Protein Electrophoresis Buffers and Reagents bottle

恰当选择蛋白凝胶电泳系统,对于获得研究所需的一致且准确的结果来说至关重要。电泳缓冲液和试剂是蛋白电泳系统的重要组成部分。我们提供一系列SDS-PAGE电泳缓冲液和试剂,用于手工制胶、电泳样品制备、电泳运行和凝胶转印。通过下方的选择指南,您可以查找各凝胶体系推荐使用的电泳缓冲液和试剂。

WB优品促销  蛋白预制胶  电泳槽系统

SDS 样品缓冲液或上样缓冲液

用于 SDS-PAGE 分析的蛋白样本,可通过在上样缓冲液中加热进行变性,上样缓冲液通常含有 1-2% SDS 或 LDS,加入或没加还原剂,如 20mM DTT、2-巯基乙醇 (BME) 或 TCEP。样品缓冲液或上样缓冲液也含有甘油,因此它们比水重,在加入凝胶后能完全沉入浸有缓冲液的上样孔底部。此外,上样缓冲液中还含有带负电荷的低分子量染料,它会在缓冲液前沿迁移,从而可以监控电泳进程。上样缓冲液中最常见的示踪染料是溴酚蓝、酚红和考马斯蓝。下表总结了不同凝胶缓冲液系统中常用的上样缓冲液。

凝胶系统变性上样缓冲液(终浓度)电泳样品制备
Tris-甘氨酸Tris-甘氨酸 SDS 上样缓冲液:Tris HCl (63 mM)、甘油 (10%)、SDS (2%)、溴酚蓝 (0.0025%)、pH 6.8加入上样缓冲液,在 85℃ 下加热样本 2-5 分钟
Bis-Tris 体系LDS 上样缓冲液:Tris base (141 mM)、Tris Hcl (106 mM)、LDS (2%)、EDTA (0.51 mM)、SERVA Blue G-250 (0.22 mM)、酚红 (0.175 mM)、pH 8.5加入上样缓冲液,在 70℃ 下加热样本 10 分钟
Tris-乙酸体系LDS 上样缓冲液:Tris base (141 mM)、Tris Hcl (106 mM)、LDS (2%)、EDTA (0.51 mM)、SERVA Blue G-250 (0.22 mM)、酚红 (0.175 mM)、pH 8.5加入上样缓冲液,在 70℃ 下加热样本 10 分钟
Tris-TricineTricine SDS 上样缓冲液:Tris Hcl (450 mM)、甘油 (12%)、SDS (4%)、考马斯蓝 G (0.00075%)、酚红 (0.0025%)、pH 8.45加入上样缓冲液,在 85℃ 下加热样本 2-5 分钟
酶谱分析(Zymogram)Tris-甘氨酸 SDS:Tris HCl (63 mM)、甘油 (10%)、SDS (2%)、溴酚蓝 (0.0025%)、pH 6.8不要加热样本,加入样本后立即凝胶上样

对于各种荧光应用,我们建议使用不含干扰荧光通道的染料的上样缓冲液(例如,溴酚蓝)。荧光兼容上样缓冲液不含溴酚蓝或其他干扰染料,适用于还原性或非还原性 SDS-PAGE 应用。

如需 SDS 上样缓冲液的配方,可在技术资源标签页中的凝胶产品手册里获取 。

非变性上样缓冲液

用于非变性 PAGE 应用的蛋白样本,应使用不含去垢剂的上样缓冲液制备,以维持蛋白质的天然状态。上样缓冲液含有甘油,因此它们比水重,在加入凝胶后能完全沉入浸有缓冲液的上样孔底部此外,上样缓冲液中还含有带负电荷的低分子量染料,它会在缓冲液前沿迁移,从而可以监控电泳进程。

