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A quantificação de DNA e a quantificação de RNA, geralmente chamadas de quantificação de ácido nucleico, são comumente realizadas para determinar a concentração média de DNA ou RNA em uma amostra antes de prosseguir com os experimentos posteriores. A pureza da amostra também é uma consideração importante para calcular com precisão a quantidade de DNA ou RNA em uma amostra. Existem duas tecnologias ópticas normalmente usadas para quantificar ácidos nucleicos: Medição de UV-Vis e medição de fluorescência. A escolha da tecnologia certa para as suas amostras, o fluxo de trabalho e o rendimento resulta em uma quantificação precisa de RNA ou DNA e pode poupar tempo e dinheiro significativos, ajudando a evitar falhas experimentais posteriores.
Fotometria (UV-Vis) | Fluorescência | |
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Como o sinal óptico é gerado? | A medição fotométrica dos ácidos nucleicos baseia-se nas propriedades de capacidade de absorção intrínseca dos ácidos nucleicos (DNA e RNA). Quando um espectro de absorção é medido, os ácidos nucleicos absorvem a luz com um pico característico a 260 nm. | A medição fluorométrica de ácidos nucleicos baseia-se na utilização de moléculas fluorescentes que se ligam seletivamente ao DNA ou ao RNA. |
![]() Espectro típico de absorção de RNA/DNA. | ![]() Os fluoróforosse ligam seletivamente ao DNA, RNA ou proteína. Os fluoróforos só emitem sinal quando ligados ao alvo. | |
Como o sinal óptico é medido? |
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Como é calculada a concentração de ácidos nucleicos? |
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Quais são as vantagens? |
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Quais são as desvantagens? |
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Oferecemos uma gama de instrumentos para a quantificação de ácido nucleico utilizando fotometria ou medições de fluorescência.
Os instrumentos da Thermo Scientific populares para quantificação de RNA/DNA UV-Vis incluem o espectrofotômetro NanoDrop One/OneC para uma análise conveniente de microvolume de amostra única, o espectrofotômetro NanoDrop 8000 para análise de microvolume de 8 amostras e a escolha do Espectrofotômetro de multiplacas Multiskan SkyHigh ou do Leitor multimodo Varioskan LUX para até 16 amostras de microvolume, bem como placas de 96 a 384 poços. A tabela abaixo fornece detalhes adicionais sobre o desempenho do instrumento.
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NanoDrop One/Onec | Nanodrop Eight | Multiskan SkyHigh | Varioskan LUX | |
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Qual é o limite de detecção inferior (dsDNA)? |
| 2,5 ng/µL | Depende do formato da amostra e do volume utilizado (no caso de microplacas)* Veja os detalhes
Placas de 96 poços (normal)
| Depende do formato da amostra e do volume utilizado (no caso de microplacas)* Veja os detalhes
Placas de 96 poços (normal)
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Qual é o limite superior de detecção (dsDNA)? |
| 10000 ng/µL | Depende do formato da amostra e do volume utilizado (no caso de microplacas) Veja os detalhes
Placas de 96 poços (normal)
| Depende do formato da amostra e do volume utilizado (no caso de microplacas) Veja os detalhes
Placas de 96 poços (normal)
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Quais são os formatos de amostra disponíveis? |
| Gota (1 µL) |
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Quantas amostras podem ser medidas por vez? (rendimento) | Uma amostra por vez | Até 8 | Depende do formato do ensaio Veja os detalhes
| Depende do formato do ensaio Veja os detalhes
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Qual volume de amostra é necessário para medir? | 1 µL | 1 µL | Apenas 2 µL, dependendo do formato do ensaio Veja os detalhes
| Apenas 2 µL, dependendo do formato do ensaio Veja os detalhes
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Quanto tempo leva para medir uma amostra? | 8 segundos | < 20 segundos para 8 amostras | Cerca de 1 minuto para 16 amostras de microvolume na placa µDrop Veja os detalhesQuando realizado com a tela sensível ao toque da interface do usuário ou com o software SkanIt (modo rápido) | Cerca de 1,3 minuto para 16 amostras de microvolume na placa µDrop Veja os detalhesQuando realizado com a tela sensível ao toque da interface do usuário ou com o software SkanIt (modo rápido) |
