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NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶是预先制备好的聚丙烯酰胺凝胶，可在变性条件下实现宽范围分子量蛋白的理想分离。Bis-Tris 体系通过提供中性 pH 环境，最大程度地减少蛋白质修饰，并且凝胶性能一致且可靠。因此，当下游实验需要进行转印、灵敏的蛋白质印迹分析或其他蛋白质完整性至关重要的分析时，NuPAGE 和 Bolt 蛋白预制胶是一个理想的选择。Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶采用独特的 WedgeWell 楔形孔设计，使样品上样体积比其他凝胶高出 2X 倍。NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶的 Bis-Tris 体系还可以提高聚丙烯酰胺凝胶基质的稳定性，从而可以在室温下保存，有助于节省冰箱空间。
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶的规格
| NuPAGE Bis-Tris 预制胶 | Bolt Bis-Tris Plus 预制胶 | |
|---|---|---|
| 何时选择 | 需要灵活选择孔数和凝胶规格 | 处理稀释样品或需要更大的上样量，或者需要更快的电泳时间 |
| 可选凝胶规格 | 小型胶：8 cm x 8 cm（1.0 或 1.5 mm 厚） 中型胶：8 cm x 13 cm（1.0 mm 厚） | 小型胶：8 cm x 8 cm（1.0 mm 厚） |
| 储存条件 | 4–25°C | |
| 有效期 | 12 个月 | 16 个月 |
| 高批间一致性 | Rf 值（迁移）的变异系数（CV）仅 2％ | Rf 值（迁移）的变异系数（CV）仅 2％ |
| 推荐的上样缓冲液 | NuPAGE LDS 上样缓冲液 | Bolt LDS 上样缓冲液 |
| 推荐的电泳缓冲液 | NuPAGE MES SDS 或 NuPAGE MOPS SDS 电泳缓冲液 | Bolt MES SDS 或 Bolt MOPS SDS 电泳缓冲液 |
| 电泳时间 | 35 分钟（MES 缓冲液） 50 分钟（MOPS 缓冲液） | 20 分钟（MES 缓冲液） 35 分钟（MOPS 缓冲液） |
| 推荐的转印缓冲液 | NuPAGE 转印缓冲液 | Bolt 转印缓冲液 |
| 凝胶体系 | Bis-Tris 体系 | |
| 可选的聚丙烯酰胺浓度 | 8%, 10%, 12%, 4–12% | |
| 分离范围 | 15 kDA 至 260 kDa （MOPS 缓冲液） 3.5 kDA 至 160 kDa （MES 缓冲液） | |
| 与小型胶配套的电泳槽（设备） | Mini Gel Tank小型胶电泳槽 或 XCell SureLock Mini-Cell 电泳槽 | |
| 与中型胶配套的电泳槽（设备） | Invitrogen XCell4 SureLock Midi-Cell 电泳槽或 Bio-Rad Criterion（需配转接头） | 不提供中型胶 |
| 分离方式 | 根据分子量分离蛋白质 | |
| 应用 | SDS-PAGE | |
| 可选上样孔规格* | 小型胶：1, 9, 10, 12, 15, 17, 2D 孔, IPG 孔 中型胶：12+2, 20, 26 孔 | WedgeWell 楔形孔：10, 12, 15 17 孔（每孔上样量高达 2X） |
*并非所有浓度的预制胶都提供每种上样孔规格
Invitrogen Bis-Tris 蛋白预制胶的优势
锐利笔直的条带
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的中性 pH 缓冲液可提供清晰笔直的条带。电泳分离过程中，这类预制胶的工作 pH 值接近 7。而在 Laemmli 系统（Tris-甘氨酸）中，凝胶在碱性 pH 值（pH 约 9.5）下运行。在高 pH 值下，残留的未聚合丙烯酰胺可与待分离蛋白质的半胱氨酸和赖氨酸残基反应。这可能会影响下游分析，例如蛋白质印迹转印。在 NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris 预制胶的中性 pH 值下，这些反应比在 Tris-甘氨酸预制胶的碱性 pH 值下慢几个数量级，从而能获得更清晰锐利的条带和更高的分辨率。