当制备用于非变性分析应用的样本时,蛋白样本不应进行加热,并应在与样品缓冲液混合后立即加载到凝胶上。

凝胶系统非变性上样缓冲液(最终浓度)
Tris-甘氨酸非变性上样缓冲液:Tris HCl (100mM)、甘油 (10%)、溴酚蓝 (0.00025%)、pH 8.6
Tris-乙酸非变性上样缓冲液:Tris HCl (100mM)、甘油 (10%)、溴酚蓝 (0.00025%)、pH 8.6
等电聚焦(IEF)IEF 上样缓冲液 pH 3-7:赖氨酸 (40mM)、甘油 (15%)
IEF 上样缓冲液 pH 3-10:精氨酸 (20mM)、赖氨酸 (20mM)、甘油 (15%)
NativePAGE Bis-TrisNativePAGE 上样缓冲液 (4X):Bis-Tris (50mM)、6 N HCl、NaCl (50mM)、甘油 (10%)、胭脂红 S (0.001%)、pH 7.2
如需非变性上样缓冲液的配方,可在技术资源标签页中的凝胶产品手册里获取。

SDS 电泳缓冲液

在蛋白电泳(不连续缓冲液系统)中,凝胶中的一级阴离子与电泳缓冲液中的一级阴离子不同(或不连续)。下表为不同凝胶缓冲系统推荐了相应的 SDS 电泳缓冲液或非变性电泳缓冲液。

凝胶系统SDS 电泳缓冲液
Tris-甘氨酸Tris-甘氨酸 SDS:Tris base (25mM)、甘氨酸 (192mM)、SDS (0.1%)、pH 8.3
Bis-Tris 体系MES SDS:MES (50mM)、Tris base (50mM)、SDS (0.1%)、EDTA (1mM)、pH 7.3
MOPS SDS:MOPS (50mM)、Tris base (50mM)、SDS (0.1%)、EDTA (1mM)、pH 7.7
Tris-乙酸Tris-乙酸 SDS:Tris base (50mM)、Tricine (50mM)、SDS (0.1%)、pH 8.24
Tris-tricineTricine-SDS:Tris base (100mM)、Tricine (100mM)、SDS (0.1%)、pH 8.3

非变性电泳缓冲液

凝胶系统非变性电泳缓冲液
Tris-甘氨酸Tris-甘氨酸非变性缓冲液:Tris base (25mM)、甘氨酸 (192mM)、pH 8.3
Tris-乙酸Tris-甘氨酸非变性缓冲液:Tris base (25mM)、甘氨酸 (192mM)、pH 8.3
等电聚焦(IEF)IEF 阴极缓冲液 pH 3-7:赖氨酸 (40mM)
IEF 阴极缓冲液 pH 3-10:精氨酸 (20mM)、赖氨酸 (20mM)
IEF 阳极缓冲液:磷酸 85% (7 mM)
酶谱分析(Zymogram)Tris-甘氨酸 SDS:Tris base (25mM)、甘氨酸 (192mM)、SDS (0.1%)、pH 8.3
如需SDS 电泳缓冲液或非变性电泳缓冲液的配方,可在技术资源标签页中的凝胶产品手册里获取。

