瞬时转染

在瞬时转染中，导入的核酸在细胞中存在的时间有限，且未整合到基因组中。因此，在细胞分裂过程中，瞬时转染的遗传物质不会传递至下一代，而是在环境因素影响下丢失或在细胞分裂过程中被稀释。但是，当所转染的遗传物质在细胞中保持高拷贝数期间会引起高水平的蛋白表达。

根据使用的构建体不同，通常可以在 1-7 天内检出瞬时表达的转基因，但一般在转染后 24-96 小时收获瞬时转染的细胞。基因产物分析可能需要分离 RNA 或蛋白进行酶活性检测或免疫检测。最佳时间段取决于细胞类型、研究目标、导入基因的特异性表达特性以及报告基因达到稳态所需的时间。不过，在数天内，大部分外源性 DNA 会在核酸酶作用下降解或被细胞分裂稀释；一周后便无法再检出。使用超螺旋质粒 DNA 进行瞬时转染的效率最高，这是因为其能被细胞更高效地摄取。还可使用 siRNA、miRNA、mRNA 甚至蛋白质进行瞬时转染，但与使用质粒 DNA 一样，这些大分子需要具有高质量以及相对较高的纯度（参见影响转染效率的因素）。转染的 DNA 易位到细胞核进行转录，而转染的 RNA 仍保留在胞质内，其可在转染 (mRNA) 后几分钟内表达。或与 mRNA 结合从而使靶基因（siRNA 和 miRNA）的表达沉默（参见RNA 转染指南）。

通过对适应悬浮培养的 HEK293细胞 和 CHO 细胞进行大量瞬时转染，已满足了获得大量重组蛋白的需求，而不必依赖于耗时费力的稳定细胞系开发过程。

哺乳动物细胞中瞬时蛋白表达的其他优势包括：

• 3-7 天内快速完成从克隆基因到大量蛋白表达的过程
• 获得经过完全翻译后修饰的活性哺乳动物蛋白
• 使用您现有的哺乳动物细胞培养设备以及摇瓶和水平摇床
• 从无血清细胞培养基中轻松纯化分泌的蛋白
• 从50多孔板扩大到 25 L 或更大容量的培养规模

我们可提供与瞬时蛋白生产完全兼容的所有必需材料，包括细胞培养基、适应悬浮培养的 CHO 和 HEK-293 细胞、载体、质粒纯化产品和转染试剂。对于希望在自己实验室建立哺乳动物细胞瞬时蛋白生产过程的研究人员，我们可提供：

• 入门试剂盒、Expi293 表达系统、FreeStyle MAX CHO 表达系统和 FreeStyle MAX 293 表达系统
• 关于获取所需实验室设备的技术网络讲座和指南
• 技术支持
• 实践培训课程
• 基于上述瞬时蛋白生产系统定制的蛋白生产服务