Protein Synthesis and Degradation Assays

タンパク質の産生および分解に関与する複数の異なるメカニズムは細胞内で共に機能してバランスや恒常性を維持します。新しく合成されたタンパク質を空間的および時間的に解析することは、タンパク質平衡や疾患等の実験モデルにおけるその変化について研究する手法の一つです。Click-iT® Plusテクノロジーは一連の蛍光標識により新生タンパク質を標識する方法と、パルスチェイスタイプの実験による合成および分解を継時的に分析する手法を提供します。蛍光マーカーで標識されたタンパク質のオートファジー経路を追跡し、LC3B、p62または他の自己消化マーカーと共にマルチプレックス化することで、タンパク質分解プロセスを調べることができます。

Click-iT®テクノロジーはグリコシル化や脂肪酸付加などのタンパク質修飾の研究にも用いることができます。一連の蛍光標識と反応条件の選択により、蛍光タンパク質などの他の細胞検出手法と新生タンパク質ラベルのマルチプレックス化が可能となります。

タンパク質の恒常性研究用のClick-iT® HPGキット

Click-iT® HPG Alexa Fluor®タンパク質合成アッセイキットは、蛍光顕微鏡法やハイコンテントイメージングまたはフローサイトメトリーを用いて迅速かつ高感度で新生タンパク質合成を検出する非毒性、非放射性の方法を実現します。L-ホモプロパルギルグリシン(HPG)はアルキン部分を含むメチオニンのアミノ酸アナログであり、培養細胞に供給するとタンパク質合成の過程でタンパク質に取り込まれます。Alexa Fluor®アジドを添加することで、蛍光アジドとアルキンの化学選択的"Click"反応が生じ、イメージングベースの分析による修飾タンパク質の検出が可能になります。

  • 培養細胞用の最適化
  • タンパク質合成の定量的測定
  • Click-iT® AHAによるマルチプレックス化

新生タンパク質合成における違いを空間的または時間的に測定するために、Click-iT® HPG Alexa Fluor® 488タンパク質合成アッセイキットをAlexa Fluor® 594アルキンで標識したClick-iT® AHAと同時に使用することができます。

Click-iT-HPG-AF488---Figure-1

Click-iT® HPGを用いて、構造的に関連性のない分子によるタンパク質合成の抑制をモニター。 2種類の薬物を3種類の細胞に暴露しClick-iT® HPG Alexa Fluor® 488タンパク質合成アッセイキットを用いて用量依存的なシグナルの減少を測定した。


迅速かつ高感度な検出用のClick-iT® OPP

Click-iT® Plus OPP Alexa Fluor® タンパク質合成アッセイキットは、蛍光顕微鏡法やハイコンテントイメージングまたはフローサイトメトリーを用いて迅速かつ高感度でタンパク質合成を検出する非放射性の方法を実現します。このアッセイでは、メチオニン含有完全培地で新たに翻訳されたタンパク質にO-プロパルギル-プロマイシン(OPP)が効率的に取り込まれ、迅速かつ高特異的な穏やかなClick反応において高輝度かつ光安定性のあるAlexa Fluor®色素により蛍光標識されます。

  • 完全培地で使用可能
  • 蛍光タンパク質からのシグナルを保持します。
  • in vivoでのラベリングに適しています。
Click-iT_Plus_OPP_multiplexed

Click-iT® Plus OPP Alexa Fluor® 647タンパク質合成アッセイキットを新生タンパク質合成の標識に用いました(核内に青い斑点状蛍光として認められました)。 Talin-GFP融合タンパク質は緑色、F-アクチン染色 は赤色に見えます。


Click-iT® AHAキットおよびツール

疾患、薬物処理、または環境変化により新たに合成されたタンパク質またはタンパク質発現の変化を検出して特徴づけることは、細胞毒性測定において重要なパラメーターです。Click-iT® AHAテクノロジーは、蛍光顕微鏡法、フローサイトメトリー、およびハイコンテントイメージング(HCS)を用いて新生タンパク質合成を検出するための迅速かつ高感度な非毒性、非放射性の方法を実現します。Click-iT® AHAは新生タンパク質の回収に用いることができ、また 電気泳動ゲルおよびウェスタンブロットでのタンパク質分析検出キットとともにも用いることができます。

  • HCS用の最適化キット
  • 複数のプラットフォーム用のフレキシブルツール
  • Click-iT® HPGによるマルチプレックス化
dose-response

デュプリケートで実施された用量応答曲線 U2-OS細胞をL-メチオニン不含培地および50μM Click-iT® AHA 中、アニソマイシン(17pM~1μM)、シクロヘキシミド(85 pM~5μM)またはピューロマイシン(1.7nM~100μM)で30分間処理した。 細胞を洗浄、固定、浸透処理し、新生タンパク質合成をAlexa Fluor® アルキンを用いたクリックケミストリーによって検出しました。 イメージングと分析はThermo Fisher Scientific Cellomics® ArrayScan® VTI細胞イメージアナライザーを使用して行いました。


