poços (normal) 20-100 µL com placas de 384 poços 1 mL com cubetas de 10 x 10 mm (70 µL para microcubetas)	Apenas 2 µL, dependendo do formato do ensaio Veja os detalhes 2-10 µL com placa µDrop (o menor volume necessário) 70-300 µL com placas de 96 poços (normal) 20-100 µL com placas de 384 poços 1 mL com cubetas de 10 x 10 mm (70 µL para microcubetas)
Quanto tempo leva para medir uma amostra?	8 segundos	< 20 segundos para 8 amostras	Cerca de 1 minuto para 16 amostras de microvolume na placa µDrop Veja os detalhesQuando realizado com a tela sensível ao toque da interface do usuário ou com o software SkanIt (modo rápido)	Cerca de 1,3 minuto para 16 amostras de microvolume na placa µDrop Veja os detalhesQuando realizado com a tela sensível ao toque da interface do usuário ou com o software SkanIt (modo rápido)
Fornece dados espectrais da amostra?	Sim	Sim	Sim	Sim
Fornece informações sobre pureza da amostra?	Sim Veja os detalhesFornece dados espectrais completos (relações A260/A280 e A260/A230), bem como análise de contaminantes Acclaro	Sim Veja os detalhesFornece dados espectrais completos (relações A260/A280 e A260/A230), bem como análise de contaminantes Acclaro	Sim Veja os detalhesFornece dados espectrais completos (relações A260/A280 e A260/A230)	Sim Veja os detalhesFornece dados espectrais completos (relações A260/A280 e A260/A230)
Detecta contaminantes específicos na amostra?	Sim Veja os detalhesa tecnologia Acclaro Sample Intelligence detecta proteína, fenol e sais de guanidina e fornece concentração real dos ácidos nucleicos	Sim Veja os detalhesa tecnologia Acclaro Sample Intelligence detecta proteína, fenol e sais de guanidina	Não Consulte os detalhesAlgumas informações estão disponíveis, com base nas taxas de pureza	Não Consulte os detalhesAlgumas informações estão disponíveis, com base nas taxas de pureza
Faz distinção entre DNA e RNA na amostra?	Sim Veja os detalhesFaz distinção entre DNA e RNA de mamíferos	Sim Veja os detalhesFaz distinção entre DNA e RNA de mamíferos	Não	Não
Suporta a quantificação de oligonucleótidos?	Sim Veja os detalhesCom programas e métodos personalizados	Sim Veja os detalhesCom programa e métodos personalizados	Sim	Sim
Fornece protocolos pré-configurados?	Sim Veja os detalhesHá tela sensível ao toque da interface do usuário e protocolos personalizados	Sim Veja os detalhesHá tela sensível ao toque da interface do usuário e protocolos personalizados	Sim Veja os detalhesHá protocolos pré-configurados na tela sensível ao toque da interface e na Biblioteca em nuvem do software SkanIt, grátis com o software SkanIt	Sim Veja os detalhesHá protocolos pré-configurados na Biblioteca em nuvem do software SkanIt, grátis com o software SkanIt
Se conecta ao Thermo Fisher Connect?	Sim	Não	Sim	Não
Está em conformidade com 21CFR Parte 11?	Sim	Sim	Sim Veja os detalhescom o software SkanIt Drug Discovery Edition	Sim Veja os detalhescom o software SkanIt Drug Discovery Edition
Oferece compatibilidade com automação robótica?	Não	Não	Sim	Sim
Como o instrumento é operado?	Por meio de uma interface de usuário com tela sensível ao toque ou do software de controle para PC NanoDrop One	Com um software para PC (software operacional Nanodrop Eight)	Por meio de uma interface de usuário com tela sensível ao toque ou do software para PC (software SkanIt)	Por meio de um software para PC (software SkanIt)
Qual é a facilidade geral de uso?	++++	++++	++++	+++
Qual é o protocolo básico?	Veja os detalhes Pipete solução tampão no pedestal e no instrumento vazio Pipete amostra diretamente no pedestal Siga as instruções na tela sensível ao toque para executar o protocolo Os resultados estão disponíveis em segundos	Veja os detalhes Pipete solução tampão em todos os 8 pedestais e fazer o branco no instrumento Pipete amostras diretamente em 8 pedestais Execute o protocolo usando o software do PC Os resultados estão disponíveis em segundos	Veja os detalhes Pipete o branco e as amostras em microplacas ou na placa µDrop Escolha como deseja executar o ensaio: Escolha o ensaio pré-configurado usando a tela sensível ao toque Escolha o ensaio pré-criado na Biblioteca em nuvem SkanIt dentro do software SkanIt Configure o ensaio usando o software SkanIt Os resultados estão disponíveis rapidamente	Veja os detalhes Pipete o branco e as amostras em microplacas ou na placa µDrop Escolha o protocolo pré-integrado na Biblioteca em nuvem SkanIt ou configure o ensaio com o software SkanIt Os resultados estão disponíveis rapidamente
Qual é a categoria de preço do instrumento?	Média	Média	Média	Alta
Quais são os custos para o usuário?	Sem custos recorrentes	Sem custos recorrentes	Se estiver usando a placa µDrop, não haverá custos recorrentes; caso contrário, placas transparentes compatíveis com UV	Se estiver usando a placa µDrop, não haverá custos recorrentes; caso contrário, placas transparentes compatíveis com UV
* Limite teórico de detecção (LOD), estimado de acordo com a IUPAC, com base na precisão dos espaços vazios (3*SD), a partir das especificações de precisão dos leitores de microplacas Multiskan SkyHigh e Varioskan LUX.