按照相关 GMP 原则生产的高性能 Cas9 蛋白

CTS TrueCut Cas9 蛋白


将基因组编辑研究从基础研究转化到临床环境时，高质量的细胞治疗辅助材料和文件至关重要。我们的 Gibco 细胞治疗系统 (CTS) TrueCut Cas9 蛋白旨在满足用于要求野生型 Cas9 核酸酶按照严格的质量标准生产的临床研究和应用。

  • 始终如一的高效编辑 - 在所有测试的细胞系中，包括原代 T 细胞中 >90% 的编辑效率
  • 按照更严格的标准生产 - Cas9 蛋白按照 GMP 原则生产，符合细胞、基因和组织产品的辅助材料的标准
  • 大包装规格 - 可选择 2.5 或 5.0 mg，浓度为 10 mg/mL

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严格的标准，卓越的性能

CTS TrueCut Cas9 蛋白按照细胞、基因和组织产品辅助材料的标准（包括 USP <1043>、Ph Eur.5.2.12 和 ISO 20399 -1、-2 和 -3），并根据 21 CFR 第 820 部分的原则，在 FDA 注册的生产厂生产。

  • 可追溯性文件 - 包括 COA、COO、药物主文件和/或法规支持文件*（根据要求提供）
  • 广泛的安全性检查 - 包括无菌性、内毒素、支原体、残留核酸和蛋白质
  • 无菌生产 - 使用一次性技术完成整个工艺
  • 无菌灌装 - 在 A/B 级（100 级和 ISO 5 同等级别）洁净室中包装成品

*不同国家特定的法规支持文件流程需要额外的文件准备时间。

数据：CTS TrueCut Cas9 蛋白在原代 T 细胞中实现高效敲除

两个条形图显示，用 CTS 或 RUO Cas9 蛋白转染的 T 细胞具有相似的细胞活力和切割活性水平

图 1.CTS TrueCut Cas9 在 T 细胞中的细胞活力和编辑效率与 RUO Cas9 具有可比性。CTS TrueCut Cas9 蛋白和 TrueCut Cas9 蛋白 v2 (7.5 pmol) 分别与 TrueGuide 合成 sgRNA  (7.5 pmol) 混合，形成 2 个 RNP 复合物，靶向 4 个细胞治疗相关基因上的 7 个位点。使用 Neon 转染系统（10 μL 试剂盒），每个 RNP 复合物转染 5×105 个 T 细胞。培养 72 小时后，收获细胞，所有反应均重复进行 3 次。(A) 通过流式细胞术检测和分析的细胞活力超过 90%，并且所有 7 个位点的结果都相似。(B) 使用 Ion Torrent NGS 系统，通过靶向扩增子测序验证 (TAV) 测量的所有靶位点的编辑效率结果也相似。

数据：CTS TrueCut Cas9 蛋白在原代 T 细胞中具有高敲入效率

两个条形图显示，在靶向不同位点的实验中，用 Gibco CTS TrueCut Cas9 转染的 T 细胞具有高水平的细胞活力和敲入效率

图 2.CTS Cas9 在 10 倍电穿孔转染规模下达到高水平的 HDR 敲入效率。CTS TrueCut Cas9 蛋白和 TrueCut Cas9 蛋白 v2 （12.5 μg 或 75 pmol）与 TrueGuide 合成 sgRNA  (75 pmol) 和 ssODN 供体 (150 pmol) 混合，形成靶向 4 个治疗基因的 RNP-ssODN。使用较大规模的 Neon 转染系统 （100 μL 试剂盒），将每个 RNP 转染至 5×106 个 T 细胞中。培养 72 小时后，收获细胞，所有反应均重复进行 3 次。(A) 在所有检测的基因和位点中，通过流式细胞术检测和分析测得的细胞活力均超过 90%。(B) 所有靶基因位点中两个 Cas9 之间的编辑效率（通过使用 Ion Torrent NGS 系统的靶向扩增子测序验证 (TAV) 测量的通过 HDR 和 indel 的供体整合百分比计算）结果相似。

