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同种分型免疫球蛋白 ELISA 试剂盒和多重免疫检测 |
定性和定量的免疫球蛋白
使用 Invitrogen 的免疫球蛋白特异性和同种分型 ELISA 试剂盒、ProQuantum 高灵敏度免疫检测和 ProcartaPlex 多重免疫检测，可以轻松而准确地测定抗体分型。选择涉及人、小鼠和大鼠样本中的 IgG、IgA、IgE 和 IgM 亚类和分型的单同型或多同型（同种分型）试剂盒。
同种分型和免疫球蛋白表征概述
血浆细胞产生的各种抗体按其在功能和抗原反应上不同的分型进行分类。在胎盘哺乳动物中已经确定了五个主要类别或抗体分型：IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM (图 1 和 表 1)。抗体分型是根据其在抗体重链恒定区 (Fc) 的氨基酸序列上的差异来进行分类的。抗体分型 IgG 和 IgA 根据在其氨基酸重链序列上的其他微小差异进一步被分为亚类（如人类 IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1 和 IgA2）。测定个别亚类与评估原发性免疫缺陷或免疫反应有关，特别是在 IgG 或 IgA 总浓度没有改变的情况下。
了解更多关于每种同种型的信息： 免疫球蛋白结构和类别
图 1.免疫球蛋白结构的注释图
表 1.人体免疫球蛋白的分型及其特性
| 物种 | 免疫球蛋白 | 血清水平（成人 [mg/mL]） | 分子质量 (kD) | 补体的激活/结合 | 与蛋白质 A 的结合能力 |
|---|---|---|---|---|---|
| 人 | IgA1 | 0.6–3 | 160 (单体) | – | + |
| 人 | IgA2 | 0.06–0.6 | 160 (单体) | – | + |
| 人 | IgM | 0.045–2.5 | 970 (五聚物) | +++ | + |
| 人 | IgE | 0.00005 | 188 | – | + |
| 人 | IgG1 | 3.8–11.4 | 146 | ++ | ++ |
| 人 | IgG2 | 1.5–6.9 | 146 | + | ++ |
| 人 | IgG3 | 0.2–1.70 | 165 | +++ | – |
| 人 | IgG4 | 0.08–1.4 | 146 | – | ++ |
++ ：非常强的亲和力；++：强亲和力；++：中等/轻微的亲和力； –：无亲和力
免疫球蛋白的表征
有多种方法可用于抗体分型，选择的方法取决于抗体生产的规模和产量、所需结果的性质（即定量与定性分析）、分析成本、检测仪器和所需的技术专业知识。这些方法包括单重和多重免疫检测、横向流动检测、微凝集滴度检测、免疫印迹法、间接免疫荧光检测 (IIFA) 和流式细胞仪。
酶联免疫吸附检测 (ELISA) 是大规模筛查的必选方法之一，可以提供准确的定量结果。Invitrogen 的同种分型 ELISA 试剂盒是一种快速、灵敏、方便的方法，可在杂交瘤发育期间和之后对免疫球蛋白分型进行定量，并评估免疫反应。Invitrogen 的 ProcartaPlex 抗体分型Panels可以利用 Luminex 微球技术，从血清、血浆和细胞培养上清液样本中筛选出单个免疫球蛋白分型的滴度。
Learn more about available products for Antibody Isotyping and Characterization
常见应用
杂交瘤筛选是单克隆抗体开发中最重要的步骤之一，它在开发过程的多个阶段进行，以确保选择最具生产力和特异性的克隆体用于进一步评估。抗体同种分型为杂交瘤的开发提供了强有力的工具，可以在融合、克隆和亚克隆的各个开发阶段进行快速筛选，以确定每个潜在克隆体的特征。借助 Invitrogen 的同种分型 ELISA 和 ProcartaPlex 检测，您可以准确而具体地确定您的杂交瘤正在产生哪种重链和轻链，以及它是否是单克隆的。
