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反转录 |
反转录是将 RNA 分子转录成互补 DNA (cDNA) 的过程。这种 cDNA 合成反应由称为反转录酶（简称 RTs）的酶介导完成。莫洛尼鼠白血病病毒 (M-MLV) 反转录酶是分子生物学实验流程中使用的反转录酶之一。然而，为了获得更高的效率、更高的热稳定性和更高的 cDNA 得率，反转录往往优先选择经过基因工程改造的新型反转录酶。
反转录酶的工作原理是怎样的？
反转录反应需通过多个步骤来合成cDNA。反转录酶表现出多种不同的生化活性，主要是 RNA 依赖性 DNA聚合酶活性和 RNase H活性。首先，在有退火引物的情况下，反转录酶与RNA模板结合。接下来，酶的RNA依赖性 DNA 聚合酶活性通过掺入反应混合物中的dNTP来合成cDNA。反应生成得到 cDNA:RNA 杂合链，此过程被称为第一链 cDNA合成。如果反转录酶具有 RNase H活性（比如野生型 M-MLV 反转录酶），那么cDNA:RNA杂合链中的 RNA模板会在第一链合成过程中被切割。经过基因工程改造的反转录酶通常具有更低的RNase H活性，以防 RNA模板过早降解。
反转录酶和 cDNA 合成试剂盒
根据您的实验应用，从各种反转录单酶、预混液、cDNA 合成试剂盒、引物和 dNTP 溶液中选择合适的产品。Invitrogen SuperScript IV 系列产品可助您从任何类型的模板 RNA 中进行出色的 cDNA 合成。
使用反转录酶选择指南，选择合适的产品满足您的cDNA合成需求。
Invitrogen SuperScript系列产品是cDNA合成实验的理想选择。SuperScript IV反转录酶具有高热稳定性、高持续合成能力和高cDNA得率，产品性能出众，且有多种规格可供选择。
采用 VILO (Variable Input, Linear Output) 技术的第一链cDNA合成预混液是两步法RT-qPCR实验应用的理想选择。该预混液以卓越的灵敏度、出色的线性度和较短的反应时间著称。
一步法RT-PCR试剂盒经过优化，可在一个步骤中完成 cDNA 合成和扩增。这种一步法实验方案速度更快、流程更简单，且适合高通量实验应用。
跳过 RNA 分离步骤，加快 cDNA 合成。直接反转录可针对低至单个细胞样本，在单个反应管中进行细胞裂解和 cDNA 合成。
引物和核苷酸是每个 cDNA 合成实验的基础。我们可提供预设计的引物或定制引物。
实惠的第一链 cDNA 合成试剂盒，适用于 RT-PCR、RT-qPCR 和基因芯片研究。
Thermo Scientific 提供一系列经济实惠的反转录试剂，助您获得可靠的实验结果。
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