HILIC 固定相 | Thermo Fisher Scientific

HILIC で使用される固定相は多種多様であり、HILIC カラムに相互互換性があるという認識は誤りです。アプリケーションに最適な HILIC 固定相を選択するためには、特定のカラム-溶媒-検体システムに関連する可能性のある HILIC 保持機構を理解しなければなりません。

HILIC 固定相は以下の要素で区別されます。

親水性の程度
親水基-疎水基に対する分離選択性
位置異性体および配座異性体に対する分離選択性
静電相互作用の程度
固定相の酸基特性

カラムの選択

極性検体の最適な保持力を確保するには、検体の log P または log D 値を HILIC 相の極性度と一致させることが重要です。このチャートは、Thermo Scientific HILIC カラムの相対親水性とイオン交換特性を示したものであり、固定相選択の予備ガイドとして使用できます。

HILIC の選択性

固定相特性は、2D レーダーグラフで図式化できます。カラムの選択性をシンプルなビジュアルで評価および比較できます。レーダープロットの各軸は、以下のパラメータのいずれかを表します。

α (CH2) – 疎水性の程度
α (OH) – 親水性の程度
α (V/A) – 配置異性体の分離要因
α (2dG/3dG) – 位置異性体の分離要因
α (AX) – 陰イオン交換相互作用の程度
α (CX) – 陽イオン交換相互作用の程度
α (Tb/Tp) – 固定相の酸基特性
k U – 絶対保持

注: 選択性値の 1 は分離なしを意味します（k1= k2 のとき、α= k2/k1、α= 1 のため）。

Syncronis HILIC

Thermo Scientific™ Syncronis™ HILIC カラムは、電荷の平衡により、荷電化合物と中性化合物の保持力を向上させます。この相で優れたピーク形状と感度を発揮します。

Syncronis HILIC 固定相は、スルホベタイン型の両性イオン官能基を運び、高純度、高比表面積のシリカと半量体的に結合します。スルホベタイン両性イオンには、正（第 4 級アンモニウム）の基および負（スルホン酸）の基が 1:1 の割合で存在するため、正味表面電荷はゼロになります。相殺された静電力により、検体との二次静電相互作用が弱くなるため、バッファーの濃度を低くしてこうした相互作用を防ぐ必要があります。この相の電荷密度は pH に応じて異なります。移動相 pH の最適化は検体によってのみ決まります。

LC-MS/MS によるプラズマ内のエドロホニウム、ネオスチグミン、ピリドスチグミンの分析

カラム: Syncronis HILIC、1.7 µm、100 mm x 2.1 mm
ガードカラム：UHPLC フィルター／ホルダー
移動相 A:アセトニトリル／ギ酸アンモニウム、100 mM、pH 3.3 (90:10 v/v)
流速：500 µL／分
カラム温度：25°C
圧力：210 bar
注入量：2 µL
検出：MS、+ESI 275 °C、3.0 kV

Accucore 150-Amide-HILIC

細孔径 150 Å のソリッドコア粒子に結合したアミド相
HILIC モードで幅広い親水性検体を保持
グリカン（糖鎖）などの親水性生体分子用に推奨

アミド結合相は、固定相と検体の間に強力な水素結合による相互作用をもたらすため、他の HILIC 相にはない選択性が得られます。ソリッドコア粒子の大型細孔径と組み合わせた Thermo Scientific™ Accucore™ 150 アミド HILIC カラムは、糖質やペプチドを含むさまざまな親水性分子の分離に適しています。したがって、Accucore 150 アミド HILIC は、グリカンの分離に最適です。

2-AB 標識付きデキストランラダー

カラム: Accucore 150 アミド HILIC、2.6 µm、100 x 2.1 mm
部品番号：16726-102130
移動相：A) アセトニトリル B) 50 mM ギ酸アンモニウム（pH 4.5）
流速：500 µL／分
背圧：110 bar
温度：60 °C
注入：2 µL、5 µL
検出：FLEra 300 nm、Era 420 nm
サンプル：2 アミノベンズアミド標識付きデキストランラダー