Fornece dados espectrais da amostra? | Sim | Sim | Sim | Sim |
Fornece informações sobre pureza da amostra? | Sim Veja os detalhesFornece dados espectrais completos (relações A260/A280 e A260/A230), bem como análise de contaminantes Acclaro | Sim Veja os detalhesFornece dados espectrais completos (relações A260/A280 e A260/A230), bem como análise de contaminantes Acclaro | Sim Veja os detalhesFornece dados espectrais completos (relações A260/A280 e A260/A230) | Sim Veja os detalhesFornece dados espectrais completos (relações A260/A280 e A260/A230) |
Detecta contaminantes específicos na amostra? | Sim Veja os detalhesa tecnologia Acclaro Sample Intelligence detecta proteína, fenol e sais de guanidina e fornece concentração real dos ácidos nucleicos | Sim Veja os detalhesa tecnologia Acclaro Sample Intelligence detecta proteína, fenol e sais de guanidina | Não Consulte os detalhesAlgumas informações estão disponíveis, com base nas taxas de pureza | Não Consulte os detalhesAlgumas informações estão disponíveis, com base nas taxas de pureza |
Faz distinção entre DNA e RNA na amostra? | Sim Veja os detalhesFaz distinção entre DNA e RNA de mamíferos | Sim Veja os detalhesFaz distinção entre DNA e RNA de mamíferos | Não | Não |
Suporta a quantificação de oligonucleótidos? | Sim Veja os detalhesCom programas e métodos personalizados | Sim Veja os detalhesCom programa e métodos personalizados | Sim | Sim |
Fornece protocolos pré-configurados? | Sim Veja os detalhesHá tela sensível ao toque da interface do usuário e protocolos personalizados | Sim Veja os detalhesHá tela sensível ao toque da interface do usuário e protocolos personalizados | Sim Veja os detalhesHá protocolos pré-configurados na tela sensível ao toque da interface e na Biblioteca em nuvem do software SkanIt, grátis com o software SkanIt | Sim Veja os detalhesHá protocolos pré-configurados na Biblioteca em nuvem do software SkanIt, grátis com o software SkanIt |
Se conecta ao Thermo Fisher Connect? | Sim | Não | Sim | Não |
Está em conformidade com 21CFR Parte 11? | Sim | Sim | Sim Veja os detalhescom o software SkanIt Drug Discovery Edition | Sim Veja os detalhescom o software SkanIt Drug Discovery Edition |
Oferece compatibilidade com automação robótica? | Não | Não | Sim | Sim |
Como o instrumento é operado? | Por meio de uma interface de usuário com tela sensível ao toque ou do software de controle para PC NanoDrop One | Com um software para PC (software operacional Nanodrop Eight) | Por meio de uma interface de usuário com tela sensível ao toque ou do software para PC (software SkanIt) | Por meio de um software para PC (software SkanIt) |
Qual é a facilidade geral de uso? | ++++ | ++++ | ++++ | +++ |
Qual é o protocolo básico? | Veja os detalhes
| Veja os detalhes
| Veja os detalhes
| Veja os detalhes
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Qual é a categoria de preço do instrumento? | Média | Média | Média | Alta |
Quais são os custos para o usuário? | Sem custos recorrentes | Sem custos recorrentes | Se estiver usando a placa µDrop, não haverá custos recorrentes; caso contrário, placas transparentes compatíveis com UV | Se estiver usando a placa µDrop, não haverá custos recorrentes; caso contrário, placas transparentes compatíveis com UV |
* Limite teórico de detecção (LOD), estimado de acordo com a IUPAC, com base na precisão dos espaços vazios (3*SD), a partir das especificações de precisão dos leitores de microplacas Multiskan SkyHigh e Varioskan LUX. |
Os instrumentos populares e de alto desempenho para a realização de quantificação de RNA ou DNA por fluorescência incluem o fluorímetro Invitrogen Qubit 4 para medições de fluorescência de microvolume de amostra única, o fluorímetro Invitrogen Qubit Flex para medições de fluorescência de microvolume de 8 amostras, o fluorímetro de microplacas Thermo Scientific Fluoroskan para medições de fluorescência de microplacas de 96 a 384 poços com base em filtros e o leitor de microplacas multimodo Thermo Scientific Varioskan LUX para medições de fluorescência baseadas em monocromadores de microplacas de 96 a 1536 poços. A tabela abaixo fornece detalhes adicionais sobre o desempenho do instrumento.
