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タンパク質の産生および分解に関与する複数の異なるメカニズムは細胞内で共に機能してバランスや恒常性を維持します。新しく合成されたタンパク質を空間的および時間的に解析することは、タンパク質平衡や疾患等の実験モデルにおけるその変化について研究する手法の一つです。Click-iT® Plusテクノロジーは一連の蛍光標識により新生タンパク質を標識する方法と、パルスチェイスタイプの実験による合成および分解を継時的に分析する手法を提供します。蛍光マーカーで標識されたタンパク質のオートファジー経路を追跡し、LC3B、p62または他の自己消化マーカーと共にマルチプレックス化することで、タンパク質分解プロセスを調べることができます。 Click-iT®テクノロジーはグリコシル化や脂肪酸付加などのタンパク質修飾の研究にも用いることができます。一連の蛍光標識と反応条件の選択により、蛍光タンパク質などの他の細胞検出手法と新生タンパク質ラベルのマルチプレックス化が可能となります。 |
Click-iT® HPG Alexa Fluor®タンパク質合成アッセイキットは、蛍光顕微鏡法やハイコンテントイメージングまたはフローサイトメトリーを用いて迅速かつ高感度で新生タンパク質合成を検出する非毒性、非放射性の方法を実現します。L-ホモプロパルギルグリシン(HPG)はアルキン部分を含むメチオニンのアミノ酸アナログであり、培養細胞に供給するとタンパク質合成の過程でタンパク質に取り込まれます。Alexa Fluor®アジドを添加することで、蛍光アジドとアルキンの化学選択的"Click"反応が生じ、イメージングベースの分析による修飾タンパク質の検出が可能になります。
新生タンパク質合成における違いを空間的または時間的に測定するために、Click-iT® HPG Alexa Fluor® 488タンパク質合成アッセイキットをAlexa Fluor® 594アルキンで標識したClick-iT® AHAと同時に使用することができます。
Click-iT® HPGを用いて、構造的に関連性のない分子によるタンパク質合成の抑制をモニター。 2種類の薬物を3種類の細胞に暴露しClick-iT® HPG Alexa Fluor® 488タンパク質合成アッセイキットを用いて用量依存的なシグナルの減少を測定した。
Click-iT® Plus OPP Alexa Fluor® タンパク質合成アッセイキットは、蛍光顕微鏡法やハイコンテントイメージングまたはフローサイトメトリーを用いて迅速かつ高感度でタンパク質合成を検出する非放射性の方法を実現します。このアッセイでは、メチオニン含有完全培地で新たに翻訳されたタンパク質にO-プロパルギル-プロマイシン(OPP)が効率的に取り込まれ、迅速かつ高特異的な穏やかなClick反応において高輝度かつ光安定性のあるAlexa Fluor®色素により蛍光標識されます。
Click-iT® Plus OPP Alexa Fluor® 647タンパク質合成アッセイキットを新生タンパク質合成の標識に用いました(核内に青い斑点状蛍光として認められました)。 Talin-GFP融合タンパク質は緑色、F-アクチン染色 は赤色に見えます。
疾患、薬物処理、または環境変化により新たに合成されたタンパク質またはタンパク質発現の変化を検出して特徴づけることは、細胞毒性測定において重要なパラメーターです。Click-iT® AHAテクノロジーは、蛍光顕微鏡法、フローサイトメトリー、およびハイコンテントイメージング(HCS)を用いて新生タンパク質合成を検出するための迅速かつ高感度な非毒性、非放射性の方法を実現します。Click-iT® AHAは新生タンパク質の回収に用いることができ、また 電気泳動ゲルおよびウェスタンブロットでのタンパク質分析検出キットとともにも用いることができます。
新生タンパク質をラベル化するClick-iT®ツールには、脂肪酸付加やグリコシル化などの一連の翻訳後修飾を検出するための標識が含まれます。これらのアジド含有生体分子を細胞または動物に供給し、タンパク質の中へアクティブに取り込ませます。
タンパク質およびグリカンをラベル化するためのClick-iT®ツールについてはこちらをご覧下さい。
生体分子には標準的Click 反応の触媒に用いられる銅の量に影響されるものもあるので、検出手法に選択性を提供します。特に、GFPおよびR-PEなどのタンパク質は高銅濃度環境下で蛍光の減少を示し、ファロイジンは結合が損なわれます。Click-iT® Plus検出試薬により、蛍光タンパク質のシグナルを保持するとともに、EdU反応を引き起こすために、銅の濃度を最適化することができます。
Click-iT®検出ツールについてはこちらをご覧下さい
穏やかなClickケミストリープロトコールは細胞エピトープを破壊せず、抗体による検出および一般的な細胞または組織染色方法と互換性があります。
製品 | Click-iT® HPG Alexa Fluor® 488 タンパク質合成用キット | Click-iT® HPG Alexa Fluor® 594 タンパク質合成用キット | Click-iT® AHA Alexa Fluor® 488タンパク質合成HCS アッセイキット | Click-iT® AHA Alexa Fluor® 594タンパク質合成HCS アッセイキット | Click-iT® AHA Alexa Fluor® 647タンパク質合成HCS アッセイキット | ||
