等温核酸扩增

LAMP 基于链置换反应，在等温条件下形成茎环结构，可对 DNA 或 RNA (结合反转录酶时) 进行扩增。其使用 Bacillus stearothermophilus DNA 聚合酶 (Bst DNA 聚合酶) 和一套 4 - 6 个经专门设计的引物，这些引物与靶标 DNA 序列的 6 或 8 个不同部分结合。

滚环扩增是一种将短 DNA 或 RNA 引物扩增成长单链 DNA 或 RNA 的等温扩增技术，使用环状 DNA 作为模板和具有链置换活性的 DNA 聚合酶 (如 Phi29 DNA 聚合酶) 。RCA 生成一个串联体，包含与环状模板互补的多个串联重复序列。

多重置换扩增 (MDA) 是使用最广泛的全基因组扩增 (WGA) 技术，其利用链置换 DNA 聚合酶（如 Phi29 聚合酶）和随机六聚体引物在等温条件下对基因组进行扩增。

RPA 是一种在较低温度下进行等温扩增的方法，其基于由多种重组酶、单链结合蛋白和链置换 DNA 聚合酶介导的链侵入。

我们的 RPA 产品利用独特的蛋白质和酶组合，可快速且高效地检测靶标：

• Invitrogen Lyo-ready Bst DNA 聚合酶 (工程改造，链置换)
• Invitrogen Lyo-ready T4 UvsX 和 UvsY 蛋白 (重组酶复合物)
• Invitrogen Lyo-ready T4 基因 32 蛋白 (单链 DNA 结合)

RPA反应效率由ATP再生缓冲系统驱动，该系统也在我们的方案中提供和优化。

有关 RPA 蛋白特性的更多信息，请参见此图标或联系我们的团队以获取样品、方案和支持。

解旋酶依赖性扩增等温扩增方法之一，利用解旋酶解旋双链 DNA ，使用 Bst DNA 聚合酶等链置换 DNA 聚合酶进行引物退火和延伸。

基于核酸序列的扩增是一种 RNA 扩增技术，基于反转录酶的初始靶标延伸和 RNA 聚合酶 (如 T7 RNA 聚合酶) 随后介导的转录物生成。NASBA 反应需要等温条件和额外的 RNase H 酶，用于在 RNA/DNA 杂交体中降解 RNA 链。

转录介导的扩增是一种利用两种酶（反转录酶和 T7 RNA 聚合酶）针对 RNA 进行等温扩增的技术。其与 NASBA 的主要区别是所用反转录酶是否具有内在 RNase H 活性（在 RNA/DNA 杂交体中降解 RNA 链）。

链置换扩增结合了限制性内切酶的切割作用和聚合酶的链置换活性。反复的切割和延伸可使靶标 DNA 进行指数级扩增。

指数扩增反应是一种在等温条件下扩增短寡核苷酸的技术。该反应由 DNA 触发，通过使用切刻酶和链置换聚合酶，可以重复且指数级地进行进一步扩增。

我们专注于为您的诊断试剂开发提供原材料。我们所有的酶均以液体形式提供；常规酶在储存缓冲液配方中含有甘油。我们不提供干粉酶或冻干服务。

当开发便携且室温稳定的诊断试剂时，可冻干形式的酶就非常有用。可冻干酶可保持常规酶拥有的所有特性，如可重复性，灵敏度和特异性。

SuperScript IV RT-LAMP 预混液可供商业化使用，并经优化可在 LAMP 和 RT-LAMP 中获得出色结果。SuperScript IV RT-LAMP 预混液仅以含甘油形式提供。

不过，该预混液的组分（SuperScript IV 反转录酶、Bst DNA 聚合酶和 RNaseOUT RNase 抑制剂）可以可冻干的形式提供。这些组分以无甘油形式提供，且可根据需求进行进一步定制。

等温扩增方法快速而强劲，但它们通常会发生非特异性扩增，从而导致假阳性结果。为了确保获得可靠的检测结果和控制非特异性扩增：

• 确保实验环境和试剂的干净。建议定期清洁实验区，以防止污染。
• 在冰上配制反应体系，避免非特异性扩增产物。
• 为了提高诸如 LAMP 等方法的特异性 ，需要精心进行引物设计和优化。我们建议遵循 引物设计指南。确保引物熔解温度既不过高也不过低。可能会导致引物非特异性结合，而过高可能会抑制引物与模板的结合。
• 其它反应参数如反应时间或 Bst DNA 聚合酶浓度也需要进行优化。引物设计和模板浓度，单次反应 Bst DNA 聚合酶的用量可减少至 1 U。 如果使用终点法检测，时间可能是引起非特异性扩增的重要因素。将孵育时间缩短几分钟可能有助于将 NTC 与样品区分开来。