NuPAGE Bis-Tris SDS 缓冲液和试剂

蛋白样本凝胶体系上样缓冲液电泳缓冲液转印缓冲液
宽范围分子量 (6-400kDa)Bis-tris变性:LDS 上样缓冲液

还原:样本还原剂
低至中分子量蛋白 (6–260kDa):MES SDS 缓冲液

中至高分子量蛋白 (14–260kDa):MOPS SDS 缓冲液

还原型样品:抗氧化剂
Bis-tris 转印缓冲液

Bolt Bis-tris Plus SDS 缓冲液和试剂

蛋白样本凝胶体系上样缓冲液电泳缓冲液转印缓冲液
宽范围分子量 (6-400kDa)Bis-tris变性:LDS 上样缓冲液

还原:样本还原剂
低至中分子量蛋白 (6–260kDa):MES SDS 缓冲液

中至高分子量蛋白 (14–260kDa):MOPS SDS 缓冲液

还原型样品:抗氧化剂
Bis-tris 转印缓冲液

为什么选择 LDS 上样缓冲液

Bolt 和NuPAGE LDS 上样缓冲液是使用考马斯 G250 和酚红代替溴酚蓝作为示踪染料来配制的。考马斯 (SERVA) G250 在 MES 和 MOPS SDS 电泳缓冲液中均可显示出清晰的染料前沿,并且比溴酚蓝更靠近移动的离子迁移前沿。而溴酚蓝在 MES SDS 电泳缓冲液中的迁移速度会比某些肽段慢。这确保了小的肽段不会从凝胶中跑出。在 Bolt 和 NuPAGE LDS 上样缓冲液中,示踪染料(考马斯 G250)的浓度增加,以便于对染料前沿的观察。通过使用 LDS 替代 SDS 可配制 4 X 溶液。4X 溶液可让样本中的的蛋白浓度更高,避免蛋白样本过于稀释。

Tris-甘氨酸缓冲液和试剂

蛋白样本凝胶体系上样缓冲液电泳缓冲液转印缓冲液
宽范围分子量 (6-400kDa)Tris-甘氨酸变性:Tris-甘氨酸 SDS 上样缓冲液

非变性:Tris-甘氨酸非变性上样缓冲液
变性:Tris-甘氨酸 SDS 缓冲液

非变性:Tris-甘氨酸非变性缓冲液
Tris-甘氨酸转印缓冲液

Tris-乙酸缓冲液和试剂

蛋白样本凝胶体系上样缓冲液电泳缓冲液转印缓冲液
高分子量
(40-500kDa)
Tris-乙酸变性:LDS 上样缓冲液

非变性:Tris-甘氨酸非变性上样缓冲液
变性:Tris-乙酸 SDS 缓冲液

非变性:Tris-甘氨酸非变性缓冲液
Bis-tris 转印缓冲液

Tricine SDS 缓冲液和试剂

蛋白样本凝胶体系上样缓冲液电泳缓冲液转印缓冲液
低分子量
(2.5-40kDa)
Tricine 体系变性:Tricine SDS 上样缓冲液Tricine SDS 缓冲液Tris-甘氨酸转印缓冲液

推荐的 IEF 凝胶缓冲液

酶谱凝胶缓冲液和试剂

凝胶类型上样缓冲液电泳缓冲液凝胶显影缓冲液凝胶复性缓冲液
酶谱凝胶Tris-甘氨酸 SDS 上样缓冲液Tris-甘氨酸 SDS 电泳缓冲液酶谱显影缓冲液酶谱复性缓冲液

NativePAGE Bis-Tris 凝胶缓冲液和试剂

手灌胶

在手工制备聚丙烯酰胺凝胶时,选择高质量的制胶试剂可以帮助获得更好的电泳结果。SureCast 缓冲液和试剂可让制备高质量的 Tris-甘氨酸手灌胶更为快速简单。

手工制备 Tris-甘氨酸凝胶的 SDS-PAGE 凝胶配方

根据下表中的体积准备分离胶溶液。表中所列的体积可制备一块凝胶。根据需要制备的凝胶数量,成比例放大体积。

 聚丙烯酰胺浓度%
溶液4%6%8%10%12%14%16%18%20%
SureCast 丙烯酰胺 (40%)0.8mL1.2mL1.6mL2.0 mL2.4mL2.8mL3.3mL3.6mL4.0mL
SureCast 分离胶缓冲液2.0 mL2.0 mL2.0 mL2.0 mL2.0 mL2.0 mL2.0 mL2.0 mL2.0 mL
蒸馏水5.1mL4.7mL4.3mL3.9mL3.5mL3.1mL2.7mL2.3mL1.9mL
10% SureCast 过硫酸铵 (APS)80µL80µL80µL80µL80µL80µL80µL80µL80µL
SureCast TEMED**8µL8µL8µL8µL8µL8µL8µL8µL8µL