NuPAGE Bis-Tris 预制胶和传统 tris-甘氨酸预制胶的蛋白质分离效果比较。下面列出的样品在（A）Invitrogen NuPAGE MES SDS 电泳缓冲液中的 NuPAGE 4–12％ Bis-Tris 凝胶体系上运行，或（B）在另一家制造商的 4–20％ tris-甘氨酸凝胶体系上运行。请注意 NuPAGE 蛋白预制胶中样品条带的分辨率更高。在另一制造商的凝胶中则观察到分辨不清的“模糊”条带，这是样品中某些二硫键重新氧化的结果，从而导致迁移率发生轻微变化。泳道1、6、7、10：Invitrogen Mark12 非预染蛋白质分子量标准；泳道 2：高蛋白上样量（4 个蛋白质，6 µg/蛋白）；泳道 3：宽范围分子量标准；泳道 4、5：大肠杆菌提取物；泳道 8：E-PAGE SeeBlue 预染蛋白质分子量标准；泳道 9：Invitrogen MultiMark 多色蛋白质分子量标准。
更好的样品完整性
样品前处理是成功进行蛋白质分析的关键步骤。在 100°C 下加热时，传统 Laemmli 型上样缓冲液的 pH 值从 6.8 变为 5.2。 已知较低的 pH 值可诱导天冬氨酰-脯氨酰（Asp-Pro）肽键裂解，从而导致蛋白质降解。通过维护 >7.0 的 pH 环境，InvitrogenNuPAGE LDS 上样缓冲液 和 Bolt LDS 上样缓冲液通过最小化 Asp-Pro 裂解来保持蛋白质完整性。如下所示，在整个电泳过程中，使用 Invitrogen NuPAGE 体系可保持样品完整性；用 Laemmli（Tris-甘氨酸）上样缓冲液制备的样品中可见蛋白质降解。Invitrogen NuPAGE 抗氧化剂电泳缓冲液添加剂可在电泳过程中最大程度地减少蛋白质氧化，并保持还原型蛋白条带清晰锐利。
出色的样本完整性。与使用 Laemmli（tris-甘氨酸）样品缓冲液（右）制备的样品相比，使用 NuPAGE Bis-Tris 预制胶体系（左）可在整个电泳过程中保持样品的完整性。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶具有高容量 WedgeWell 楔形上样孔
每个 Bolt 预制胶上独特的楔形上样孔可提供更高的上样量，因此您可以在每个孔中加入多达两倍的蛋白质样品。
| 上样孔数量 | 推荐上样体积 | 最大上样体积 | 最高蛋白上样量 |
|---|---|---|---|
| 10 孔 | 40 µL | 60 µL | 0.5 µg/条带 |
| 12 孔 | 30 µL | 45 µL | 0.4 µg/条带 |
| 15 孔 | 20 µL | 35 µL | 0.25 µg/条带 |
| 17 孔 | 15 µL | 30 µL | 0.2 µg/条带 |
即使在稀释样品中也可以检测蛋白质，或者测量低丰度蛋白质的表达。有了更多的上样空间，您不再需要担心样品溢出和蛋白质印迹上的孔间污染。无需使用特殊的凝胶上样枪头，上样操作也更加容易。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的高样品容量。(A) 在 Invitrogen Bolt 4–12% Bis-Tris Plus 10泳道中，间隔加入体积逐渐增加的荧光蛋白标准品（40 μL–70 μL）。(B) 在 Bio-Rad 的 4–20% 10 孔预制胶的泳道中，间隔加入相同的蛋白标准品（10 μL–40 μL）。可在空白泳道中观察到来自相邻孔中样品的信号，即样品溢出导致的孔间污染。
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶是预先制备好的聚丙烯酰胺凝胶，可在变性条件下的凝胶电泳中实现宽范围分子量蛋白的理想分离。Bis-Tris 凝胶体系提供了一个中性的 pH 环境，可最大程度地减少蛋白质修饰，获得更清晰锐利的条带，而避免出现典型的"微笑"条带。另外，分离低丰度蛋白质时，保持蛋白质完整性变得尤为重要。
