Search Thermo Fisher Scientific
Lipofectamine MessengerMAX
優れたmRNAトランスフェクション効率
InvitrogenのLipofectamine MessengerMAX mRNA Transfection Reagentをご紹介します。この試薬は神経細胞および初代細胞において、最大5倍のDNA試薬の効率を持つmRNAトランスフェクション試薬です。
- ニューロンおよび初代細胞のトランスフェクション効率が驚異的です
- ゲノム組み込みのリスクを伴うことなく、より迅速なタンパク質発現を実現します
- mRNA CRISPRを使用すると、切断効率が最大10倍に向上します
このページの内容：
ニューロンおよび初代細胞における優れたトランスフェクション効率
Lipofectamine MessengerMAX mRNA Transfection Reagentはニューロンや幅広い初代細胞において、驚くべきトランスフェクション効率が実現し、アプリケーションの成果を向上し、生物学的に関連性の高い研究を可能にします。これは、当社の新しい脂質ナノ粒子技術が、DNAで必要とされる核への侵入ステップを必要とせず、可能な限り多くのmRNAを導入できるように最適化されているからです。
図1.Lipofectamine MessengerMAXは、初代細胞（新鮮な単離されたマウス皮質ニューロン、BJ線維芽細胞、および初代ケラチノサイト）において、主要なDNA導入試薬および主要なmRNA導入試薬を上回る性能を有しています。Lipofectamine MessengerMAXと主要なmRNA導入試薬を使用して、24ウェルフォーマットでGFP mRNA（500 ng／ウェル）を導入しました。主要なDNA導入試薬を使用してGFP DNA（500 ng／ウェル）を導入し、トランスフェクションから24時間後にGFPを分析しました。
図2.Lipofectamine MessengerMAXは、さまざまな幹細胞（Gibco iPSC、H9 ESC、mESC、hNSC）において、主要なDNA導入試薬および主要なmRNA導入試薬を上回る性能を発揮します。Lipofectamine MessengerMAXおよび主要なmRNA導入試薬を使用して、24ウェルフォーマットでGFP mRNA（250 ng／ウェル）を導入しました。主要なDNA導入試薬を使用してGFP DNA（250 ng／ウェル）を導入し、トランスフェクションから24時間後にGFPを分析しました。
図3.Lipofectamine MessengerMAXは、トランスフェクションが非常に困難なさまざまな細胞株（bEnd.3、SH-SY5Y、SK-N-SH、A431、RAW 264.7、およびHT29）において、主要なDNA導入試薬および主要なmRNA導入試薬よりも優れています。Lipofectamine MessengerMAXおよび主要なmRNA導入試薬を使用して、24ウェルフォーマットでGFP mRNA（500 ng／ウェル）で導入しました。主要なDNA導入試薬を使用してGFP DNA（500 ng／ウェル）を導入し、トランスフェクションから24時間後にGFPを分析しました。
図1.Lipofectamine MessengerMAXは、初代細胞（新鮮な単離されたマウス皮質ニューロン、BJ線維芽細胞、および初代ケラチノサイト）において、主要なDNA導入試薬および主要なmRNA導入試薬を上回る性能を有しています。Lipofectamine MessengerMAXと主要なmRNA導入試薬を使用して、24ウェルフォーマットでGFP mRNA（500 ng／ウェル）を導入しました。主要なDNA導入試薬を使用してGFP DNA（500 ng／ウェル）を導入し、トランスフェクションから24時間後にGFPを分析しました。
図2.Lipofectamine MessengerMAXは、さまざまな幹細胞（Gibco iPSC、H9 ESC、mESC、hNSC）において、主要なDNA導入試薬および主要なmRNA導入試薬を上回る性能を発揮します。Lipofectamine MessengerMAXおよび主要なmRNA導入試薬を使用して、24ウェルフォーマットでGFP mRNA（250 ng／ウェル）を導入しました。主要なDNA導入試薬を使用してGFP DNA（250 ng／ウェル）を導入し、トランスフェクションから24時間後にGFPを分析しました。
図3.Lipofectamine MessengerMAXは、トランスフェクションが非常に困難なさまざまな細胞株（bEnd.3、SH-SY5Y、SK-N-SH、A431、RAW 264.7、およびHT29）において、主要なDNA導入試薬および主要なmRNA導入試薬よりも優れています。Lipofectamine MessengerMAXおよび主要なmRNA導入試薬を使用して、24ウェルフォーマットでGFP mRNA（500 ng／ウェル）で導入しました。主要なDNA導入試薬を使用してGFP DNA（500 ng／ウェル）を導入し、トランスフェクションから24時間後にGFPを分析しました。
ゲノム組み込みのリスクを伴うことなく、より迅速なタンパク質発現を実現します
Lipofectamine MessengerMAXを用いたmRNAのトランスフェクションは、一般的に、トランスフェクションした細胞間で発現の均一性が高く、より迅速なタンパク質発現を実現します。さらに、mRNAの導入は核導入が不要で（ステップ4）、ゲノム組み込みのリスクを排除し、トランスフェクション効率は細胞周期に依存しません。
