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所有 Attune 流式细胞仪的共同特点
Attune NxT 和Attune CytPix成像型流式细胞仪具有许多相同特点。Attune CytPix 成像型流式细胞仪不但与 Attune NxT 具有相同的硬件和功能，还配备了高速明场相机和自动化图像分析软件。以下介绍了两款仪器的共同特点，例如为实现高灵敏度和快速上样的声波聚焦技术，为实现灵活性和可靠性的光学设计以及防堵塞液流系统 。抢先一步来了解 Attune CytPix 的成像和图像分析功能。
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源于声波聚焦技术的高灵敏度检测分析
Attune 流式细胞仪将医疗成像中的超声波技术与流体动力学聚焦相结合，能够将样本呈单个细胞状态精准排列到鞘液流的中心。无论样本与鞘液的比例如何，将细胞紧密聚焦在激光检测区能使仪器采集到更多的光子，有助于确保数据质量。
声波聚焦技术有助于在Attune CytPix仪器上进行细胞成像，帮助精确定位细胞，从而获得清晰的图像。正如这些视频所演示，没有采用声波聚焦拍摄的细胞图像模糊不清且位置不正确，而采用声波聚焦拍摄的细胞图像清晰且处于视野中心。
声波聚焦使得细胞处于良好成像位置
没有采用声波聚焦技术（左）时，微球没有聚集在中心位置且经常模糊不清。声波聚焦（右）可减少横向位置变异、时间变异和景深限制，从而可获得清晰的图像。
样本数据采集速度快
声波聚焦技术还可快速获得高质量实验数据。用户可以高达1,000 µL/min 的样本处理速率进行上样，比传统的流体动力学聚焦系统快 10 倍；而数据采集速度可达 35,000 个细胞/秒，意味着可比以往更快、更准确地分析所有样品（包括低浓度和珍贵样品），且数据质量没有任何损失。
Attune NxT采集1,000,000个细胞事件所需的时间
快速进行数据采集
Attune NxT 与三台竞品仪器均以其最高进样速度运行，比较它们采集1,000,000个细胞所需的时间。
无论进样速度如何，声波聚焦技术都能很大程度地减少数据变异，因此高通量和灵敏度可以同时兼得。下面的细胞周期分析示例就证明了这一点，其中，精确检测多个细胞群之间的荧光强度差异至关重要。
数据采集始终如一，不受样品流速大小的影响
数据变异小
将Jurkat细胞进行固定后，用碘化丙啶染色和RNase处理，以 1×106^6个细胞/mL的浓度进行上机分析，每种进样速度下的结果均保持一致。即使以1,000μL/分钟的最高进样速度进行上机，G0/G1和G2/M期细胞的变异系数（ CV）值依然很小。
防堵塞设计的液流系统
Attune 流式细胞仪采用正向位移注射泵系统，可以精确控制进样体积，从而可以进行精确体积分析，并能有效防止管路堵塞。该系统可以执行已知上样体积的体积细胞计数（门控细胞和总细胞），并能在活/死细胞分析中轻松圈出死细胞，进行活细胞计数。与最大上样压力为15 PSI的传统流式细胞仪不同，Attune 流式细胞仪可将压力控制在75PSI，从而可以减少细胞黏连，实现抗堵塞功能。
基于体积的样本进样
进样系统采用正向位移注射泵，其工作原理类似于移液器。当柱塞压下时会产生张力 (A)。当柱塞与样本上升时会释放张力 (B)。在如此受控的高压条件下，发生仪器堵塞的概率很小。
灵活的光学设计
Attune 流式细胞仪可配置多达4个空间独立的激光器和16个参数。激光器空间独立排布，为多色方案设计提供了染料选择的灵活性，并可以简化补偿过程。该系统可提供高速进样，采集速度可达每秒35,000个细胞，并兼具高灵敏度，可满足各种科研需求。
高灵敏度可以区分弱信号和背景荧光，从而减少数据变异并实现更好的信号分离。单峰的荧光分辨率变异系数小于 3%，预测 MESF ≤80 (FITC)、≤30 (PE)、≤70 (APC)。下面介绍了与竞品仪器之间灵敏度的比较。
Attune 流式细胞仪设计紧凑，可在生物安全柜或超净台内灵活使用。这有助于避免在处理危险或未知样本时造成污染或感染。
专为提高稳定性而设计的激光器
Attune 流式细胞仪采用全新的光学设计，具有较高的可靠性和出色的性能。固态平顶光斑激光器可在很大程度上减少液流系统或光学系统变化的影响，从而避免仪器的不稳定性、光路校准问题甚至仪器停机。
激光偏移是传统流式细胞仪用户经常遇到的主要问题之一。Attune 流式细胞仪采用平顶光斑激光器，具有更宽更稳定的激光强度分布，与传统系统所用的高斯分布激光器相比，平顶光斑激光器有更宽的光照范围。平顶光斑激光器对激光偏移的容忍度更高，从而确保仪器的高灵敏度和低CV值。