NuPAGE Bis-Tris 蛋白预制胶提供小型胶和中型胶规格，Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶提供小型胶规格。NuPAGE Bis-Tris和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶都非常适用于蛋白质印迹分析，以及其他对蛋白质完整性和灵敏度要求很高的应用，比如蛋白质测序和质谱分析。Bolt Bis-Tris Plus 预制胶采用独特的 WedgeWell 楔形孔设计，使样品上样体积比其他凝胶高出 2x 倍。
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶的优势包括：
- 更出色的蛋白完整性—优化的样品前处理过程，完整保护您的蛋白质
- 更宽的蛋白质分离范围—选择合适的预制胶和电泳缓冲液体系有助于实现蛋白的高效分离
- 更短的电泳时间—只需 22-35 分钟即可实现蛋白分离
- 更长的凝胶保存时间—NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶在室温下分别可以保存至少 12 个月和 16 个月。
- Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的高容量孔—楔形孔使上样操作变得更容易（无需专门的移液吸头），并使得上样量可高达两倍。
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶适用于变性凝胶电泳应用。为了获取理想的电泳分离结果，我们推荐使用含有 SDS 的缓冲液。使用 MES SDS 电泳缓冲液进行凝胶电泳时，可以更好地分离较小的蛋白质（1-200 kDa），使用 MOPS SDS 电泳缓冲液进行凝胶电泳时，可以分离中等到高分子量的蛋白质（14-260 kDa）。
Bis-Tris 体系预制胶使用含有以下三种离子的 bis-tris 非连续缓冲液体系：
- 氯离子 (–) 来自凝胶缓冲液，并因其相对于体系中其他阴离子与阳极之间有更强的亲和力而作为前导离子。凝胶缓冲液离子有 bis-tris (+) 和 Cl (–) (pH 6.4)。
- MES 或 MOPS(–) 在电泳缓冲液中充当尾随离子。电泳缓冲液离子有 tris (+)、MOPS/MES (–) 以及十二烷基硫酸盐 (pH 7.3–7.7)。
Bis-Tris (+) 是凝胶缓冲液和电泳缓冲液中常见的离子。较低 pH 的凝胶缓冲液（pH 6.4）和电泳缓冲液（pH 7.3–7.7）的组合会导致电泳期间 7 的运行 pH 值显著降低。
让蛋白预制胶迎新套装即刻开启全新体验
蛋白预制胶迎新套装是首次使用 Invitrogen 蛋白预制胶的超值之选。蛋白预制胶迎新套装可提供多种凝胶体系和浓度选择，每一款迎新套装都包含小型预制胶、必备缓冲液，蛋白质分子量标准和小型胶电泳槽，相较于单独采购可极大节省成本。
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶的性能经过优化
与传统的 tris-甘氨酸预制胶不同，NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶采用 Bis-Tris HCl 缓冲（pH 6.4），工作 pH 约为 7.0。这种中性 pH 环境加上独特，温和的样品制备方案，意味着您的蛋白质样品始终处于温和的非酸性条件下，从而保留了蛋白质的完整性并最大程度地减少了蛋白质修饰。这有助于确保每次都能获得高灵敏度且准确的蛋白质印迹结果。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的灵敏度更高。使用 iBlot 2 转印设备，将 A431 细胞的总细胞提取物从 4–12% 的 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶和 4-20% 的 Tris-甘氨酸预制胶上转印到 NC 和 PVDF 膜上。用 100 ng/mL 人表皮生长因子（hEGF）处理细胞，以上调磷酸 EGF 受体的表达。细胞提取物的蛋白质上样量范围从 20 μg 到 1.2 μg。印迹在 iBind 蛋白免疫印迹处理系统中孵育，使用磷酸化 EGF 受体（Tyr1068）(1H12) 小鼠单克隆抗体的 1:200 稀释液和抗小鼠 HRP 二抗的 1:2,000 稀释液。