翻訳後修飾のトラッキング

新生タンパク質をラベル化するClick-iT®ツールには、脂肪酸付加やグリコシル化などの一連の翻訳後修飾を検出するための標識が含まれます。これらのアジド含有生体分子を細胞または動物に供給し、タンパク質の中へアクティブに取り込ませます。
タンパク質およびグリカンをラベル化するためのClick-iT®ツールについてはこちらをご覧下さい。

生体分子には標準的Click 反応の触媒に用いられる銅の量に影響されるものもあるので、検出手法に選択性を提供します。特に、GFPおよびR-PEなどのタンパク質は高銅濃度環境下で蛍光の減少を示し、ファロイジンは結合が損なわれます。Click-iT® Plus検出試薬により、蛍光タンパク質のシグナルを保持するとともに、EdU反応を引き起こすために、銅の濃度を最適化することができます。
Click-iT®検出ツールについてはこちらをご覧下さい

Tetrahymena_pyriformis_mouse_anti_beta_tubulin_monoclonal_antibody01

Click-iT® GalNAz糖タンパク質標識化試薬を用いた<283>テトラヒメナ(Tetrahymena pyriformis) の染色 Image-iT™ Fixation/Permeabilization キットを使用した固定浸透処理に続き、EdU-含有DNAをAlexa Fluor® 488 アジド、さらにGalNAz-含有細胞成分をAlexa Fluor® 555 alkyneでラベリングした。

穏やかなClickケミストリープロトコールは細胞エピトープを破壊せず、抗体による検出および一般的な細胞または組織染色方法と互換性があります。

タンパク質合成用キット(選択ガイド)

製品Click-iT® HPG Alexa Fluor® 488 タンパク質合成用キット Click-iT® HPG Alexa Fluor® 594 タンパク質合成用キットClick-iT® AHA Alexa Fluor® 488タンパク質合成HCS アッセイキットClick-iT® AHA Alexa Fluor® 594タンパク質合成HCS アッセイキットClick-iT® AHA Alexa Fluor® 647タンパク質合成HCS アッセイキット
ターゲット
新生タンパク質合成
リードアウト
タンパク質は合成過程で「Click」ケミストリーをによる蛍光標識のためにタグ付けしました。
蛍光標識Alexa Fluor® 488Alexa Fluor® 594Alexa Fluor® 488Alexa Fluor® 594 Alexa Fluor® 647
標準フィルターセットFITCテキサスレッド®FITCTexas Red ®Cy®5
Ex (励起波長)/Em (蛍光波長) (nm)495/519555/565590/617650/668495/519
シグナル対ノイズ比five 

starsfive starsfive starsfive starsfive stars
光安定性four starsfive starsfour starsfive starsfive stars
マルチプレキシング抗体による検出や一般の細胞または組織染色法と組み合わせて使用可能蛍光タンパク質からのシグナルを保持、In Vivoでのラベリングに適する。
サンプルタイプ培養細胞用に最適化非洗浄プロトコール;培地に試薬を直接添加できます。
フォーマットカバースリップ25枚/プレート2枚カバースリップ25枚/プレート2枚カバースリップ25枚/プレート2枚カバースリップ25枚/プレート2枚カバースリップ25枚/プレート2枚
カタログ 番号今すぐ注文する製品ページへ製品ページへ製品ページへ製品ページへ
ターゲット名称タグサイズカタログNo.
新生タンパク質Click-iT® AHA (L-アジドホモアラニン)アジド5 mgC10102
 Click-iT® HPG (L-アジドホモアラニン)アルキン5 mgC10186
 OPP (O-プロパルギル-プロマイシン)アルキン5mgC10459
ファルネシル化タンパク質Click-iT® ファルネシルアルコール、アジドアジド5 mgC10248
ゲラニルゲラニル化タンパク質Click-iT®ゲラニルゲラニルアルコールアジド5 mgC10249
フコシル化グリカンClick-iT®フコースアルキンアルキン5 mgC10264
パルミチル酸化タンパク質Click-iT® パルミチン酸、アジドアジド1 mgC10265
ミリストイル化タンパク質Click-iT® ミリスチン酸、アジドアジド1 mgC10268
O結合糖タンパク質Click-iT® GalNAz (テトラアセチル N-アジドアセチルガラクトサミン)アジド1 eachC33365
シアリン酸修飾糖タンパク質Click-iT® ManNAz (テトラアセチル N-アジドアセチルマノサミン)アジド1 eachC33366
O-GlcNAz-modified glycoproteinsClick-iT® GlcNAz (テトラアセチル N-アジドアセチルグルコサミン)アジド1 eachC33367
製品Click-iT® AHA Alexa Fluor® 488タンパク質合成HCS アッセイキット
標的新生タンパク質合成
リードアウト"Click"ケミストリーを用いる蛍光ラベリングのための合成過程で、タンパク質をタグ付けしました。
蛍光標識Alexa Fluor® 488
標準フィルターセットFITC
Ex (励起波長)/Em (蛍光放射波長) (nm)495/519
シグナル/ノイズ
光安定性four stars
マルチプレキシング抗体による検出および一般的な細胞または組織染色法との互換性
サンプルタイプHCSアッセイへの最適化
フォーマットプレート2枚
カタログ 番号ご注文はこちら
製品アジド修飾タンパク質をClickケミストリーにより回収するためのClick-iT®タンパク質エンリッチメントキット
標的新生タンパク質合成
リードアウト"Click"ケミストリーを用いて回収するための合成過程で、タンパク質をタグ付けしました。
フォーマットスピンカラム
カタログ 番号C10416