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Qubit 4 | Qubit Flex | Família Fluoroskan | Varioskan LUX | |
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Qual é o limite de concentração inferior (dsDNA)? | 0,005 ng/µL | 0,005 ng/µL | Depende do kit de ensaio Quant-iT, das concentrações padrão e dos pontos da curva utilizada** Veja os detalhes0,006 ng/µL | Depende do kit de ensaio Quant-iT, das concentrações padrão e dos pontos da curva utilizada** Veja os detalhes0,003 ng/µL |
Qual é o limite superior de detecção (dsDNA)? | 2000 ng/µL | 2000 ng/µL | Depende do kit de ensaio Quant-iT e das condições do ensaio | Depende do kit de ensaio Quant-iT e das condições do ensaio |
Quais são os formatos de amostra disponíveis? | Tubos de ensaio Qubit Veja os detalhesTubos de polipropileno de paredes finas e baixa fluorescência | Tiras de tubo Qubit Flex Veja os detalhesTiras de tubo de PCR de paredes finas e baixa fluorescência | Placas de 96-384 poços | Placas de 96-1536 poços |
Quantas amostras podem ser medidas por vez? (rendimento) | 1 | Até 8 | Depende do formato do ensaio Veja os detalhes
| Depende do formato do ensaio Veja os detalhes
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Qual volume de amostra é necessário para medir? | 1-20 µL | 1-20 µL | Dependendo do formato do ensaio, do fluoróforo medido, entre outros | Dependendo do formato do ensaio, do fluoróforo medido, entre outros |
Fornece informações sobre pureza da amostra? | Não | Não | Não | Não |
Detecta contaminantes na amostra? | Não | Não | Não | Não |
Faz distinção entre DNA e RNA na amostra? | Sim Veja os detalhesUsando corantes fluorescentes específicos para DNA ou RNA | Sim Veja os detalhesUsando corantes fluorescentes específicos para DNA ou RNA | Sim Veja os detalhesUsando corantes fluorescentes específicos para DNA ou RNA | Sim Veja os detalhesUsando corantes fluorescentes específicos para DNA ou RNA |
Suporta a quantificação de oligonucleótidos? | Sim Veja os detalhesCom o kit de ensaio ssDNA | Sim Veja os detalhesCom o kit de ensaio ssDNA | Sim Veja os detalhesCom o kit de ensaio Quant-iT OliGreen | Sim Veja os detalhesCom o kit de ensaio Quant-iT OliGreen |
Fornece protocolos pré-configurados? | Sim Veja os detalhesHá protocolos pré-configurados na tela sensível ao toque da interface do usuário | Sim Veja os detalhesHá protocolos pré-configurados na tela sensível ao toque da interface do usuário | Sim Veja os detalhesHá protocolos pré-configurados na Biblioteca em nuvem do SkanIt, grátis com o software SkanIt | Sim Veja os detalhesHá protocolos pré-configurados na Biblioteca em nuvem do SkanIt, grátis com o software SkanIt |
Se conecta ao Thermo Fisher Connect? | Sim | Sim | Sim | Não |
Está em conformidade com 21CFR Parte 11? | Não | Não | Sim Veja os detalhescom o software SkanIt Drug Discovery Edition | Sim Veja os detalhescom o software SkanIt Drug Discovery Edition |
Oferece compatibilidade com automação robótica? | Não | Não | Sim | Sim |
Qual é a facilidade geral de uso? | ++++ | ++++ | ++ | ++ |
Qual é o protocolo básico? | Veja os detalhes
| Veja os detalhes
| Veja os detalhes
| Veja os detalhes