条带完整性
NuPAGE 和 Bolt 蛋白预制胶可通过中性 pH 凝胶体系来保持蛋白质完整性。这种体系使电泳过程中的蛋白质修饰最小化。
使用Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的蛋白免疫印迹结果干净、清晰，展示出全长蛋白质的蛋白信号，而使用 Bio-Rad TGX 预制胶的蛋白免疫印迹结果则显示有多个低分子量的蛋白降解产物。在 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶和 Bio-Rad TGX tris-甘氨酸预制胶上分析了与癌症有关的蛋白激酶（IKKϐ、EPHB3、HCK、MAPK14、FLT1 和 DDR2）。将纯化的激酶（每种 50 ng），MagicMark 蛋白质分子量标准和纯化的重组 GST 蛋白上样至 10 孔，4-12％ Bolt 预制胶和 10 孔，4-20％ Bio-Rad TGX 预制胶上。电泳分离样品并按照各制造商的说明书转印到 0.45-μm PVDF 膜上。使用 GST 抗体和 WesternBreeze 化学发光检测试剂进行印迹检测。
条带分辨率
NuPAGE 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶相比 Bio-Rad 预制胶可提供更高的分辨率。通过延长 10%的凝胶分离距离，优化的凝胶体系和梯度浓度，您可以在Bolt 预制胶上看到更清晰的蛋白条带分离结果。在下方实验结果中，您可以看到胰岛素 B 链和胰岛素 A 链的两个单独的条带，它们具有相近的分子量。Bolt 预制胶上的蛋白质条带看起来更平直，整体条带的信号强度都很均匀，而 Bio-Rad 预制胶上的蛋白质条带不均匀且质量很差。
Bolt Bis-Tris 预制胶条带分辨率—与Bio-Rad 蛋白预制胶的染色结果比较。(A) 使用 Invitrogen SimplyBlue SafeStain 染料对 Bolt Bis-Tris 梯度胶进行染色。(B) 使用竞争对手的染料对 Bio-Rad 的 tris-甘氨酸梯度胶进行染色。(C) 放大两种预制胶的泳道 5 细节，显示胰岛素 B 链（3.5 kDa）和胰岛素 A 链（2.5 kDa）的分离效果。
使用蛋白凝胶选择手册为你的蛋白电泳实验查找最合适的小型或中型胶。
使用蛋白凝胶转换工具查找最合适的 Invitrogen 小型或中型胶，替代其他供应商的预制胶。
正在使用 Tris-甘氨酸或 Tricine 预制胶？使用下面的 NuPAGE 预制胶转换指南来查找合适的 NuPAGE 预制胶和相应的优化缓冲液。
NuPAGE 预制胶转换指南
| 如果您正在使用： | 推荐的 NuPAGE 预制胶： | 缓冲液体系 |
|---|---|---|
| Tris-甘氨酸预制胶 | ||
| 4% | NuPAGE 3-8% Tris-乙酸预制胶 | Tris-乙酸体系 |
| 6% | NuPAGE 3-8% Tris-乙酸预制胶 | Tris-乙酸体系 |
| 10% | NuPAGE 8% Bis-Tris 预制胶 | MOPS |
| NuPAGE 10% Bis-Tris 预制胶 | MOPS | |
| 12% | NuPAGE 10% Bis-Tris 预制胶 | MOPS |
| 14% | NuPAGE 12% Bis-Tris 预制胶 | MOPS |
| 16% | NuPAGE 12% Bis-Tris 预制胶 | MES |
| 18% | NuPAGE 12% Bis-Tris 预制胶 | MES |
| 4-12% | NuPAGE 3-8% Tris-乙酸预制胶 | Tris-乙酸体系 |
| NuPAGE 4-12% Bis-Tris 预制胶 | MOPS | |
| 4-20% | NuPAGE 4-12% Bis-Tris 预制胶 | MES |