穏やかなClickケミストリープロトコールは細胞エピトープを破壊せず、抗体による検出および一般的な細胞または組織染色方法と互換性があります。

タンパク質合成用キット(選択ガイド)

製品Click-iT® HPG Alexa Fluor® 488 タンパク質合成用キット Click-iT® HPG Alexa Fluor® 594 タンパク質合成用キットClick-iT® AHA Alexa Fluor® 488タンパク質合成HCS アッセイキットClick-iT® AHA Alexa Fluor® 594タンパク質合成HCS アッセイキットClick-iT® AHA Alexa Fluor® 647タンパク質合成HCS アッセイキット
ターゲット
新生タンパク質合成
リードアウト
タンパク質は合成過程で「Click」ケミストリーをによる蛍光標識のためにタグ付けしました。
蛍光標識Alexa Fluor® 488Alexa Fluor® 594Alexa Fluor® 488Alexa Fluor® 594 Alexa Fluor® 647
標準フィルターセットFITCテキサスレッド®FITCTexas Red ®Cy®5
Ex (励起波長)/Em (蛍光波長) (nm)495/519555/565590/617650/668495/519
シグナル対ノイズ比five 

starsfive starsfive starsfive starsfive stars
光安定性four starsfive starsfour starsfive starsfive stars
マルチプレキシング抗体による検出や一般の細胞または組織染色法と組み合わせて使用可能蛍光タンパク質からのシグナルを保持、In Vivoでのラベリングに適する。
サンプルタイプ培養細胞用に最適化非洗浄プロトコール;培地に試薬を直接添加できます。
フォーマットカバースリップ25枚/プレート2枚カバースリップ25枚/プレート2枚カバースリップ25枚/プレート2枚カバースリップ25枚/プレート2枚カバースリップ25枚/プレート2枚
カタログ 番号今すぐ注文する製品ページへ製品ページへ製品ページへ製品ページへ
ターゲット名称タグサイズカタログNo.
新生タンパク質Click-iT® AHA (L-アジドホモアラニン)アジド5 mgC10102
 Click-iT® HPG (L-アジドホモアラニン)アルキン5 mgC10186
 OPP (O-プロパルギル-プロマイシン)アルキン5mgC10459
ファルネシル化タンパク質Click-iT® ファルネシルアルコール、アジドアジド5 mgC10248
ゲラニルゲラニル化タンパク質Click-iT®ゲラニルゲラニルアルコールアジド5 mgC10249
フコシル化グリカンClick-iT®フコースアルキンアルキン5 mgC10264
パルミチル酸化タンパク質Click-iT® パルミチン酸、アジドアジド1 mgC10265
ミリストイル化タンパク質Click-iT® ミリスチン酸、アジドアジド1 mgC10268
O結合糖タンパク質Click-iT® GalNAz (テトラアセチル N-アジドアセチルガラクトサミン)アジド1 eachC33365
シアリン酸修飾糖タンパク質Click-iT® ManNAz (テトラアセチル N-アジドアセチルマノサミン)アジド1 eachC33366
O-GlcNAz-modified glycoproteinsClick-iT® GlcNAz (テトラアセチル N-アジドアセチルグルコサミン)アジド1 eachC33367
製品Click-iT® AHA Alexa Fluor® 488タンパク質合成HCS アッセイキット
標的新生タンパク質合成
リードアウト"Click"ケミストリーを用いる蛍光ラベリングのための合成過程で、タンパク質をタグ付けしました。
蛍光標識Alexa Fluor® 488
標準フィルターセットFITC
Ex (励起波長)/Em (蛍光放射波長) (nm)495/519
シグナル/ノイズ
光安定性four stars
マルチプレキシング抗体による検出および一般的な細胞または組織染色法との互換性
サンプルタイプHCSアッセイへの最適化
フォーマットプレート2枚
カタログ 番号ご注文はこちら
製品アジド修飾タンパク質をClickケミストリーにより回収するためのClick-iT®タンパク質エンリッチメントキット
標的新生タンパク質合成
リードアウト"Click"ケミストリーを用いて回収するための合成過程で、タンパク質をタグ付けしました。
フォーマットスピンカラム
カタログ 番号C10416

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.