**最后加入并在倒胶之前将其充分混匀

根据下表中的体积准备浓缩胶溶液。表中所列的体积适用于制备一块凝胶。根据需要制备的凝胶数量,成比例放大体积。备注:溶液无需排气。

***最后加入并在倒胶之前将其充分混匀

了解关于SureCast手灌胶系统的信息,并获取更多SDS-PAGE 制胶试剂的配方

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NuPAGE Bis-Tris 缓冲液

Bolt Bis-Tris Plus 缓冲液

Tris-甘氨酸缓冲液

Tris-乙酸缓冲液

Tricine 系统缓冲液

IEF 缓冲液

酶谱缓冲液

NativePAGE Bis-Tris 缓冲液

手灌胶缓冲液和试剂

SDS 样品缓冲液或上样缓冲液

用于 SDS-PAGE 分析的蛋白样本,可通过在上样缓冲液中加热进行变性,上样缓冲液通常含有 1-2% SDS 或 LDS,加入或没加还原剂,如 20mM DTT、2-巯基乙醇 (BME) 或 TCEP。样品缓冲液或上样缓冲液也含有甘油,因此它们比水重,在加入凝胶后能完全沉入浸有缓冲液的上样孔底部。此外,上样缓冲液中还含有带负电荷的低分子量染料,它会在缓冲液前沿迁移,从而可以监控电泳进程。上样缓冲液中最常见的示踪染料是溴酚蓝、酚红和考马斯蓝。下表总结了不同凝胶缓冲液系统中常用的上样缓冲液。

凝胶系统变性上样缓冲液(终浓度)电泳样品制备
Tris-甘氨酸Tris-甘氨酸 SDS 上样缓冲液:Tris HCl (63 mM)、甘油 (10%)、SDS (2%)、溴酚蓝 (0.0025%)、pH 6.8加入上样缓冲液,在 85℃ 下加热样本 2-5 分钟
Bis-Tris 体系LDS 上样缓冲液:Tris base (141 mM)、Tris Hcl (106 mM)、LDS (2%)、EDTA (0.51 mM)、SERVA Blue G-250 (0.22 mM)、酚红 (0.175 mM)、pH 8.5加入上样缓冲液,在 70℃ 下加热样本 10 分钟
Tris-乙酸体系LDS 上样缓冲液:Tris base (141 mM)、Tris Hcl (106 mM)、LDS (2%)、EDTA (0.51 mM)、SERVA Blue G-250 (0.22 mM)、酚红 (0.175 mM)、pH 8.5加入上样缓冲液,在 70℃ 下加热样本 10 分钟
Tris-TricineTricine SDS 上样缓冲液:Tris Hcl (450 mM)、甘油 (12%)、SDS (4%)、考马斯蓝 G (0.00075%)、酚红 (0.0025%)、pH 8.45加入上样缓冲液,在 85℃ 下加热样本 2-5 分钟
酶谱分析(Zymogram)Tris-甘氨酸 SDS:Tris HCl (63 mM)、甘油 (10%)、SDS (2%)、溴酚蓝 (0.0025%)、pH 6.8不要加热样本,加入样本后立即凝胶上样

对于各种荧光应用,我们建议使用不含干扰荧光通道的染料的上样缓冲液(例如,溴酚蓝)。荧光兼容上样缓冲液不含溴酚蓝或其他干扰染料,适用于还原性或非还原性 SDS-PAGE 应用。

如需 SDS 上样缓冲液的配方,可在技术资源标签页中的凝胶产品手册里获取 。

非变性上样缓冲液

用于非变性 PAGE 应用的蛋白样本,应使用不含去垢剂的上样缓冲液制备,以维持蛋白质的天然状态。上样缓冲液含有甘油,因此它们比水重,在加入凝胶后能完全沉入浸有缓冲液的上样孔底部此外,上样缓冲液中还含有带负电荷的低分子量染料,它会在缓冲液前沿迁移,从而可以监控电泳进程。