用疫苗进行免疫会诱发抗体的产生，从而抵御病原体。为了更好地了解疫苗及其佐剂对免疫原性的影响，对血清和血浆进行分析可以提供关于免疫反应的有用参考。由于每种抗体同型都具有独特的效应功能，对接种疫苗后首次产生的个别抗体分型的检查有助于阐明或表明对疫苗的初级免疫反应。例如，IgE 是过敏反应的特征，因此在评估免疫反应时非常有用。如果没有过敏反应，IgE 通常都会勉强高于检测极限，而强烈的 IgE 反应可能是疫苗的急性发作反应的指标。IgA 和 IgM 水平在早期也会增加，几周后会减弱，但 IgG 水平会更持久，以实现长期免疫。
同种分型和免疫球蛋白 ELISA 试剂盒
抗体同种分型 ELISA 试剂盒是一种快速、灵敏、方便的方法，可对免疫球蛋白分型进行定量，以评估或衡量免疫反应。与基于膜的同种分型测试相比，ELISA 可以提供准确的定量结果，同时具有更高的通量，可以一次测试更多的样品。使用这些检测方法，可以很容易地评估单个分型的抗体水平，以确定单个分型或使用单个样本评估多个分型。
适用于常见靶标的 Invitrogen ELISA 试剂盒，如 IgA ， IgE ， IgG1 ， IgM 等 ，见表 2。典型的小鼠和大鼠 Ig 同种分型试剂盒的板布局如 图 2 所示。
了解更多有关 ELISA 试剂盒和组分的信息
常用的同种分型和免疫球蛋白靶标和 ELISA 性能数据
表2.查看用于检测以下靶标的赛默飞 ELISA 试盒：
图 2.典型的小鼠和大鼠 Ig 同种分型试剂盒的板布局Invitrogen Ig 同种分型试剂盒是按 96 孔 (8x12) ELISA 格式筛选杂交瘤。最多可以检测 12 个独立样本的抗 IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c 或 IgG3、IgA 和 IgM，以及轻链 kappa 和 lambda。
同种分型和免疫球蛋白 ProQuantum 高灵敏度免疫检测
用于免疫球蛋白检测的 ProQuantum 高灵敏度免疫检测试剂盒适用于在 1–2 μL 的小样品量中轻松定量。该检测利用基于邻近扩增技术，将高亲和力抗体-抗原结合的分析物特异性与实时 PCR 的信号检测和扩增能力相结合，实现了简单而强大的下一代蛋白质定量平台。用户友好、无需清洗的工作流程与直观的分析软件相结合，使样品到结果只需两小时。
适用于 Tau ， Tau pT181 和肌钙蛋白 I 等常用靶标的 Invitrogen ProQuantum 免疫检测试剂盒见 表 3。使用 人 IgE ProQuantum 免疫检测 KI 标准曲线 图 3 所示。
查找与同种分型和免疫球蛋白相关的 ProQuantum 检测
进一步了解 ProQuantum 免疫检测试剂盒的工作原理
常见同种分型研究蛋白靶标和 ProQuantum 检测试剂盒性能数据
表3.同种分型研究相关 ProQuantum 免疫检测试剂盒。查看用于检测以下常见靶标的赛默飞 ELISA 试剂盒：
图3.人 IgE 的代表性标准曲线。ProQuantum Human IgE 免疫检测试剂盒的标准曲线显示 IgE 蛋白的动态范围很宽 (0.00768-3,000 ng/mL)。
同种分型和免疫球蛋白 ProcartaPlex 多重免疫检测
Invitrogen ProcartaPlex 同种分型检测是基于三明治 ELISA 的原理，但利用 Luminex xMAP（多分析物分析）珠基技术，以对来自血浆、血清和杂交瘤培养液的单个 25-50μL 样本中的多个抗体分型目标同时进行检测和定量。
ProcartaPlex 同种分型检测可作为预混Panels提供，其采用了已对分析物的组合性、干扰和交叉反应性进行过广泛测试的即用型格式，以提供最高水平的验证和精确度（表4）。通过使用下面的 ProcartaPlex Panel 选择工具，还可以很容易地根据特定的研究需要设计 Panel，从而进行定制选择。
人 血清样品中 ProcartaPlex 人抗体分型检测组合， 7plex 和 IgG4 人 ELISA 试剂盒的比较数据显示了 R2 = 0.98 (图 4)。
预混的同种分型和免疫球蛋白多重免疫检测 Panel 和性能数据