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Qual é a categoria de preço do instrumento? | Baixa | Baixa-Média | Média | Alta |
Quais são os custos para o usuário? |
Tubos Qubit |
Tiras de tubo Qubit Flex |
Placas Nunc não tratadas |
Placas Nunc não tratadas |
Aqui são apresentadas as gamas de quantificação inferior e superior medidas com o kit de alta sensibilidade (HS) Qubit dsDNA (Q32851), kit de gama ampla (BR) Qubit dsDNA (Cat. Nº Q32850) respectivamente e usando volume de amostra variável (1-20 µL). ** Limite de detecção (LOD) usando o kit HS de ensaio Quant-iT dsDNA (Cat. Nº Q33120) como instruído. LOD estimado segundo a IUPAC, com base na precisão dos espaços em branco (3*SD). Os resultados variam dependendo das conexões de curva, das concentrações padrão e dos kits usados. |
Enfrente seus desafios analíticos com nossa linha completa de espectrofotômetros visíveis por ultravioleta (UV-Vis). Nossos designs premiados e o software de fácil utilização ajudam você a quantificar, avaliar a pureza e muito mais.
Use fluorômetros para quantificar, detectar e monitorar analitos e suas reações medindo a intensidade do sinal fluorescente dos corantes vinculados a moléculas biológicas, bem como moléculas naturalmente fluorescentes baseadas em comprimentos de onda de excitação de assinatura (Ex) e emissão (Em).
P: Qual é a diferença entre a quantificação de UV e de DNA de fluorescência? Qual tecnologia de quantificação de DNA devo escolher?
R: As tecnologias UV e de fluorescência funcionam de forma diferente para quantificar o DNA. A quantificação de UV depende da capacidade de absorção intrínseca das moléculas de DNA e RNA, enquanto a quantificação por fluorescência usa corantes que se ligam especificamente à molécula de sua escolha. Com a tecnologia UV, a quantificação não é tão sensível, mas tem o intervalo dinâmico mais amplo e também fornece dados sobre a pureza da amostra. Além disso, é a mais rápido porque não há preparação de reagente. Com a tecnologia de fluorescência, você obtém sensibilidade mais alta e dados específicos de moléculas, mas ela tem um intervalo dinâmico menor e é necessária a preparação de reagentes, o que leva um tempo um pouco maior. A tecnologia de que você precisa depende do que você precisa para o seu experimento.
Saiba mais
P: Qual é o melhor instrumento de quantificação de DNA? Qual é o melhor instrumento de quantificação de RNA?
R: Todos os instrumentos de DNA oferecidos pela Thermo Fisher Scientific são de excelente qualidade. Para encontrar o instrumento certo para quantificar o DNA ou o RNA em seu laboratório, explore a comparação detalhada dos espectrofotômetros UV-Vis (link para #espectrofotômetros) e fluorômetros (link para #fluorômetros). Aspectos como sensibilidade, produtividade e orçamento podem ser considerações iniciais na seleção de um instrumento de quantificação de DNA. Você também pode considerar se precisa de especificidade do alvo, informações de pureza da amostra ou faixa dinâmica ampla.
Veja Espectrofotômetros UV-Vis
Veja Fluorômetros
Centros de suporte de quantificação para ácido nucleico
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For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
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