| 8-16% | NuPAGE 4-12% Bis-Tris 预制胶 | MOPS |
| 10-20% | NuPAGE 12% Bis-Tris 预制胶 | MOPS |
| Tricine 预制胶 | ||
| 10% | NuPAGE 8% Bis-Tris 预制胶 | MES |
| NuPAGE 10% Bis-Tris 预制胶 | MES | |
| 16% | NuPAGE 4-12% Bis-Tris 预制胶 | MES |
| 10-20% | NuPAGE 4-12% Bis-Tris 预制胶 | MES |
使用指南
手册
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶的规格
| NuPAGE Bis-Tris 预制胶 | Bolt Bis-Tris Plus 预制胶 | |
|---|---|---|
| 何时选择 | 需要灵活选择孔数和凝胶规格 | 处理稀释样品或需要更大的上样量，或者需要更快的电泳时间 |
| 可选凝胶规格 | 小型胶：8 cm x 8 cm（1.0 或 1.5 mm 厚） 中型胶：8 cm x 13 cm（1.0 mm 厚） | 小型胶：8 cm x 8 cm（1.0 mm 厚） |
| 储存条件 | 4–25°C | |
| 有效期 | 12 个月 | 16 个月 |
| 高批间一致性 | Rf 值（迁移）的变异系数（CV）仅 2％ | Rf 值（迁移）的变异系数（CV）仅 2％ |
| 推荐的上样缓冲液 | NuPAGE LDS 上样缓冲液 | Bolt LDS 上样缓冲液 |
| 推荐的电泳缓冲液 | NuPAGE MES SDS 或 NuPAGE MOPS SDS 电泳缓冲液 | Bolt MES SDS 或 Bolt MOPS SDS 电泳缓冲液 |
| 电泳时间 | 35 分钟（MES 缓冲液） 50 分钟（MOPS 缓冲液） | 20 分钟（MES 缓冲液） 35 分钟（MOPS 缓冲液） |
| 推荐的转印缓冲液 | NuPAGE 转印缓冲液 | Bolt 转印缓冲液 |
| 凝胶体系 | Bis-Tris 体系 | |
| 可选的聚丙烯酰胺浓度 | 8%, 10%, 12%, 4–12% | |
| 分离范围 | 15 kDA 至 260 kDa （MOPS 缓冲液） 3.5 kDA 至 160 kDa （MES 缓冲液） | |
| 与小型胶配套的电泳槽（设备） | Mini Gel Tank小型胶电泳槽 或 XCell SureLock Mini-Cell 电泳槽 | |
| 与中型胶配套的电泳槽（设备） | Invitrogen XCell4 SureLock Midi-Cell 电泳槽或 Bio-Rad Criterion（需配转接头） | 不提供中型胶 |
| 分离方式 | 根据分子量分离蛋白质 | |
| 应用 | SDS-PAGE | |
| 可选上样孔规格* | 小型胶：1, 9, 10, 12, 15, 17, 2D 孔, IPG 孔 中型胶：12+2, 20, 26 孔 | WedgeWell 楔形孔：10, 12, 15 17 孔（每孔上样量高达 2X） |
*并非所有浓度的预制胶都提供每种上样孔规格
Invitrogen Bis-Tris 蛋白预制胶的优势
锐利笔直的条带
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的中性 pH 缓冲液可提供清晰笔直的条带。电泳分离过程中，这类预制胶的工作 pH 值接近 7。而在 Laemmli 系统（Tris-甘氨酸）中，凝胶在碱性 pH 值（pH 约 9.5）下运行。在高 pH 值下，残留的未聚合丙烯酰胺可与待分离蛋白质的半胱氨酸和赖氨酸残基反应。这可能会影响下游分析，例如蛋白质印迹转印。在 NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris 预制胶的中性 pH 值下，这些反应比在 Tris-甘氨酸预制胶的碱性 pH 值下慢几个数量级，从而能获得更清晰锐利的条带和更高的分辨率。
