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3D培養細胞および組織イメージング用透明化試薬
3D細胞イメージングにより優れた結果を
厚い組織（最大10 mm）や、オルガノイドおよびスフェロイドを含むさまざまな厚さの3D培養細胞のイメージングを行うときには、Invitrogen CytoVista Clearing Reagentsがお勧めです。CytoVista reagentsは、シャープで明るい蛍光イメージング解析のために、蛍光ラベル化組織の透明化、およびマウンティングの用途に至適化された試薬です。実験ニーズに合わせてキット化された試薬と単体の試薬から選んでいただけます。
3D培養細胞および厚い組織において標準的な封入剤がうまく作用しない理由
オルガノイドやスフェロイド、厚い蛍光ラベル化組織を観察する際には、問題が発生することがあります。標準的なイメージング試薬やイメージング技術では、組織や3D培養細胞が不透明で、細胞内部の鮮明な画像を得ることが難しくなる場合があるからです。蛍光標識した厚い組織サンプルは、「透明化」することで、シャープで明るい3Dイメージング解析が可能になります。Invitrogen CytoVista Clearing Reagentsは、最大10 mmの厚さの組織、またさまざまな厚さのスフェロイドとオルガノイドに対して至適化されています。
CytoVista reagentsを使用することで、シャープで明るい3D組織の蛍光イメージング画像を得ることができます。
接着性細胞は染色バッファーですぐに染色できますが、蛍光標識した厚い組織サンプルの3Dイメージング解析には、組織を「透明化」して細胞内部をより鮮明に染色する必要があります。さらに、サンプルの形態や試薬の蛍光感度への影響を最小限に抑えることが理想的です。CytoVistaの3Dイメージング試薬は、このようなニーズを満たし、迅速に透明化を行う機能とマウンティング機能の両方を備えています。
CytoVista clearing reagentsの特長
- 迅速な透明化—厚さ1 mmのサンプルをわずか2時間で、厚さ8 mmのマウス全脳であれば24時間で透明化します。
- サンプル形態への影響を最小限に—3Dイメージング解析におけるサンプルの形態または蛍光物質の明るさと特異性、検出感度に対する影響を最小限に抑えます。
- ワークフローに適合—追加機器や装置を必要とせず、簡単にIHCワークフローに適合が可能です。
- 幅広いプラットフォームに対応—蛍光タンパク質を含む多くの蛍光色素に適合し、標準的な蛍光イメージング装置で利用できます。
- 柔軟性—透明化した組織サンプルや細胞はサンプルの形態や蛍光色素の輝度や特異性への影響を最小限に抑えながら数週間の保存が可能です。
- 可逆的—貴重なサンプルについては、クリアリングを元に戻すことができ、組織を処理してヒストロジー研究に用いるためにセクショニングできます。これにはH&E（hematoxylin and eosin）染色などが含まれます。
CytoVista試薬選択ガイド
| CytoVista 3D Cell Culture Clearing / Staining Kit | CytoVista Tissue Clearing / Staining Kit | |
|---|---|---|
| 用途 | Ready-to-useの固定細胞用のソフトセッティングイメージング試薬 | |
| サンプルタイプ | 厚さ1 mmまでのオルガノイドおよびスフェロイド | 厚さ10 mmまでの組織サンプル |
| 屈折率 | 1.48 | 1.53 |
| キット構成品 |
|
|
| カタログ番号 | V11325 | V11324 |
※出荷および保存温度は、試薬によって異なります。製品ラベルに従って保存してください
CytoVista透明化試薬
| 試薬 | サンプルタイプ | 屈折率 | カタログ番号 | サイズ |
|---|---|---|---|---|
| 3D Cell Culture Clearing Reagent | 厚さ1 mmまでのオルガノイドおよびスフェロイド | 1.48 | V11326 | 10 mL |
| V11315 | 30 mL | |||
| V11316 | 100 mL | |||
| Tissue Clearing Reagent | 厚さ1 mmまでの組織サンプル | 1.50 | V11300 | 30 mL |
| V11301 | 100 mL | |||
| Tissue Clearing Enhancer | 厚さ10 mmまでの組織サンプル | 1.53 | V11302 | 30 mL |
| V11303 | 100 mL | |||
| Tissue Clearing Reagent & Enhancer | 厚さ10 mmまでの組織サンプル | 1.53 | V11304 | 各10 mL |
| V11322 | 各30 mL | |||
| V11323 | 各100 mL |
CytoVistaバッファー
3D培養細胞および組織透明化アプリケーションのイメージギャラリー
スフェロイドのイメージング
図1.CytoVista 3D Cell Culture Clearing/Staining Kitは光散乱を抑え、特にスフェロイドのコアにおいてカウント可能な細胞数を増加させます。SYTOX Green dyeにより染色した核のz-スタック共焦点イメージスライスのモンタージュ。（A）透明化していない微小組織。（B）透明化した微小組織。白枠はZ-プロジェクション。Z-プロジェクションではイメージング時に起こるケラレ（周囲が暗くなる現象）が隠されてしまうため、Z-プロジェクションによる透明化していない微小組織のイメージングは困難です。透明化した微小組織ではケラレは見られず、内部の細胞が可視化されます。
図2.CytoVista 3D Cell Culture Clearing Reagentを使用すると、より鮮明なスフェロイド画像が得られます。CytoVista 3D Cell Culture Clearing Reagentは HepG2スフェロイドを透明化し、光散乱を最小限に抑えます。これにより鮮明な画像が得られ、網羅的な細胞カウントを行うことができます。スフェロイド内部の死細胞を正確にカウントすることにより、より多くの生細胞を解析できます。（A）非透明化および（B）透明化HepG2スフェロイドの共焦点z-スライス。青＝DAPI、緑＝LIVE/DEAD Fixable Green Dead Cell Stain。
