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ホットスタート技術はPCRにどのように有効ですか？
非特異的増幅は、PCRの性能に大きな影響を与える可能性がある主な問題の一つです。その結果、ターゲットアンプリコンの収量が低く、ターゲットアンプリコンの検出感度が低下し、解釈の結果が信頼できず、下流アプリケーションの有効性が低下します。
非特異的増幅の一般的な原因は、DNAポリメラーゼによるミスプライミング配列の伸長とプライマーダイマーの形成です。非特異的増幅を回避するための1つの回避策は、氷上でPCR反応混合物を調製することです。温度が低いとDNAポリメラーゼの活性が低下しますが、PCRが開始される前に望ましくない生成物が合成される可能性があります。もう1つの解決策は、ホットスタートDNAポリメラーゼを使用することです。ホットスタート修飾は、室温でのDNAポリメラーゼの活性を阻害し、偽のバンドによる非特異的増幅を防ぎます。
ホットスタート技術の利点は何ですか？
- テンプレート配列へのプライマーの結合が少ない場合に、プライマーの伸長を防ぎます （誤プライミング）
- プライマーの相互結合の伸長を防止（プライマーダイマーの形成） 反応セットアップ中
- 目的のターゲットフラグメントの感度と収量を向上させます
- ハイスループットプラットフォームまたは自動リキッドハンドリングプラットフォームASでPCRセットアップを可能にします。特異性を損なうことなく、室温で安定した反応が得られます
hot-startテクノロジーの仕組み
ホットスタートPCRの方法では、化学グループ、抗体、AffiBody分子、またはアプタマーなどの酵素修飾子を使用します。最も一般的に使用される方法の2つは、化学修飾と抗体です。これらはすべて室温でポリメラーゼ活性を阻害しますが、いくつかの重要な違いがあります。
| Hot-startテクノロジー | 利点 | 考慮事項 |
|---|---|---|
| 化学的 ポリメラーゼは化学基と共有結合し、室温で酵素活性をブロックします。 例：AmpliTaq Gold DNA Polymerase |
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| 抗体 ポリメラーゼは、活性部位の抗体によって結合され、室温で酵素活性をブロックします。 例：DreamTaq Hot Start DNA Polymerase、Platinum II Taq DNA Polymerase、Platinum SuperFi II DNA Polymerase |
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| AffiBody分子 ポリメラーゼは、活性部位のAffiBody分子（α–helical ptptideペプチド）によって結合され、室温で酵素活性をブロックします。 例：Phire Hot Start II DNA Polymerase、Phusion Hot Start II DNA Polymerase |
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| アプタマー ポリメラーゼは、活性部位のアプタマー（オリゴヌクレオチド）によって結合され、室温で酵素活性をブロックします。 |
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リソース
分子生物学リソースライブラリのビデオ、e-learning、記事、およびツールをご覧ください ›
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.