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非标记定量
更深入地了解蛋白质组学
非标记定量 (LFQ) 可作为同位素标记的经济高效的替代方法，能对任何来源的蛋白质样品进行相对定量。使用先进的色谱软件对样品进行单独测试，使不同的运行保持一致。这种方法的最大优点是不限制样本比较的数量。此外，也可使用任何裂解方法（CID、ETD、EThcD 和/或 HCD）进行多肽鉴定。
本页内容
为 LFQ 提供较快的通量和较广泛的蛋白质组覆盖范围
Thermo Scientific Orbitrap Astral 质谱仪兼具 Orbitrap 技术的成熟性能与新型 Astral 质量分析仪的速度 (200 Hz) 和灵敏度，可在非标记定量 (LFQ) 实验中实现较快的通量和较深的蛋白质组覆盖范围。 该质谱仪能够在不损失性能的情况下分析数千份样本，对数千种蛋白质进行准确、可重现的定量。
非标记相对定量仪器
 Orbitrap Ascend Tribrid 质谱仪 |  Orbitrap Exploris 480 质谱仪 |  Orbitrap Exploris 240 质谱仪 |  Orbitrap Astral 质谱仪 | |
|---|---|---|---|---|
| 优势 | 可较大限度地取得对复杂样本的了解。促进先进的蛋白质组学工作流程：非标记定量、全蛋白质组图谱分析和单细胞蛋白质组学，数据采集速度更快。Orbitrap Ascend 质谱仪的新型创新技术使实验范围具有极大的灵活性，助您更快速地获取有影响力的新结果，从而进一步突破当前科研成果。 | 凭借行业前列的单细胞灵敏度和准确度，从非靶向蛋白质组谱到靶向蛋白质组学实验中获得出色的见解。精选工作流程可加快大规模研究，提供高质量数据并节省时间，从而获取切实可行的结果。 | 优化的蛋白质组学解决方案，适用于小规模到大规模研究，周转时间短、性能优异、占用空间小。从蛋白质鉴定到多通路检测，通过日常多功能性扩展您的能力。 | 通过将 Orbitrap 质量分析仪的成熟性能与新型 Astral 质量分析仪的速度 (200 Hz) 和灵敏度相结合，Orbitrap Astral 质谱仪可实现较快的通量和更深层次的蛋白质组覆盖范围。 |
| 分辨率 | 在 m/z 200 时，可高达 480,000 (FWHM) | 在 m/z 195 时，可高达480,000 | 在 m/z 200 时，可高达 240,000 FWHM | Orbitrap 分辨率：在 m/z 200 时，设置范围为7500至480,000 (FWHM) Astral 分辨率：在 m/z 524 时，为80,000 (FWHM) |
| 扫描速度 | Orbitrap 质量分析仪 MSⁿ 高达 45 Hz 离子阱 MSⁿ 高达 50 Hz | 高达 40Hz | 高达 40Hz | Orbitrap MSn 采集速率高达 40 Hz Astral MS2 采集速率高达 200 Hz |
| 质量范围 | 标准质量范围 m/z 40-2000，中等质量范围 m/z 200-6000，以及可选 HMRn+ 质量范围 m/z 500-16,000 | 40至 6,000 m/z（使用 BioPharma 选项时可达 8,000 m/z） | 40至 6,000 m/z（BioPharma 选项可达 8,000 m/z） | Orbitrap：标准质量范围 m/z 40-6000，使用 BioPharma 选项时为 m/z 40-8000 Astral：标准质量范围 m/z 40-6000 |
| 动态范围 | > 5000，同一张 Orbitrap 分析所得谱图内 | >5000:1 | >5000:1 | Orbitrap：在单个 Orbitrap 质谱范围内 >5000 Astral：在单个 Astral 质谱范围内 >1000 |
| 质量精度 | 内标校正 < 1 ppm RMS；外标校正：<3 ppm RMS | 内标校正 < 1 ppm RMS；外标校正：<3 ppm RMS | 内标校正 < 1 ppm RMS；外标校正：<3 ppm RMS | Orbitrap：内标校正 < 1 ppm RMS；外标校正：<3 ppm RMS Astral：外部 <3 ppm RMS |
获得广泛的肽覆盖率
在非标记相对定量工作流程中，经过消化的多肽在 MS 之前由 LC 分离。Thermo Scientific 低流速系统上的 RP 分离与非标记定量蛋白质组学工作流程完美集成，并与 Thermo Scientific Orbitrap 质谱仪无缝结合。Thermo Scientific Vanquish Neo UHPLC 系统是首选系统。Vanquish Neo UHPLC 系统整合了出色的创新技术，可全天候以极佳性能为各种高灵敏度 LC-MS 工作流程提供复杂混合物可重现的分离。
Thermo Scientific FAIMS Pro Duo 接口提高了前体选择性，改善了大多数肽和蛋白质应用的定性和定量结果，同时减少了耗时的样品制备步骤。FAIMS Pro Duo 接口通过气相分馏和选择性增强肽化合物、降低 MS 谱图的复杂性并改善分析物信噪比，提高了分析性能。最终可实现更高的蛋白质组覆盖率、更高的灵敏度和更准确的定量。
非标记定量蛋白质组学软件
发现新型蛋白生物标志物
Thermo Scientific Proteome Discoverer 软件采用新的非标记定量节点，提供了易于使用的自动化解决方案，用于评估由非标记实验生成的大量 LC-MS 数据。非标记定量节点还包含一整套定量功能，这些功能以往仅适用于同位素标记的工作流程。非标记定量工作流程与 Proteome Discoverer 软件的扩展、标准化和研究管理功能相结合，提供分析非常复杂数据的强大方法。
非标记定量蛋白质组学工作流程
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用于鉴定数据采集的两种不同的 LFQ 方法
在 LFQ DDA 方法中，给定 m/z 范围内的离子被单独分离和裂解。该定量分析包括从 LC-MS 运行多肽色谱图（MS
在传统数据依赖工作流程中，鉴于质谱仪的随机采样性质，实现一致的前体和蛋白质定量可能颇具挑战性。软件算法的创新现在提取原始数据文件中的 LC-MS 峰并将它们映射到已鉴定的谱图，使用保留时间对齐和特征链接检测 LC-MS 数据文件中的这些特征，较大限度地减少“缺失的数据点”并较大限度地提高定量洞察力。
在 LFQ DIA 方法中，选择了前体离子质量范围，然后将其划分为一系列相对较宽的隔离窗口：例如每个窗口 25 m/z。从第一个隔离窗口中所有检测到的前体离子中获得嵌合的MS/MS数据，然后对每个连续的相邻隔离窗口重复此操作，直到覆盖整个前体离子质量范围。MS/MS 谱库用于从采集的数据中鉴定目标肽段。
DIA 通过采集所有已检测前体离子的 MS/MS 数据，可显著提高覆盖率和可重现性；还可实现回溯性数据分析。LFQ DIA 涉及从 LC-MS 运行中提取多肽色谱图（MS
缩短样品制备时间，将更多时间用于蛋白质组学研究
Thermo Scientific AccelerOme 自动化样品制备平台，凭借工厂提供的试剂和试剂盒、直观的软件以及独特的实验设计经验，对蛋白质组学样品制备进行变革。