激光发射光谱
激光发生偏移时，传统流式细胞分析仪采用的高斯分布激光器（左）容易出现光路不准，而 Attune 采用的平顶激光器（右）仍能准确对齐。
稀有细胞检测
检测稀有细胞需要采集大量细胞才能获得准确、可靠的结果。 Attune 流式细胞仪可在最高 1 mL/分钟的进样速度下快速处理稀释样本，显著快于最快进样速度仅为 60–100 μL/分钟的传统流式细胞仪。因此，声波聚焦技术可同时兼顾进样速度和数据质量，大大缩短了稀有细胞的样本采集时间。
采集超过100万个活细胞并检测稀有树突状细胞亚群
浆细胞样树突状细胞 (pDC) 的免疫表型特征为CD19–/B220high/CD317+。用 CD19-Pacific Blue、CD317-Alexa Fluor 488 和 CD45R/B220-PE 流式抗体以及 SYTOX AADvanced 死活细胞染料对小鼠脾细胞进行四色流式分析。对SYTOX AADvanced 染料阴性的活细胞进行设门，然后再选择 CD19 阴性细胞进行二次设门。进一步在 CD45R/B220 和 CD317 双参数散点图中分析 pDC 的比例。细胞浓度为7.5× 107^7 个细胞/mL，采用 500 μL/min的采集速率，获取130万个总细胞。B220+/ CD317+（右上象限）的 pDC 占 CD19– 活细胞的比例为 0.851%，占全部脾细胞的 0.194%。
Attune 流式细胞仪可以兼顾高采集速度和高灵敏度，使用户能够轻松检测稀有细胞并对其进行表型鉴定和功能分析。流式学习中心中关于稀有细胞检测的应用指南描述了适用于实验前、实验中和数据分析阶段的详细操作步骤。
Attune CytPix成像型流式细胞仪的特点
Attune CytPix 成像型流式细胞仪的独有特点在于高速明场相机和可生成形态测量数据的自化图像分析。
高速相机
相机可以高达6,000张图像/秒的速度拍摄细胞图像，并使用户能够直观地验证检测器记录的细胞。用户可以实时查看细胞图像，以确认样品质量，优化实验方案，并记录待分析的每个细胞群的形态。这在细胞治疗应用中至关重要，但也可应用于任何用于流式细胞术的样品。
无需更改现有流式实验方案或牺牲样本通量，一次实验即可同时得到流式数据和成像结果。Attune CytPix 成像型流式细胞仪在保持标准流式细胞仪采集速度的同时还可采集清晰的细胞图像。声波聚焦可将待测细胞精确排列在激光检测区的中心位置，从而有助于获得清晰、居中的细胞图像。
即使在高速进样时仍可提供一致的图像质量
声波聚焦和高速相机相结合后，不论进样速度快还是慢，都可以得到 CAR T 细胞的稳定成像。聚焦和相机设置可轻松调整以满足实验要求。
通过使用图库视图，用户可以快速扫视细胞群，看是否存在离群值。在此视图中，双联体和其他聚合体比较明显，即使粗略一看也能注意到。借助Attune CytPix成像型流式细胞仪，用户可以非常快速地突出显示大细胞群的结构特征。这样就可以调整设门，可在圈定感兴趣细胞的同时排除聚合体、不需要的细胞和碎片。
与传统流式细胞仪相比，图像中的形态信息增加了流式数据的丰度。例如，图中显示了使用Annexin V和碘化丙啶 (PI) 的常规细胞凋亡检测，并添加了细胞成像以表征每个细胞群中的细胞，从而显示不同形态特征。单凭流式细胞分析数据是无法获得这些信息的。
形态学自动图像分析
Attune CytPix成像型流式细胞仪上的 Attune 流式细胞仪软件可使用接受过白细胞和微球预先培训的模型分析图像并将图像中的细胞特征解读为形态参数。这些参数与捕捉的图像和流式数据相结合，使研究人员能够获得对样本的新见解。可通过调整设门来排除聚合体、偶合事件、碎片和不需要的细胞。
该软件能够以每秒高达1,000幅图像的速率自动进行图像分析，并且可由用户在软件后台运行的进程队列中进行管理。这些基于图像衍生的扩展参数提供了数据，使用户能够通过细胞计数（颗粒计数）和形态学特征，如圆形度 （圆度）、大小 （面积）、形状 （偏心率） 和复杂性 （熵）来确认单细胞。对这些扩展参数设门后，您可以快速、准确地鉴别感兴趣的细胞群，从而在不需要手动审查或仅需少量手动审查的情况下确认设门策略。您可以使用反向设门扫视全分辨率图像组合，可针对散点图上的任何细胞群将您所见与散射光、荧光或基于图像的参数相关联。设门时，借助强大、由数据驱动的细胞分析，可以提高数据质量并让您充满信心。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.