图4.包被 ELISA 的 ProcartaPlex 测定性能比较。使用 ProcartaPlex Human Antibody Isotyping Panel 7plex 和 IgG4 Human ELISA Kit 并行测试人血清样品。 IgG4 的测量浓度显示高相关性 (R2>0.95) ，表明 ProcartaPlex 检测组合可获得与传统 ELISA 试剂盒相当的定量结果，其额外的多通路优势包括减少样品体积，缩短检测 / 手动操作时间，并降低每个数据点的成本。
表4.预混的 ProcartaPlex 多重免疫检测Panels，用于同种分型和免疫球蛋白
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| ProcartaPlex Human Antibody Isotyping Panel, 7plex 靶标列表 [微球编码]： IgG1 [12], IgG2 [20], IgG3 [34], IgG4 [42], IgA [55], IgE [48], IgM [62] | 96 次 | EPX070-10818-901 |
| ProcartaPlex Mouse Antibody Isotyping Panel 1, 7plex 靶标列表 [微球编码]： IgA [38], IgE [42], IgG1 [12], IgG2a [18], IgG2b [21], IgG3 [25], IgM [52] | 96 次 | EPX070-20815-901 |
| ProcartaPlex Mouse Antibody Isotyping Panel 2, 7plex 靶标列表 [微球编码]： IgA [38], IgE [42], IgG1 [12], IgG2b [21], IgG2c [43], IgG3 [25], IgM [52] | 96 次 | EPX070-20816-901 |
| ProcartaPlex 大鼠抗体分型检测组合， 6plex 靶标列表 [微球编码]： IgG1 [25], IgG2a [28], IgG2b [34], IgG2c [44], IgA [61], IgM [48] | 96 次 | EPX060-30123-901 |
同种分型和免疫球蛋白表征概述
血浆细胞产生的各种抗体按其在功能和抗原反应上不同的分型进行分类。在胎盘哺乳动物中已经确定了五个主要类别或抗体分型：IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM (图 1 和 表 1)。抗体分型是根据其在抗体重链恒定区 (Fc) 的氨基酸序列上的差异来进行分类的。抗体分型 IgG 和 IgA 根据在其氨基酸重链序列上的其他微小差异进一步被分为亚类（如人类 IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1 和 IgA2）。测定个别亚类与评估原发性免疫缺陷或免疫反应有关，特别是在 IgG 或 IgA 总浓度没有改变的情况下。
了解更多关于每种同种型的信息： 免疫球蛋白结构和类别
图 1.免疫球蛋白结构的注释图
表 1.人体免疫球蛋白的分型及其特性
| 物种 | 免疫球蛋白 | 血清水平（成人 [mg/mL]） | 分子质量 (kD) | 补体的激活/结合 | 与蛋白质 A 的结合能力 |
|---|---|---|---|---|---|
| 人 | IgA1 | 0.6–3 | 160 (单体) | – | + |
| 人 | IgA2 | 0.06–0.6 | 160 (单体) | – | + |
| 人 | IgM | 0.045–2.5 | 970 (五聚物) | +++ | + |
| 人 | IgE | 0.00005 | 188 | – | + |
| 人 | IgG1 | 3.8–11.4 | 146 | ++ | ++ |
| 人 | IgG2 | 1.5–6.9 | 146 | + | ++ |
| 人 | IgG3 | 0.2–1.70 | 165 | +++ | – |