図4.DNAとmRNAのトランスフェクション。
CRISPR mRNAを使用すると、切断効率が最大10倍に向上します
Lipofectamine MessengerMAX試薬は、効率の高いトランスフェクションによりInvitrogen GeneArt CRISPR Nuclease mRNAとの切断および組換えの可能性を高め、CRISPRによる遺伝子改変の効率を最大化し、下流工程を簡素化します。
図5.12ウェルフォーマットのGibco iPS細胞のHPRT遺伝子座を標的とするさまざまなInvitrogen GeneArt CRISPRフォーマットの切断効率。Invitrogen Lipofectamine 3000試薬を用いて、CRISPRヌクレアーゼall-in oneプラスミドDNAを導入しました。Lipofectamine MessengerMAXおよび2種類の主要なmRNA導入試薬を使用して、all-RNA CRISPRフォーマット（Cas9 mRNA + IVT gRNA）を導入しました。切断効率は、トランスフェクションから72時間後にInvitrogen GeneArt Genomic Cleavage Detection Kitを使用して測定しました。
始めるのは1-2-3のように簡単です！
DNAテンプレートを調製します
T7プロモーターでDNAテンプレートを調製します。Invitrogen Gateway pcDNA-DEST40ベクターを用いて遺伝子をクローニングするか、PCRおよびT7含有プライマーを用いて増幅するかを選択できます。
mRNAを生成します
トランスフェクション用のmRNAを生成するために、Invitrogen mESSAGE mMACHine T7 Ultra Transcription Kitを使用してテンプレートDNAを転写します。
シンプルなLipofectamine MessengerMAXトランスフェクションプロトコルを使用して、mRNAをトランスフェクトします。Lipofectamine MessengerMAXプロトコルをダウンロード
DNAテンプレートを調製します
T7プロモーターでDNAテンプレートを調製します。Invitrogen Gateway pcDNA-DEST40ベクターを用いて遺伝子をクローニングするか、PCRおよびT7含有プライマーを用いて増幅するかを選択できます。
mRNAを生成します
トランスフェクション用のmRNAを生成するために、Invitrogen mESSAGE mMACHine T7 Ultra Transcription Kitを使用してテンプレートDNAを転写します。
シンプルなLipofectamine MessengerMAXトランスフェクションプロトコルを使用して、mRNAをトランスフェクトします。Lipofectamine MessengerMAXプロトコルをダウンロード
Lipofectamine MessengerMAX試薬で試験した細胞
| 細胞種 | Lipofectamine MessengerMAXトランスフェクション効率（%） |
|---|---|
| MDA-MB-231 |  |
| A431 |  |
| A549 | |
| bEnd.3 |  |
| BJ線維芽細胞 | |
| H9 ESC | |
| 初代肝細胞 | |
| Hep G2 | |
| HT-29 | |
| iPSCs | |
| 初代ケラチノサイト | |
| L929 | |
| LNCaP | |
| hNSC | |
| MCF7 | |
| Neuro-2a | |
| 初代神経細胞 | |
| RAW 264.7 | |
| RBL |  |
| SK-N-SH | |
| SH-SY5Y | |
トランスフェクション効率（%）：<30% 30～50% 51～79% >80%
ビデオを視聴し、mRNAの操作に関するよくある質問に答えてください
mRNAは不安定だと思いますか？
mRNAは調製が難しいと思われますか？
mRNAは時間がかかると思われますか？
mRNAは高価だと思いますか？
mRNAトランスフェクションの基礎
Ordering information
mRNA転写産物を生成するために、以下の転写キットをお勧めします。
トランスフェクション結果の妥当性を確保するために、TriLink Biotechnologies（EGFP mRNAなど）を含むさまざまなサードパーティベンダーから入手可能なポジティブコントロールmRNAの使用を強く推奨します。
Sustainable packaging
Packaging must protect the product inside—but that doesn’t have to mean sacrificing sustainability. Lipofectamine products are shipped at ambient temperature, diverting 24,000 ft3 of Expanded Polystyrene (EPS) coolers from landfills annually. We reduce the carbon footprint from packaging and shipping these products by 80 tons (CO2 equivalents).
Learn more about sustainable solutions
Download the green fact sheet
リソース
研究用途にのみ使用できます。診断目的には使用できません。