用于免疫沉淀 (IP) 的微珠状琼脂糖树脂和试剂盒

使用微珠状琼脂糖载体或其他亲和树脂培养基进行 IP 实验

免疫沉淀 (IP) 指的是使用特异性抗体对抗原进行小规模亲和纯化。IP 能让研究人员富集低丰度蛋白以改善下游分析，比如确定活化状态、鉴定翻译后修饰或捕获蛋白结合配偶体（免疫共沉淀 co-IP）。尽管研究人员越来越多地选择磁珠进行 IP 规模纯化，基于琼脂糖的 IP 在许多情况下仍然是一个通用且功能强大的选择，特别是在预期需要扩大规模时。

基于琼脂糖微珠的免疫沉淀

  • 选择更丰富——琼脂糖 IP 试剂盒提供的化学试剂适用于直接固定抗体或亲和配体以捕获抗体、融合蛋白或生物素化诱饵蛋白。
  • 形式更多样——琼脂糖树脂采用便利套件或单独产品的形式，适用于微量离心管或多种不同尺寸的离心杯和色谱柱。
  • 性能卓越——琼脂糖产品旨在更大限度改善富集/相互作用（即容量）并降低背景水平

 

选择适合您实验的微珠状琼脂糖 IP 策略

 IP 试剂盒co-IP 试剂盒适用于标签蛋白的 co-IP和沉降试剂盒蛋白质-核酸沉降试剂盒
目标富集捕获蛋白质-蛋白质相互作用捕获蛋白质-蛋白质相互作用捕获蛋白质-核酸相互作用
策略将抗体固定到靶蛋白上将抗体固定到靶蛋白复合物上将亲和配体或抗体固定到诱饵蛋白复合物上将抗体固定到靶蛋白上
结合靶标天然蛋白质（抗原）天然蛋白质（抗原）重组或生物素化诱饵蛋白天然蛋白质（抗原）
交互靶标无蛋白质与天然蛋白质结合蛋白质与诱饵蛋白结合DNA（染色质）与天然蛋白质结合
琼脂糖基树脂蛋白 A/G Plus、AminoLink Plus、GlycolinkAminoLink Plus固定化钴螯合物、谷胱甘肽、抗 HA 抗体、抗 c-Myc 抗体或链霉素亲和素ChIP 级蛋白 A/G
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查找基于磁珠和琼脂糖微珠的免疫亲和或翻译后修饰特异性亲和结合试剂盒，用于在质谱分析之前进行蛋白富集和纯化。

除了染色质免疫沉淀技术 (ChIP)，Thermo Scientific 还提供完整且易于使用的 DNA 和 RNA 电泳迁移率实验 (EMSA) 试剂盒，以便研究蛋白质与已知 DNA 或 RNA 寡核苷酸探针的结合，从而评估相互作用的亲和力。

从基于树脂和过滤器的色谱柱和试剂盒中选择，以富集或纯化蛋白质样本进行质谱分析。相关技术包括免疫沉淀、PTM 法（例如磷蛋白富集）富集或活性位点标记和活性探针富集。

关于琼脂糖免疫沉淀选项的特征数据

三种不同 Thermo Scientific Pierce IP 试剂盒的比较。

根据产品说明，使用 10 µg 亲和纯化山羊抗 GFP 抗体和 Pierce 直接、 经典和交联 IP 试剂盒执行免疫沉淀。使用 IP 裂解/洗涤缓冲液制备细胞裂解液，并使用试剂盒随附的 Pierce 对照琼脂糖树脂进行预清洗。过夜孵育抗体、树脂和裂解液可形成免疫复合物。使用 IP 裂解/洗涤缓冲液、1X 条件缓冲液洗涤树脂，并用洗脱缓冲液进行洗脱。进行分析时，向 4-20% tris-甘氨酸凝胶中添加 20% 洗脱样本、5% 细胞裂解液上样量 (Lysate) 和 10% 抗体上样量 (IgG)，并使用 Imperial 蛋白染色剂进行染色。对于树脂对照品，进行蛋白沉淀时无需添加抗体。MW：分子量标记物。

Thermo Scientific Pierce 琼脂糖 ChIP 试剂盒能够提供比其他试剂盒更高的特异性信号和更低的背景。

在含有 10% FBS 的 DMEM 中培养 A431 肺癌细胞24小时。抽取24小时血清后，将铺板的一半培养物使用 100 ng/mL EGF 处理10分钟。在培养基中使用 1% 甲醛进行10分钟交联。根据制造商的实验方案进行 ChIP 实验。使用 Bio-Rad iQ5 热循环仪、ABsolute QPCR SYBR Green Fluorescein 预混液和引物（旨在扩增靠近转录起始位点的人 MYC 启动子区域）获得实时荧光定量 PCR 数据。

活化 E2F1:HA 标签 pRb 复合物的免疫共沉淀。

使用 Pierce 人体外表达系统来表达 HA 标签 pRb。作为非特异性预清洗步骤，将 50 μL 翻译反应物在 TBS 中稀释至 200 μL，然后添加至 15 μL 琼脂糖树脂中，并在 4°C 下孵育1小时。将清洗的翻译反应物添加到 50 µL 抗 HA 树脂中，并在 4°C 下通过旋转振荡孵育3小时。使用 3 x 500 µL TBS-T 洗涤树脂。添加 30 μL 2X 非还原样本缓冲液洗脱 HA-pRb:E2F1 复合物。对于未使用和使用 HA-pRb DNA（分别在泳道1和3）时的体外翻译反应物和各自的抗 HA 琼脂糖洗脱组分（分别在泳道2和4），使用兔抗 E2F1 和小鼠抗 HA 进行探测，并使用 Thermo Scientific SuperSignal West Dura 持久性底物进行检测。

Resources

仅供科研使用，不可用于诊断目的。