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ターゲット | |||||||
リードアウト | |||||||
蛍光標識 | Alexa Fluor® 488 | Alexa Fluor® 594 | Alexa Fluor® 488 | Alexa Fluor® 594 | Alexa Fluor® 647 | ||
標準フィルターセット | FITC | テキサスレッド® | FITC | Texas Red ® | Cy®5 | ||
Ex (励起波長)/Em (蛍光波長) (nm) | 495/519 | 555/565 | 590/617 | 650/668 | 495/519 | ||
シグナル対ノイズ比 | |||||||
光安定性 | |||||||
マルチプレキシング | 抗体による検出や一般の細胞または組織染色法と組み合わせて使用可能 | 蛍光タンパク質からのシグナルを保持、In Vivoでのラベリングに適する。 | |||||
サンプルタイプ | 培養細胞用に最適化 | 非洗浄プロトコール;培地に試薬を直接添加できます。 | |||||
フォーマット | カバースリップ25枚/プレート2枚 | カバースリップ25枚/プレート2枚 | カバースリップ25枚/プレート2枚 | カバースリップ25枚/プレート2枚 | カバースリップ25枚/プレート2枚 | ||
カタログ 番号 | 今すぐ注文する | 製品ページへ | 製品ページへ | 製品ページへ | 製品ページへ |
ターゲット | 名称 | タグ | サイズ | カタログNo. |
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新生タンパク質 | Click-iT® AHA (L-アジドホモアラニン) | アジド | 5 mg | C10102 |
Click-iT® HPG (L-アジドホモアラニン) | アルキン | 5 mg | C10186 | |
OPP (O-プロパルギル-プロマイシン) | アルキン | 5mg | C10459 | |
ファルネシル化タンパク質 | Click-iT® ファルネシルアルコール、アジド | アジド | 5 mg | C10248 |
ゲラニルゲラニル化タンパク質 | Click-iT®ゲラニルゲラニルアルコール | アジド | 5 mg | C10249 |
フコシル化グリカン | Click-iT®フコースアルキン | アルキン | 5 mg | C10264 |
パルミチル酸化タンパク質 | Click-iT® パルミチン酸、アジド | アジド | 1 mg | C10265 |
ミリストイル化タンパク質 | Click-iT® ミリスチン酸、アジド | アジド | 1 mg | C10268 |
O結合糖タンパク質 | Click-iT® GalNAz (テトラアセチル N-アジドアセチルガラクトサミン) | アジド | 1 each | C33365 |
シアリン酸修飾糖タンパク質 | Click-iT® ManNAz (テトラアセチル N-アジドアセチルマノサミン) | アジド | 1 each | C33366 |
O-GlcNAz-modified glycoproteins | Click-iT® GlcNAz (テトラアセチル N-アジドアセチルグルコサミン) | アジド | 1 each | C33367 |
製品 | Click-iT® AHA Alexa Fluor® 488タンパク質合成HCS アッセイキット |
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標的 | 新生タンパク質合成 |
リードアウト | "Click"ケミストリーを用いる蛍光ラベリングのための合成過程で、タンパク質をタグ付けしました。 |
蛍光標識 | Alexa Fluor® 488 |
標準フィルターセット | FITC |
Ex (励起波長)/Em (蛍光放射波長) (nm) | 495/519 |
シグナル/ノイズ | |
光安定性 | |
マルチプレキシング | 抗体による検出および一般的な細胞または組織染色法との互換性 |
サンプルタイプ | HCSアッセイへの最適化 |
フォーマット | プレート2枚 |
カタログ 番号 | ご注文はこちら |
製品 | アジド修飾タンパク質をClickケミストリーにより回収するためのClick-iT®タンパク質エンリッチメントキット |
標的 | 新生タンパク質合成 |
リードアウト | "Click"ケミストリーを用いて回収するための合成過程で、タンパク質をタグ付けしました。 |
フォーマット | スピンカラム |
カタログ 番号 | C10416 |
穏やかなClickケミストリープロトコールは細胞エピトープを破壊せず、抗体による検出および一般的な細胞または組織染色方法と互換性があります。