当制备用于非变性分析应用的样本时,蛋白样本不应进行加热,并应在与样品缓冲液混合后立即加载到凝胶上。

凝胶系统非变性上样缓冲液(最终浓度)
Tris-甘氨酸非变性上样缓冲液:Tris HCl (100mM)、甘油 (10%)、溴酚蓝 (0.00025%)、pH 8.6
Tris-乙酸非变性上样缓冲液:Tris HCl (100mM)、甘油 (10%)、溴酚蓝 (0.00025%)、pH 8.6
等电聚焦(IEF)IEF 上样缓冲液 pH 3-7:赖氨酸 (40mM)、甘油 (15%)
IEF 上样缓冲液 pH 3-10:精氨酸 (20mM)、赖氨酸 (20mM)、甘油 (15%)
NativePAGE Bis-TrisNativePAGE 上样缓冲液 (4X):Bis-Tris (50mM)、6 N HCl、NaCl (50mM)、甘油 (10%)、胭脂红 S (0.001%)、pH 7.2
如需非变性上样缓冲液的配方,可在技术资源标签页中的凝胶产品手册里获取。

SDS 电泳缓冲液

在蛋白电泳(不连续缓冲液系统)中,凝胶中的一级阴离子与电泳缓冲液中的一级阴离子不同(或不连续)。下表为不同凝胶缓冲系统推荐了相应的 SDS 电泳缓冲液或非变性电泳缓冲液。

凝胶系统SDS 电泳缓冲液
Tris-甘氨酸Tris-甘氨酸 SDS:Tris base (25mM)、甘氨酸 (192mM)、SDS (0.1%)、pH 8.3
Bis-Tris 体系MES SDS:MES (50mM)、Tris base (50mM)、SDS (0.1%)、EDTA (1mM)、pH 7.3
MOPS SDS:MOPS (50mM)、Tris base (50mM)、SDS (0.1%)、EDTA (1mM)、pH 7.7
Tris-乙酸Tris-乙酸 SDS:Tris base (50mM)、Tricine (50mM)、SDS (0.1%)、pH 8.24
Tris-tricineTricine-SDS:Tris base (100mM)、Tricine (100mM)、SDS (0.1%)、pH 8.3

非变性电泳缓冲液

凝胶系统非变性电泳缓冲液
Tris-甘氨酸Tris-甘氨酸非变性缓冲液:Tris base (25mM)、甘氨酸 (192mM)、pH 8.3
Tris-乙酸Tris-甘氨酸非变性缓冲液:Tris base (25mM)、甘氨酸 (192mM)、pH 8.3
等电聚焦(IEF)IEF 阴极缓冲液 pH 3-7:赖氨酸 (40mM)
IEF 阴极缓冲液 pH 3-10:精氨酸 (20mM)、赖氨酸 (20mM)
IEF 阳极缓冲液:磷酸 85% (7 mM)
酶谱分析(Zymogram)Tris-甘氨酸 SDS:Tris base (25mM)、甘氨酸 (192mM)、SDS (0.1%)、pH 8.3
如需SDS 电泳缓冲液或非变性电泳缓冲液的配方,可在技术资源标签页中的凝胶产品手册里获取。

NuPAGE Bis-Tris SDS 缓冲液和试剂

蛋白样本凝胶体系上样缓冲液电泳缓冲液转印缓冲液
宽范围分子量 (6-400kDa)Bis-tris变性:LDS 上样缓冲液

还原:样本还原剂
低至中分子量蛋白 (6–260kDa):MES SDS 缓冲液

中至高分子量蛋白 (14–260kDa):MOPS SDS 缓冲液

还原型样品:抗氧化剂
Bis-tris 转印缓冲液

Bolt Bis-tris Plus SDS 缓冲液和试剂

蛋白样本凝胶体系上样缓冲液电泳缓冲液转印缓冲液
宽范围分子量 (6-400kDa)Bis-tris变性:LDS 上样缓冲液

还原:样本还原剂
低至中分子量蛋白 (6–260kDa):MES SDS 缓冲液

中至高分子量蛋白 (14–260kDa):MOPS SDS 缓冲液

还原型样品:抗氧化剂
Bis-tris 转印缓冲液

为什么选择 LDS 上样缓冲液

Bolt 和NuPAGE LDS 上样缓冲液是使用考马斯 G250 和酚红代替溴酚蓝作为示踪染料来配制的。考马斯 (SERVA) G250 在 MES 和 MOPS SDS 电泳缓冲液中均可显示出清晰的染料前沿,并且比溴酚蓝更靠近移动的离子迁移前沿。而溴酚蓝在 MES SDS 电泳缓冲液中的迁移速度会比某些肽段慢。这确保了小的肽段不会从凝胶中跑出。在 Bolt 和 NuPAGE LDS 上样缓冲液中,示踪染料(考马斯 G250)的浓度增加,以便于对染料前沿的观察。通过使用 LDS 替代 SDS 可配制 4 X 溶液。4X 溶液可让样本中的的蛋白浓度更高,避免蛋白样本过于稀释。