NuPAGE Bis-Tris 预制胶和传统 tris-甘氨酸预制胶的蛋白质分离效果比较。下面列出的样品在（A）Invitrogen NuPAGE MES SDS 电泳缓冲液中的 NuPAGE 4–12％ Bis-Tris 凝胶体系上运行，或（B）在另一家制造商的 4–20％ tris-甘氨酸凝胶体系上运行。请注意 NuPAGE 蛋白预制胶中样品条带的分辨率更高。在另一制造商的凝胶中则观察到分辨不清的“模糊”条带，这是样品中某些二硫键重新氧化的结果，从而导致迁移率发生轻微变化。泳道1、6、7、10：Invitrogen Mark12 非预染蛋白质分子量标准；泳道 2：高蛋白上样量（4 个蛋白质，6 µg/蛋白）；泳道 3：宽范围分子量标准；泳道 4、5：大肠杆菌提取物；泳道 8：E-PAGE SeeBlue 预染蛋白质分子量标准；泳道 9：Invitrogen MultiMark 多色蛋白质分子量标准。
更好的样品完整性
样品前处理是成功进行蛋白质分析的关键步骤。在 100°C 下加热时，传统 Laemmli 型上样缓冲液的 pH 值从 6.8 变为 5.2。 已知较低的 pH 值可诱导天冬氨酰-脯氨酰（Asp-Pro）肽键裂解，从而导致蛋白质降解。通过维护 >7.0 的 pH 环境，InvitrogenNuPAGE LDS 上样缓冲液 和 Bolt LDS 上样缓冲液通过最小化 Asp-Pro 裂解来保持蛋白质完整性。如下所示，在整个电泳过程中，使用 Invitrogen NuPAGE 体系可保持样品完整性；用 Laemmli（Tris-甘氨酸）上样缓冲液制备的样品中可见蛋白质降解。Invitrogen NuPAGE 抗氧化剂电泳缓冲液添加剂可在电泳过程中最大程度地减少蛋白质氧化，并保持还原型蛋白条带清晰锐利。
出色的样本完整性。与使用 Laemmli（tris-甘氨酸）样品缓冲液（右）制备的样品相比，使用 NuPAGE Bis-Tris 预制胶体系（左）可在整个电泳过程中保持样品的完整性。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶具有高容量 WedgeWell 楔形上样孔
每个 Bolt 预制胶上独特的楔形上样孔可提供更高的上样量，因此您可以在每个孔中加入多达两倍的蛋白质样品。
| 上样孔数量 | 推荐上样体积 | 最大上样体积 | 最高蛋白上样量 |
|---|---|---|---|
| 10 孔 | 40 µL | 60 µL | 0.5 µg/条带 |
| 12 孔 | 30 µL | 45 µL | 0.4 µg/条带 |
| 15 孔 | 20 µL | 35 µL | 0.25 µg/条带 |
| 17 孔 | 15 µL | 30 µL | 0.2 µg/条带 |
即使在稀释样品中也可以检测蛋白质，或者测量低丰度蛋白质的表达。有了更多的上样空间，您不再需要担心样品溢出和蛋白质印迹上的孔间污染。无需使用特殊的凝胶上样枪头，上样操作也更加容易。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的高样品容量。(A) 在 Invitrogen Bolt 4–12% Bis-Tris Plus 10泳道中，间隔加入体积逐渐增加的荧光蛋白标准品（40 μL–70 μL）。(B) 在 Bio-Rad 的 4–20% 10 孔预制胶的泳道中，间隔加入相同的蛋白标准品（10 μL–40 μL）。可在空白泳道中观察到来自相邻孔中样品的信号，即样品溢出导致的孔间污染。
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶是预先制备好的聚丙烯酰胺凝胶，可在变性条件下的凝胶电泳中实现宽范围分子量蛋白的理想分离。Bis-Tris 凝胶体系提供了一个中性的 pH 环境，可最大程度地减少蛋白质修饰，获得更清晰锐利的条带，而避免出现典型的"微笑"条带。另外，分离低丰度蛋白质时，保持蛋白质完整性变得尤为重要。
NuPAGE Bis-Tris 蛋白预制胶提供小型胶和中型胶规格，Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶提供小型胶规格。NuPAGE Bis-Tris和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶都非常适用于蛋白质印迹分析，以及其他对蛋白质完整性和灵敏度要求很高的应用，比如蛋白质测序和质谱分析。Bolt Bis-Tris Plus 预制胶采用独特的 WedgeWell 楔形孔设计，使样品上样体积比其他凝胶高出 2x 倍。