| 人 | IgG4 | 0.08–1.4 | 146 | – | ++ |
++ ：非常强的亲和力；++：强亲和力；++：中等/轻微的亲和力； –：无亲和力
免疫球蛋白的表征
有多种方法可用于抗体分型，选择的方法取决于抗体生产的规模和产量、所需结果的性质（即定量与定性分析）、分析成本、检测仪器和所需的技术专业知识。这些方法包括单重和多重免疫检测、横向流动检测、微凝集滴度检测、免疫印迹法、间接免疫荧光检测 (IIFA) 和流式细胞仪。
酶联免疫吸附检测 (ELISA) 是大规模筛查的必选方法之一，可以提供准确的定量结果。Invitrogen 的同种分型 ELISA 试剂盒是一种快速、灵敏、方便的方法，可在杂交瘤发育期间和之后对免疫球蛋白分型进行定量，并评估免疫反应。Invitrogen 的 ProcartaPlex 抗体分型Panels可以利用 Luminex 微球技术，从血清、血浆和细胞培养上清液样本中筛选出单个免疫球蛋白分型的滴度。
Learn more about available products for Antibody Isotyping and Characterization
常见应用
杂交瘤筛选是单克隆抗体开发中最重要的步骤之一，它在开发过程的多个阶段进行，以确保选择最具生产力和特异性的克隆体用于进一步评估。抗体同种分型为杂交瘤的开发提供了强有力的工具，可以在融合、克隆和亚克隆的各个开发阶段进行快速筛选，以确定每个潜在克隆体的特征。借助 Invitrogen 的同种分型 ELISA 和 ProcartaPlex 检测，您可以准确而具体地确定您的杂交瘤正在产生哪种重链和轻链，以及它是否是单克隆的。
用疫苗进行免疫会诱发抗体的产生，从而抵御病原体。为了更好地了解疫苗及其佐剂对免疫原性的影响，对血清和血浆进行分析可以提供关于免疫反应的有用参考。由于每种抗体同型都具有独特的效应功能，对接种疫苗后首次产生的个别抗体分型的检查有助于阐明或表明对疫苗的初级免疫反应。例如，IgE 是过敏反应的特征，因此在评估免疫反应时非常有用。如果没有过敏反应，IgE 通常都会勉强高于检测极限，而强烈的 IgE 反应可能是疫苗的急性发作反应的指标。IgA 和 IgM 水平在早期也会增加，几周后会减弱，但 IgG 水平会更持久，以实现长期免疫。
同种分型和免疫球蛋白 ELISA 试剂盒
抗体同种分型 ELISA 试剂盒是一种快速、灵敏、方便的方法，可对免疫球蛋白分型进行定量，以评估或衡量免疫反应。与基于膜的同种分型测试相比，ELISA 可以提供准确的定量结果，同时具有更高的通量，可以一次测试更多的样品。使用这些检测方法，可以很容易地评估单个分型的抗体水平，以确定单个分型或使用单个样本评估多个分型。
适用于常见靶标的 Invitrogen ELISA 试剂盒，如 IgA ， IgE ， IgG1 ， IgM 等 ，见表 2。典型的小鼠和大鼠 Ig 同种分型试剂盒的板布局如 图 2 所示。
了解更多有关 ELISA 试剂盒和组分的信息
常用的同种分型和免疫球蛋白靶标和 ELISA 性能数据
表2.查看用于检测以下靶标的赛默飞 ELISA 试盒：
图 2.典型的小鼠和大鼠 Ig 同种分型试剂盒的板布局Invitrogen Ig 同种分型试剂盒是按 96 孔 (8x12) ELISA 格式筛选杂交瘤。最多可以检测 12 个独立样本的抗 IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c 或 IgG3、IgA 和 IgM，以及轻链 kappa 和 lambda。
同种分型和免疫球蛋白 ProQuantum 高灵敏度免疫检测
用于免疫球蛋白检测的 ProQuantum 高灵敏度免疫检测试剂盒适用于在 1–2 μL 的小样品量中轻松定量。该检测利用基于邻近扩增技术，将高亲和力抗体-抗原结合的分析物特异性与实时 PCR 的信号检测和扩增能力相结合，实现了简单而强大的下一代蛋白质定量平台。用户友好、无需清洗的工作流程与直观的分析软件相结合，使样品到结果只需两小时。
