用于流式细胞分析的不可固定活力染料

死细胞经常会因为可以与许多试剂发生非特异性结合而带来假阳性结果。 因此，从流式细胞仪数据中移除死细胞是帮助确保精确结果和分析的关键步骤。 Invitrogen 流式细胞分析不可固定细胞活性检测为研究者提供了一种可对活细胞和死细胞进行区分的方法，并比前向散射和侧向散射数据更为准确。

另请参见用于荧光成像及微孔板的活力检测产品

图1： 用SYTOX 死细胞染色剂进行活细胞gating。 在采用 488 nm和 635 nm 激发光进行流式细胞仪分析前，经热处理和未经热处理的人类外周血白细胞通过 Invitrogen Alexa Fluor 488 染料偶联的抗人CD3抗体、R-PE偶联的抗人CD8抗体以及 5 nM SYTOX Red 死细胞染色剂进行了染色。 (A) 展示两种细胞群分布的直方图 — 死细胞发出明显的 Invitrogen SYTOX Red 荧光信号，而活细胞并无荧光。 (B) 活细胞设门后CD8和CD3染色双参数图。

图 2. 采用碘化丙啶进行死细胞染色。 用 10 uM 喜树碱处理 Jurkat 细胞4小时，然后采用带有 Annexin V Alexa Flour 488 及碘化丙啶的死细胞凋亡试剂盒进行染色。 在 Invitrogen Attune 流式细胞仪上采用 488 nm 激发波长以及 530/30 和 575/24 带通滤波器对细胞进行分析，并用标准的 100 uL/min 收集速率进行收集。 死（坏死）细胞相对于凋亡或活细胞具有更高的碘化丙啶水平。 A = 凋亡细胞，V = 活细胞，N = 坏死细胞。

图 3. CellTrace 钙黄绿素 AM 染色活细胞。 利用钙黄绿素 AM 和乙锭均二聚物-1 对乙醇固定的人的活 B 细胞混合物进行 1：1 染色。 5分钟后，用488 nm激发波长进行流式细胞仪分析。 二元频率分布结果显示标记有绿色荧光（530 nm）的活细胞群体和标记有红色荧光（585 nm）的死细胞群体被清晰的区别开来。

图4： 染色热灭活及未处理 Jurkat 细胞。 根据 LIVE/DEAD Violet 活性/活力试剂盒中的实验方法对 Jurket 胞进行染色。 采用带有 405 nm 激光的流式细胞仪对细胞进行分析：450/50 nm 带通滤光器用于calcein violet标记的活细胞 (L)，525/50 nm 带通滤光器用于 auqa 染料标记的死细胞 (D)。