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶的优势包括：
- 更出色的蛋白完整性—优化的样品前处理过程，完整保护您的蛋白质
- 更宽的蛋白质分离范围—选择合适的预制胶和电泳缓冲液体系有助于实现蛋白的高效分离
- 更短的电泳时间—只需 22-35 分钟即可实现蛋白分离
- 更长的凝胶保存时间—NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶在室温下分别可以保存至少 12 个月和 16 个月。
- Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的高容量孔—楔形孔使上样操作变得更容易（无需专门的移液吸头），并使得上样量可高达两倍。
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶适用于变性凝胶电泳应用。为了获取理想的电泳分离结果，我们推荐使用含有 SDS 的缓冲液。使用 MES SDS 电泳缓冲液进行凝胶电泳时，可以更好地分离较小的蛋白质（1-200 kDa），使用 MOPS SDS 电泳缓冲液进行凝胶电泳时，可以分离中等到高分子量的蛋白质（14-260 kDa）。
Bis-Tris 体系预制胶使用含有以下三种离子的 bis-tris 非连续缓冲液体系：
- 氯离子 (–) 来自凝胶缓冲液，并因其相对于体系中其他阴离子与阳极之间有更强的亲和力而作为前导离子。凝胶缓冲液离子有 bis-tris (+) 和 Cl (–) (pH 6.4)。
- MES 或 MOPS(–) 在电泳缓冲液中充当尾随离子。电泳缓冲液离子有 tris (+)、MOPS/MES (–) 以及十二烷基硫酸盐 (pH 7.3–7.7)。
Bis-Tris (+) 是凝胶缓冲液和电泳缓冲液中常见的离子。较低 pH 的凝胶缓冲液（pH 6.4）和电泳缓冲液（pH 7.3–7.7）的组合会导致电泳期间 7 的运行 pH 值显著降低。
让蛋白预制胶迎新套装即刻开启全新体验
蛋白预制胶迎新套装是首次使用 Invitrogen 蛋白预制胶的超值之选。蛋白预制胶迎新套装可提供多种凝胶体系和浓度选择，每一款迎新套装都包含小型预制胶、必备缓冲液，蛋白质分子量标准和小型胶电泳槽，相较于单独采购可极大节省成本。
NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶的性能经过优化
与传统的 tris-甘氨酸预制胶不同，NuPAGE Bis-Tris 和 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶采用 Bis-Tris HCl 缓冲（pH 6.4），工作 pH 约为 7.0。这种中性 pH 环境加上独特，温和的样品制备方案，意味着您的蛋白质样品始终处于温和的非酸性条件下，从而保留了蛋白质的完整性并最大程度地减少了蛋白质修饰。这有助于确保每次都能获得高灵敏度且准确的蛋白质印迹结果。
Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的灵敏度更高。使用 iBlot 2 转印设备，将 A431 细胞的总细胞提取物从 4–12% 的 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶和 4-20% 的 Tris-甘氨酸预制胶上转印到 NC 和 PVDF 膜上。用 100 ng/mL 人表皮生长因子（hEGF）处理细胞，以上调磷酸 EGF 受体的表达。细胞提取物的蛋白质上样量范围从 20 μg 到 1.2 μg。印迹在 iBind 蛋白免疫印迹处理系统中孵育，使用磷酸化 EGF 受体（Tyr1068）(1H12) 小鼠单克隆抗体的 1:200 稀释液和抗小鼠 HRP 二抗的 1:2,000 稀释液。
条带完整性
NuPAGE 和 Bolt 蛋白预制胶可通过中性 pH 凝胶体系来保持蛋白质完整性。这种体系使电泳过程中的蛋白质修饰最小化。