製品 | Click-iT® HPG Alexa Fluor® 488 タンパク質合成用キット | Click-iT® HPG Alexa Fluor® 594 タンパク質合成用キット | Click-iT® AHA Alexa Fluor® 488タンパク質合成HCS アッセイキット | Click-iT® AHA Alexa Fluor® 594タンパク質合成HCS アッセイキット | Click-iT® AHA Alexa Fluor® 647タンパク質合成HCS アッセイキット | ||
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ターゲット | |||||||
リードアウト | |||||||
蛍光標識 | Alexa Fluor® 488 | Alexa Fluor® 594 | Alexa Fluor® 488 | Alexa Fluor® 594 | Alexa Fluor® 647 | ||
標準フィルターセット | FITC | テキサスレッド® | FITC | Texas Red ® | Cy®5 | ||
Ex (励起波長)/Em (蛍光波長) (nm) | 495/519 | 555/565 | 590/617 | 650/668 | 495/519 | ||
シグナル対ノイズ比 | |||||||
光安定性 | |||||||
マルチプレキシング | 抗体による検出や一般の細胞または組織染色法と組み合わせて使用可能 | 蛍光タンパク質からのシグナルを保持、In Vivoでのラベリングに適する。 | |||||
サンプルタイプ | 培養細胞用に最適化 | 非洗浄プロトコール;培地に試薬を直接添加できます。 | |||||
フォーマット | カバースリップ25枚/プレート2枚 | カバースリップ25枚/プレート2枚 | カバースリップ25枚/プレート2枚 | カバースリップ25枚/プレート2枚 | カバースリップ25枚/プレート2枚 | ||
カタログ 番号 | 今すぐ注文する | 製品ページへ | 製品ページへ | 製品ページへ | 製品ページへ |
ターゲット | 名称 | タグ | サイズ | カタログNo. |
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新生タンパク質 | Click-iT® AHA (L-アジドホモアラニン) | アジド | 5 mg | C10102 |
Click-iT® HPG (L-アジドホモアラニン) | アルキン | 5 mg | C10186 | |
OPP (O-プロパルギル-プロマイシン) | アルキン | 5mg | C10459 | |
ファルネシル化タンパク質 | Click-iT® ファルネシルアルコール、アジド | アジド | 5 mg | C10248 |
ゲラニルゲラニル化タンパク質 | Click-iT®ゲラニルゲラニルアルコール | アジド | 5 mg | C10249 |
フコシル化グリカン | Click-iT®フコースアルキン | アルキン | 5 mg | C10264 |
パルミチル酸化タンパク質 | Click-iT® パルミチン酸、アジド | アジド | 1 mg | C10265 |
ミリストイル化タンパク質 | Click-iT® ミリスチン酸、アジド | アジド | 1 mg | C10268 |
O結合糖タンパク質 | Click-iT® GalNAz (テトラアセチル N-アジドアセチルガラクトサミン) | アジド | 1 each | C33365 |
シアリン酸修飾糖タンパク質 | Click-iT® ManNAz (テトラアセチル N-アジドアセチルマノサミン) | アジド | 1 each | C33366 |
O-GlcNAz-modified glycoproteins | Click-iT® GlcNAz (テトラアセチル N-アジドアセチルグルコサミン) | アジド | 1 each | C33367 |
製品 | Click-iT® AHA Alexa Fluor® 488タンパク質合成HCS アッセイキット |
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標的 | 新生タンパク質合成 |
リードアウト | "Click"ケミストリーを用いる蛍光ラベリングのための合成過程で、タンパク質をタグ付けしました。 |
蛍光標識 | Alexa Fluor® 488 |
標準フィルターセット | FITC |
Ex (励起波長)/Em (蛍光放射波長) (nm) | 495/519 |
シグナル/ノイズ | |
光安定性 | |
マルチプレキシング | 抗体による検出および一般的な細胞または組織染色法との互換性 |
サンプルタイプ | HCSアッセイへの最適化 |
フォーマット | プレート2枚 |
カタログ 番号 | ご注文はこちら |
製品 | アジド修飾タンパク質をClickケミストリーにより回収するためのClick-iT®タンパク質エンリッチメントキット |
標的 | 新生タンパク質合成 |
リードアウト | "Click"ケミストリーを用いて回収するための合成過程で、タンパク質をタグ付けしました。 |
フォーマット | スピンカラム |
カタログ 番号 | C10416 |
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.