流式细胞分析样品制备缓冲液和试剂

固定剂对于保存样本以供以后使用、或查看胞内或核内靶点是必需的。即用型固定套装针对流式细胞分析应用进行了优化。这些试剂的优势如下：

• 细胞染色的方法考虑到了靶蛋白的位置
• 固定和透化方法维持细胞的形态光散射特性不变
• 试剂盒中的试剂有助于减少背景染色

选择合适的活化试剂将取决于 (1) 细胞类型，(2) 目标蛋白的表达水平和动力学，以及 (3) 实验条件。

了解更多：eBioscience 流式细胞分析染色缓冲液、Invitrogen FIX PERM™ 细胞透化试剂盒（RUO 和 GPR）、胞内固定和透化缓冲液套装 (RUO) 和 eBioscience Foxp3/转录缓冲液套装 (RUO) 相关信息。 

活化细胞通常表达更高水平的转录因子、细胞因子、趋化因子和可通过流式细胞术检测到的其他分子。流式胞内蛋白染色通常需要固定步骤来交联蛋白质和稳定细胞膜，以及透化步骤使得抗体接触细胞内抗原。Invitrogen eBioscience 胞内固定和透化缓冲液旨在优化细胞器和囊泡中的胞质和分泌蛋白的检测。优势包括：

• 兼容多种标志物和胞内蛋白
• 温和固定和透化，细胞形态更准确

了解更多：eBioscience 流式细胞分析染色缓冲液和 Invitrogen FIX &PERM™ 细胞透化试剂盒相关信息。

图2.巨噬细胞中小鼠 CCL3 (MIP-1α) 的染色结果。在有 Invitrogen eBioscience 蛋白质转运抑制剂混合物（货号 00-4980) 存在的情况下，未刺激（左）或用 LPS（货号 00-4976)（右）刺激5小时的巯基乙酸诱导的 BALB/c 小鼠腹腔巨噬细胞。使用 Invitrogen eBioscience 胞内固定&透化缓冲液套装（货号 88-8824）和相应实验方案，用 Anti-Mouse CD11b PerCP-Cyanine5.5（货号 45-0112) 和抗小鼠 CCL3 (MIP-1α) PE（货号12-7532）进行胞内染色。分析涉及 Invitrogen eBioscience 可固定活力染料 eFluor 450（货号 65-0863)测定的活细胞总数。

流式细胞术可检测异质细胞群体中离散免疫细胞亚群中的转录因子，是一种分析免疫反应的灵敏方法。在进行任何转录因子染色分析之前，请参阅以下有关胞内染色缓冲液的部分。优势包括：

• 兼容所有荧光基团，包括聚合物染料，如 Brilliant Violet 和 Super Bright 染料。
• 较低的信噪比，有助于检测低丰度信号。
• FoxP3 染色缓冲液已在许多针对转录因子的抗体染色中进行了测试，并针对核蛋白染色进行了优化。

了解有关 Foxp3 缓冲液的更多信息，并查看数据

图 3.在刺激后的 NK 细胞中小鼠 E4BP4 (NFIL3) 的染色结果。未刺激的小鼠脾脏细胞(左)或用Invitrogen eBioscience 小鼠 IL-15/IL-15R 复合无载体重组蛋白（货号 34-8152 [右]）刺激过夜的小鼠脾脏细胞(右)，用抗小鼠NK1.1 PE-Cyanine7（货号 25-5941) 和抗小鼠 E4BP4 (NFIL3) PE（货号 12-5927)进行染色。使用Invitrogen eBioscience Foxp3/转录因子染色缓冲套装（货号 00-5523）和相应实验方案对 E4BP4 进行胞内染色。分析淋巴细胞门中的细胞。
 

*IVD——体外诊断使用
** GPR——通用试剂。