使用Bolt Bis-Tris Plus 预制胶的蛋白免疫印迹结果干净、清晰，展示出全长蛋白质的蛋白信号，而使用 Bio-Rad TGX 预制胶的蛋白免疫印迹结果则显示有多个低分子量的蛋白降解产物。在 Bolt Bis-Tris Plus 预制胶和 Bio-Rad TGX tris-甘氨酸预制胶上分析了与癌症有关的蛋白激酶（IKKϐ、EPHB3、HCK、MAPK14、FLT1 和 DDR2）。将纯化的激酶（每种 50 ng），MagicMark 蛋白质分子量标准和纯化的重组 GST 蛋白上样至 10 孔，4-12％ Bolt 预制胶和 10 孔，4-20％ Bio-Rad TGX 预制胶上。电泳分离样品并按照各制造商的说明书转印到 0.45-μm PVDF 膜上。使用 GST 抗体和 WesternBreeze 化学发光检测试剂进行印迹检测。
条带分辨率
NuPAGE 和 Bolt Bis-Tris Plus 蛋白预制胶相比 Bio-Rad 预制胶可提供更高的分辨率。通过延长 10%的凝胶分离距离，优化的凝胶体系和梯度浓度，您可以在Bolt 预制胶上看到更清晰的蛋白条带分离结果。在下方实验结果中，您可以看到胰岛素 B 链和胰岛素 A 链的两个单独的条带，它们具有相近的分子量。Bolt 预制胶上的蛋白质条带看起来更平直，整体条带的信号强度都很均匀，而 Bio-Rad 预制胶上的蛋白质条带不均匀且质量很差。
Bolt Bis-Tris 预制胶条带分辨率—与Bio-Rad 蛋白预制胶的染色结果比较。(A) 使用 Invitrogen SimplyBlue SafeStain 染料对 Bolt Bis-Tris 梯度胶进行染色。(B) 使用竞争对手的染料对 Bio-Rad 的 tris-甘氨酸梯度胶进行染色。(C) 放大两种预制胶的泳道 5 细节，显示胰岛素 B 链（3.5 kDa）和胰岛素 A 链（2.5 kDa）的分离效果。
使用蛋白凝胶选择手册为你的蛋白电泳实验查找最合适的小型或中型胶。
使用蛋白凝胶转换工具查找最合适的 Invitrogen 小型或中型胶，替代其他供应商的预制胶。
正在使用 Tris-甘氨酸或 Tricine 预制胶？使用下面的 NuPAGE 预制胶转换指南来查找合适的 NuPAGE 预制胶和相应的优化缓冲液。
NuPAGE 预制胶转换指南
| 如果您正在使用： | 推荐的 NuPAGE 预制胶： | 缓冲液体系 |
|---|---|---|
| Tris-甘氨酸预制胶 | ||
| 4% | NuPAGE 3-8% Tris-乙酸预制胶 | Tris-乙酸体系 |
| 6% | NuPAGE 3-8% Tris-乙酸预制胶 | Tris-乙酸体系 |
| 10% | NuPAGE 8% Bis-Tris 预制胶 | MOPS |
| NuPAGE 10% Bis-Tris 预制胶 | MOPS | |
| 12% | NuPAGE 10% Bis-Tris 预制胶 | MOPS |
| 14% | NuPAGE 12% Bis-Tris 预制胶 | MOPS |
| 16% | NuPAGE 12% Bis-Tris 预制胶 | MES |
| 18% | NuPAGE 12% Bis-Tris 预制胶 | MES |
| 4-12% | NuPAGE 3-8% Tris-乙酸预制胶 | Tris-乙酸体系 |
| NuPAGE 4-12% Bis-Tris 预制胶 | MOPS | |
| 4-20% | NuPAGE 4-12% Bis-Tris 预制胶 | MES |
| 8-16% | NuPAGE 4-12% Bis-Tris 预制胶 | MOPS |
| 10-20% | NuPAGE 12% Bis-Tris 预制胶 | MOPS |
| Tricine 预制胶 | ||
| 10% | NuPAGE 8% Bis-Tris 预制胶 | MES |
| NuPAGE 10% Bis-Tris 预制胶 | MES | |
| 16% | NuPAGE 4-12% Bis-Tris 预制胶 | MES |
| 10-20% | NuPAGE 4-12% Bis-Tris 预制胶 | MES |
使用指南
手册
资源
仅供科研使用，不可用于诊断目的。