适用于 Tau ， Tau pT181 和肌钙蛋白 I 等常用靶标的 Invitrogen ProQuantum 免疫检测试剂盒见 表 3。使用 人 IgE ProQuantum 免疫检测 KI 标准曲线 图 3 所示。
查找与同种分型和免疫球蛋白相关的 ProQuantum 检测
进一步了解 ProQuantum 免疫检测试剂盒的工作原理
常见同种分型研究蛋白靶标和 ProQuantum 检测试剂盒性能数据
表3.同种分型研究相关 ProQuantum 免疫检测试剂盒。查看用于检测以下常见靶标的赛默飞 ELISA 试剂盒：
图3.人 IgE 的代表性标准曲线。ProQuantum Human IgE 免疫检测试剂盒的标准曲线显示 IgE 蛋白的动态范围很宽 (0.00768-3,000 ng/mL)。
同种分型和免疫球蛋白 ProcartaPlex 多重免疫检测
Invitrogen ProcartaPlex 同种分型检测是基于三明治 ELISA 的原理，但利用 Luminex xMAP（多分析物分析）珠基技术，以对来自血浆、血清和杂交瘤培养液的单个 25-50μL 样本中的多个抗体分型目标同时进行检测和定量。
ProcartaPlex 同种分型检测可作为预混Panels提供，其采用了已对分析物的组合性、干扰和交叉反应性进行过广泛测试的即用型格式，以提供最高水平的验证和精确度（表4）。通过使用下面的 ProcartaPlex Panel 选择工具，还可以很容易地根据特定的研究需要设计 Panel，从而进行定制选择。
人 血清样品中 ProcartaPlex 人抗体分型检测组合， 7plex 和 IgG4 人 ELISA 试剂盒的比较数据显示了 R2 = 0.98 (图 4)。
预混的同种分型和免疫球蛋白多重免疫检测 Panel 和性能数据
图4.包被 ELISA 的 ProcartaPlex 测定性能比较。使用 ProcartaPlex Human Antibody Isotyping Panel 7plex 和 IgG4 Human ELISA Kit 并行测试人血清样品。 IgG4 的测量浓度显示高相关性 (R2>0.95) ，表明 ProcartaPlex 检测组合可获得与传统 ELISA 试剂盒相当的定量结果，其额外的多通路优势包括减少样品体积，缩短检测 / 手动操作时间，并降低每个数据点的成本。
表4.预混的 ProcartaPlex 多重免疫检测Panels，用于同种分型和免疫球蛋白
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| ProcartaPlex Human Antibody Isotyping Panel, 7plex 靶标列表 [微球编码]： IgG1 [12], IgG2 [20], IgG3 [34], IgG4 [42], IgA [55], IgE [48], IgM [62] | 96 次 | EPX070-10818-901 |
| ProcartaPlex Mouse Antibody Isotyping Panel 1, 7plex 靶标列表 [微球编码]： IgA [38], IgE [42], IgG1 [12], IgG2a [18], IgG2b [21], IgG3 [25], IgM [52] | 96 次 | EPX070-20815-901 |
| ProcartaPlex Mouse Antibody Isotyping Panel 2, 7plex 靶标列表 [微球编码]： IgA [38], IgE [42], IgG1 [12], IgG2b [21], IgG2c [43], IgG3 [25], IgM [52] | 96 次 | EPX070-20816-901 |
| ProcartaPlex 大鼠抗体分型检测组合， 6plex 靶标列表 [微球编码]： IgG1 [25], IgG2a [28], IgG2b [34], IgG2c [44], IgA [61], IgM [48] | 96 次 | EPX060-30123-901 |
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