Tris-甘氨酸缓冲液和试剂

蛋白样本凝胶体系上样缓冲液电泳缓冲液转印缓冲液
宽范围分子量 (6-400kDa)Tris-甘氨酸变性:Tris-甘氨酸 SDS 上样缓冲液

非变性:Tris-甘氨酸非变性上样缓冲液
变性:Tris-甘氨酸 SDS 缓冲液

非变性:Tris-甘氨酸非变性缓冲液
Tris-甘氨酸转印缓冲液

Tris-乙酸缓冲液和试剂

蛋白样本凝胶体系上样缓冲液电泳缓冲液转印缓冲液
高分子量
(40-500kDa)
Tris-乙酸变性:LDS 上样缓冲液

非变性:Tris-甘氨酸非变性上样缓冲液
变性:Tris-乙酸 SDS 缓冲液

非变性:Tris-甘氨酸非变性缓冲液
Bis-tris 转印缓冲液

Tricine SDS 缓冲液和试剂

蛋白样本凝胶体系上样缓冲液电泳缓冲液转印缓冲液
低分子量
(2.5-40kDa)
Tricine 体系变性:Tricine SDS 上样缓冲液Tricine SDS 缓冲液Tris-甘氨酸转印缓冲液

推荐的 IEF 凝胶缓冲液

酶谱凝胶缓冲液和试剂

凝胶类型上样缓冲液电泳缓冲液凝胶显影缓冲液凝胶复性缓冲液
酶谱凝胶Tris-甘氨酸 SDS 上样缓冲液Tris-甘氨酸 SDS 电泳缓冲液酶谱显影缓冲液酶谱复性缓冲液

NativePAGE Bis-Tris 凝胶缓冲液和试剂

手灌胶

在手工制备聚丙烯酰胺凝胶时,选择高质量的制胶试剂可以帮助获得更好的电泳结果。SureCast 缓冲液和试剂可让制备高质量的 Tris-甘氨酸手灌胶更为快速简单。

手工制备 Tris-甘氨酸凝胶的 SDS-PAGE 凝胶配方

根据下表中的体积准备分离胶溶液。表中所列的体积可制备一块凝胶。根据需要制备的凝胶数量,成比例放大体积。

 聚丙烯酰胺浓度%
溶液4%6%8%10%12%14%16%18%20%
SureCast 丙烯酰胺 (40%)0.8mL1.2mL1.6mL2.0 mL2.4mL2.8mL3.3mL3.6mL4.0mL
SureCast 分离胶缓冲液2.0 mL2.0 mL2.0 mL2.0 mL2.0 mL2.0 mL2.0 mL2.0 mL2.0 mL
蒸馏水5.1mL4.7mL4.3mL3.9mL3.5mL3.1mL2.7mL2.3mL1.9mL
10% SureCast 过硫酸铵 (APS)80µL80µL80µL80µL80µL80µL80µL80µL80µL
SureCast TEMED**8µL8µL8µL8µL8µL8µL8µL8µL8µL

**最后加入并在倒胶之前将其充分混匀

根据下表中的体积准备浓缩胶溶液。表中所列的体积适用于制备一块凝胶。根据需要制备的凝胶数量,成比例放大体积。备注:溶液无需排气。

***最后加入并在倒胶之前将其充分混匀

了解关于SureCast手灌胶系统的信息,并获取更多SDS-PAGE 制胶试剂的配方

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Tris-甘氨酸缓冲液

Tris-乙酸缓冲液

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手灌胶缓冲液和试剂

仅供科研使用,不可用于诊断目的。