スフェロイド内部における細胞増殖
図3.CytoVista 3D Cell Culture Clearing Reagentでスフェロイドを透明化し、細胞を増殖マーカーを用いて観察します。Ki-67およびClick-iT EdU Cell Proliferation Kit for Imaging Alexa Fluor 488 dyeを増殖マーカーとして使用しました。非透明化サンプルでは光散乱の影響が見られ、細胞内部の増殖が観察できませんでしたが、透明化したサンプルではより多くの細胞を解析できました。HeLa細胞のスフェロイドをHoechst 34580（青）、Click-iT EdU Cell Proliferation Kit for Imaging Alexa Fluor 488 dye（緑）およびKi-67 MAb（Alexa Fluor 647コンジュゲート）で染色しました。細胞のイメージング画像は、Thermo Scientificハイコンテントイメージングシステムで取得しました。
Stemonix 3D MicroBrainモデルのハイコンテントスクリーニング動画
Video 1.Prepare detailed, 3D composite videos using CytoVista 3D Cell Culture Clearing/Staining Kit.A Stemonix 3D MicroBrain model, derived from iPSC-derived neural progenitor cells, was imaged used a Thermo Scientific CellInsight CX7 LZR High-Content Analysis Platform.The tissue was cleared, mounted and imaged in CytoVista 3D Cell Culture Clearing/Staining Kit.Invitrogen NeuroTrace Green Fluorescent Nissl Stain was used with a GFAP primary antibody, and a Goat Anti-Rabbit IgG Alexa Fluor Plus 647 secondary antibody..aviファイルは、ImageJを使用して生成しました。
ヒト肺組織の3D、ハイコンテントスクリーニング動画
Video 2.See clear & sharp 3D fluorescent videos images with CytoVista Tissue Clearing/Staining Kit.A 7.0 mm x 5.0 mm X 0.612 mm piece of human lung tissue was labeled with α-SMA, CD31, and DAPI (DAPI=Blue, SMA=Red, CD31=Green) nuclear stain with primary + secondary antibody steps.After labeling, the tissue was cleared and mounted using CytoVista Tissue Clearing/Staining Kit, and imaged with the Thermo Scientific CellInsight CX7 LZR High-Content Analysis Platform.The video shows a sweep through one of fields taken through this tissue using a 10X objective on a CellInsight CX7 LZR confocal system.The human lung tissue was imaged using a 1.53 um Z-step size to achieve cubic voxels.
3D confocal microscopic image of tissue
Video 3.Get beautiful three-dimensional view of tissue with CytoVista Tissue Clearing/Staining Kit.Three-dimensional high content confocal microscopic image showing the anterior view of murine prostate lobe cleared and mounted with CytoVista Tissue Clearing/Staining Kit.Tissue was labeled with E-cadherin (red), Beta-3 tubulin (green) CD31 (white) along with a murine urethra labeled with E-cadherin (red) and CD31 (white) to evaluate.
厚さ1 mmの組織の3Dイメージング
図4.CytoVista 3D Cell Culture Clearing Reagentを用いて厚い組織サンプルを簡単にイメージング。（A）厚さ1 mmのラット脳サンプルを抗パルブアルブミン抗体でラベル。共焦点顕微鏡、10x対物レンズで撮影。（B）PyMT形質移入マウスから得た厚さ1 mmの乳腺腫瘍サンプルを抗Ki-67 FITCコンジュゲートモノクローナル抗体でラベルし、細胞増殖マーカーを評価。共焦点顕微鏡、10x対物レンズで撮影。
マウスの全脳のイメージング
図5.CytoVista Tissue Clearing / Staining Kitを使って、マウス全脳サンプルを透明化し鮮明な画像を取得。
（A）光シート顕微鏡で撮影したパルブアルブミン-tdTomatoトランスジェニックマウス全脳。（B）CytoVista Tissue Clearing / Staining Kitで透明化し、光シート顕微鏡で撮影したマウスの全脳。
リソース
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