数据：在原代 T 细胞中，CTS TrueCut Cas9 蛋白的敲除效率高于竞争产品

A flow cytometry chart shown above a bar graph, both demonstrating that Gibco CTS TrueCut Cas9 Protein achieved greater TCR knockout compared to competitor’s GMP Cas9

图 3.CTS Cas9 的敲除效率高于竞争产品。 将 CTS TrueCut Cas9 蛋白和竞争对手的 Cas9 与  TrueGuide 合成 sgRNA  混合，靶向 α 和 β T 细胞受体基因（TRAC 和 TRBC）区域，形成 Cas9 RNP 复合物。使用  Neon 转染系统，每个 Cas9 RNP 复合物转染  5×105 个 T 细胞。 所有反应均重复进行 3 次。 (A)  TCR 的流式细胞术样本数据；总体上，CTS Cas9 达到 88.7% 以上的 KO 效率，而供应商 A 的 Cas9 的 KO 效率为 61.7%。 (B) 基于 NGS 的 TAV 测量结果显示，与供应商 A 的 Cas9 相比，CTS Cas9 在不同靶点 的平均 KO 效率较高 (**p< 0.01)。

更多样本数据，包括在不同温度下的批间一致性和稳定性，请参阅我们的 CTS TrueCut Cas9 蛋白应用指南：

CTS TrueCut Cas9 蛋白放行质量标准

参数质量标准
浓度9.0-11.0  mg/mL
体外活性检测>90%的未切割参考 DNA 体外转化为切割产物
内毒素<10.0 EU/mg
无菌性无生长
纯度（RP-HPLC 法）≥95%
纯度（SDS-PAGE 法）≥95%
聚合物≤5%
鉴别（RP-HPLC 法）符合
鉴别（SDS-PAGE 法）符合
pH7.0-7.8
残留 DNase
残留 RNase
残留宿主细胞蛋白
残留宿主细胞 DNA
支原体
*LOQ = 定量限；**LOD = 检测限


关于 CTS TrueCut Cas9 蛋白的常见问题 (FAQ)

Gibco CTS TrueCut Cas9 蛋白与 TrueCut Cas9 蛋白 v2 有何不同？

两种产品都是相同的 Cas9 蛋白,但 CTS TrueCut Cas9 蛋白的生产符合细胞、基因和组织产品的辅助材料标准。这增加了如上所述的可追溯性文件、广泛的安全性检查、无菌生产、无菌灌装、高浓度和大包装尺寸的优势。
 

如何索取 CTS TrueCut Cas9 蛋白的可追溯性文件？

请访问细胞治疗系统支持获取说明。
 

CTS TrueCut Cas9 蛋白的储存缓冲液组分有哪些？

我们的 Cas9 蛋白储存在由 10 mM Tris（pH 8.0，4℃）、100 mM NaCl、200 mM Na2SO4、50% 甘油组成的储存缓冲液中。
 

CRISPR 拥有很多专利。赛默飞世尔科技是否获得临床应用授权？

赛默飞世尔科技的与我们的 Cas9 产品相关的有限使用商标许可 (LULL)†，解决了使用 CTS TrueCut Cas9 蛋白进行发现研究、临床前研究和 35 U.S.C. §271(e)(1) 安全港法规范围内的临床研究活动的问题。35 U.S.C. §271(e)(1) 涵盖的活动范围需要由客户确定。对于超出此范围的活动，客户有责任获得任何所需的第三方权利。

† 要查看 LULL，请点击下方订购 CTS Cas9 蛋白部分中相应产品页面的链接。
 

  下载 CTS TrueCut Cas9 蛋白用户指南

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用于 科研或为临床研究而进行的非商业性细胞产品生产。注意：不可直接用于人类或动物给药。