StemFlex Medium for Robust Feeder-Free PSC Culture

追求尽善尽美

Gibco StemFlex 培养基支持无滋养层多能干细胞（PSC）的稳定扩增，经过优化可支持单细胞传代、基因编辑和重编程等新型应用。

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Gibco PSC 培养基依据 cGMP 医疗器械标准 21 CFR Part 820 生产

本页内容：

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在现代应用中性能卓越

基因编辑后恢复更快

StemFlex 培养基、Essential 8 Flex 培养基和 mTeSR1 培养基融合的中间百分比作为时间的函数显示在虚线图上。

图 1.StemFlex培养基可实现基因编辑后高达2倍速度的更快恢复。使用Gibco TrypLE Select试剂可在各种培养基配方中扩增的PSC消化成单个，并通过电穿孔递送Cas9蛋白/ HPRT向导RNA复合物。在无ROCK抑制剂的情况下接种100,000个活细胞/孔后可以发现StemFlex培养基可支持细胞从压力状态下达到最佳恢复效果。

在单细胞传代后实现卓越的克隆扩增

条形图中显示，当初始为1个细胞、3个细胞或5个细胞时，在StemFlex 培养基、Essential 8 Flex 培养基和 mTeSR1 培养基中表现出克隆扩增的孔中间百分数。

图 2.StemFlex培养基支持从流式分选物中回收的PSC，表明在无ROCK抑制剂的情况下进行单细胞传代后，克隆扩增提高了5倍。使用StemFlex培养基培养的PSC在rhLaminin-521底物上传代3次以上并使用TrypLE Select试剂进行单细胞消化处理。然后，将对它们进行流式细胞术分选以分离活的多能干细胞（Tra1-60+/碘化丙啶（PI）-阴性），并以1、3或5个细胞/孔接种在96孔板中。接种后，每3天为细胞更换新鲜培养基，并于第14天对融合度达到5%以上的孔通过IncuCyte ZOOM系统进行全孔成像进行评估。这些数据表明，StemFlex培养基在细胞从高应激事件恢复过程中具有卓越的性能。

改进的工作流程和稳定的克隆形成

StemFlex 培养基提供改进的工作流程和稳定的克隆形成，以便在体细胞重编程后形成易于挑选的克隆

图 3.StemFlex培养基提供改进的工作流程和稳定的克隆形成，以便在体细胞重编程后易于进行克隆选择。使用Invitrogen CytoTune-iPS 2.0 仙台病毒重编程试剂盒对人真皮成纤维细胞进行重编程。从第8天开始，每日更换mTeSR1培养基或每隔一日更换StemFlex培养基体系培养细胞（根据标准工作流程加入干细胞培养基）。（A）在StemFlex培养基体系中观察到稳定的克隆形成。（B）与每日更换mTeSR1培养基的方案相比，每日更换StemFlex培养基的方案可在三种供体细胞观察到改善的重编程效率。

有效支持 PSC 扩增和维持

来自 Gibco 品牌最新的无滋养层培养基,StemFlex 培养基,是唯一一款设计用于为当今干细胞研究中创新的应用和技术带来出色性能的培养基。StemFlex培养基独特的配方可为给多能干细胞培养造成挑战的应用如重编程、单细胞传代和基因编辑带来最大化的性能提升。除了核心性能的提升外，它还可带来更为灵活的换液方案（包括周末无需换液选项）以带来现代化的便捷性，并具有在基质和最合适特定应用的传代试剂之间进行切换的能力。StemFlex培养基以一种便捷的两组分试剂盒（450 mL基础培养基以及50 mL添加剂）形式提供，并且当在与Geltrex Matrix配合使用时，可提供一种用于人PSC无滋养层培养的经济高效、稳定的系统。StemFlex培养基可实现长期的无滋养层PSC培养，而无核型异常现象并支持其向三胚层分化的能力（图1和2）。

图 4.StemFlex培养基可为维持正常PSC属性且长期生长提供保障。培养物有正常的形态（左）；在使用周末无需换液计划进行20代培养后仍可观察到正常的核型（右）。

四组系列图片展示了DAPI染色（蓝色）、SOX1表达（红色），巢蛋白表达（绿色）以及三张图片的叠加组合。

图 5.三谱系分化潜能的确定。在使用周末无需换液计划进行20代培养后，在StemFlex培养基中扩增的iPSC细胞仍保持相应的能力可分化成（A)中胚层，表现为使用了PSC心肌细胞分化试剂盒进行分化之后TNNT2的表达，（B)内胚层，表现为使用了PSC定型内胚层诱导试剂盒后可见CXCR4+/PDGFRalpha_表型的出现；以及（C)外胚层,表现为在使用了PSC神经诱导培养基之后出现Sox1和巢蛋白的表达。

使用 StemFlex 培养基改进干细胞工作流程

一直以来，多能干细胞培养都需要每日换液以维持多能性。这种频繁的细胞处理给研究人员带来了更多的挑战，包括增加人为错误和污染概率，以及多人处理同一培养物可能造成的差异和污染增加。针对上述应用，为减轻使用传统培养体系带来的挑战，我们开发出了建议实验方案。但是，这些建议不太适合持续长期使用，因为它们可能会影响下游多能性。StemFlex培养基（和Gibco Essential 8 Flex培养基通过持续维持FGF2活性——保持多能性的关键因子——可实现真正无需周末换液的培养计划（图6-8）。

FGF2浓度比例作为时间的函数的折线图，展现了StemFlex培养基可延长FGF2的稳定性。

图 6.StemFlex培养基可更长久地维持多能性。StemFlex培养基可在37°C、5% CO2培养条件下，提供持久的FGF2稳定性，适用于弹性培养方案（包括无需周末换液选择），无需每日换液。

四组系列图片展示了 iPSC 不同染色的结果，SSEA4 表达（绿色），OCT4 表达（红色），DAPI 染色（蓝色）以及三张图片的重叠组合。

图 7.在无需周末换液的条件下能够长期维持多能性。使用StemFlex培养基培养的PSC在包被GelTrex 基质的孔中传代21次后，仍可维持自我更新因子的表达。使用Invitrogen PSC四标记物免疫细胞化学试剂盒对细胞的多能性标记物进行染色。

采用 StemFlex 培养基时推荐的无需周末换液 PSC培养计划示意图。

图 8.无需周末换液的推荐方案。与传统的 PSC 培养基不同，StemFlex 培养基无需每日换液，从而为 PSC 扩增和维持提供了一个真正的无需周末换液的方案。

推荐试剂

在 PSC 培养体系中使用的补充试剂（如基质和传代试剂）对细胞性能产生影响是很常见的。传统 PSC 培养基通常只兼容一种基质和传代方法，从而要么需要巨大的方案调整，要么产生不理想的结果。StemFlex 培养基具有三向使用灵活性，不仅允许您决定哪种基质和传代试剂最适合您的需求，还能实现灵活的换液方案。

表 1.灵活选择最佳基质和传代试剂。

成分产品最佳用途
基质Geltrex 无 LDEV 低生长因子基底膜基质替代 Matrigel 基质

PSC 扩增和维持的理想经济选择
玻连蛋白 (VTN-N) 截短型重组人源蛋白适合需要更高效、成分明确的基质的应用
重组人层粘连蛋白-521 (rhLaminin-521)推荐用于需要维持最高性能的高压力应用，包括基因编辑和单细胞传代
传代试剂Versene 溶液团块细胞传代
StemPro Accutase 细胞解离试剂2-3个细胞簇
TrypLE Select 酶，含或不含RevitaCell 添加剂单细胞传代

资源

仅供科研使用，不可用于诊断目的。