グラジエント

時間（分）B％
0	20
40	50
45	50
45.5	20
50	20

（A）2 µL サンプル注入、11 グリカンを分離
（B）5 µL サンプル注入、グラジエント上昇の後半部分を拡大。さらに 10 グリカンを検出。

Accucore 尿素 HILIC

ソリッドコア粒子に結合した尿素相は、極性検体に対して固有の選択性を提供します。Thermo Scientific™ Accucore™ 尿素 HILIC カラムは、荷電化合物と中性化合物に良好な保持力を提供します。

鎮痛剤化合物

カラム：Accucore 尿素 HILIC、2.6 µm、100 x 2.1 mm
移動相：A）水 B）アセトニトリル C）100 mM
酢酸アンモニウムは pH 4.9 に調整。
組成 10：80：10、A：B：C
流速：300 µL／分
分析時間：2 分温度：35 °C
注入：2 µL ～ 10 µL パーシャルループモード
注入洗浄溶媒：水：アセトニトリル 20：80
検出：UV 230 nm
背圧：71 bar

Acclaim HILIC-10

Thermo Scientific™ Acclaim™ HILIC-10 カラムは、独自の親水性層で共有結合的に改良した高純度の完全多孔質シリカをベースにしています。この素材に見られる陽イオン交換特性は、残留脱プロトン化シラノール基の存在によるものです（特性評価試験で使用する移動相 pH 条件において）。Acclaim HILIC-10 は、荷電化合物と中性化合物に良好な保持力を提供します。

この相はデュアルモード保持動作を示しており、移動相でのアセトニトリルの含有による「U 字型」の保持プロファイルを確認できます。アセトニトリルの低レベルと高レベル（それぞれ、RPLC モードと HILIC モード）の両方で保持力の向上が見られます。

医薬品

カラム：Acclaim HILIC-10、3 µm、150 mm x 4.6 mm
移動相：90/10 v/v CH₃CN/10 mM（合計）NH₄OAc（pH 5）
流速：1 mL／分
注入量：2 µL
温度：30 ºC
検出：UV 230 nm
サンプル：1）アセトアミノフェン（0.1 mg/mL）2）サリチル酸（0.1) 3) アスピリン（0.2）4）ペニシリン G（0.1) 5）メトホルミン（0.1）

Hypersil GOLD HILIC

Thermo Scientific™ Hypersil GOLD™ HILIC カラムは、酸性極性化合物または中性極性化合物の分析にお勧めします。

カラム：Hypersil GOLD HILIC、5 µm、150 x 4.6 mm
移動相：50 nM 酢酸アンモニウムバッファー（pH 5）／アセトニトリル (10:90)
流速：0.4 mL／分
温度：30 °C
検出：205 nm
注入量：10 µL
サンプル：1）シヌアル酸 2）メラミン

Hypersil GOLD シリカ

高純度の不活性シリカ
優れたピーク形状と感度

Thermo Scientific™ Hypersil GOLD™ シリカカラムは、すべての Hypersil GOLD 相の基盤であるだけでなく、HILIC および順相条件での幅広いアプリケーションに対応します。この素材に見られる陽イオン交換特性は、脱プロトン化シラノール基の存在によるものです（特性評価試験で使用する移動相 pH 条件において）。

Hypersil GOLD シリカは、塩基性化合物または中性極性化合物の分析にお勧めします。

Syncronis シリカ

Thermo Scientific™ Syncronis™ シリカカラムは、高純度、高比表面積のシリカを提供します。

HILIC および順相モードでの中程度極性の酸または中性化合物のクロマトグラフィーに適した、強力で効率的なツールとして機能します。この素材に見られる陽イオン交換特性は、脱プロトン化シラノール基の存在によるものです（特性評価試験で使用する移動相 pH 条件において）。

Accucore HILIC

この素材に見られる陽イオン交換特性は、脱プロトン化シラノール基の存在によるものです（特性評価試験で使用する移動相 pH 条件において）。

Thermo Scientific™ Accucore™ HILIC カラムは、塩基性化合物または中性極性化合物の分析にお勧めします。

カテコールアミン

カラム：Accucore HILIC、2.6 µm、50 x 2.1 mm
移動相：85:15 (v/v) アセトニトリル／100 mm ギ酸アンモニウム (pH 3.2)
流速：2 mL／分
温度：40 °C
検出：UV 280 nm
注入量：5 µL
背圧：157 bar
検体：1）カテコール 2）5-HIAA 3）DOPAC 4）セロトニン 5）L-チロシン 6）ドーパミン 7）L-DOPA

HILIC Resource Library

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