Microscopic views of fluorescence fade in cultured cells after 24 and 36 s exposure

蛍光の光退色を防止

不可逆的な光褪色による蛍光の損失は、特に標的分子の量が少ない場合や励起光が高強度または長持続性である場合には、感度の著しい低下につながります。光褪色に関連した機構は、細胞の生存率およびデータの質に負の影響を与える可能性のある、光毒性にも関与しています。

実験サンプルの光褪色を最小限に抑えるために、当社では生細胞と固定化細胞の両方において蛍光物質の光安定性を向上させる、一連の褪色防止剤を開発してきました。当社では、即時イメージング用と長期保存用の選択肢をご提供し、さらに封入および核染色による対比染色を、単一ステップで同時に実施できる試薬もご用意しております。光褪色を抑えることで、経時変化の追跡実験をより長く実施でき、より高感度で定量性の高い蛍光シグナルを得ることができます。

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イメージング実験に適した褪色防止剤の選択方法

 ProLong GlassProLong DiamondProLong Gold
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一般仕様
形状Ready-to-useの硬化マウント剤
屈折率1.52（硬化後）1.47（硬化後）1.47（硬化後）
どのような種類のイメージングが実施できますか？
サンプルタイプ動物細胞／組織（固定）
生細胞イメージング   
固定細胞の即時イメージング   
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが10 µmまで）
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが150 µmまで）
  
どのような種類の顕微鏡対物レンズが最適ですか？ （全ての種類の対物レンズがこれらの試薬に適合します）
油浸対物レンズ
  
グリセロール対応対物レンズ 
水またはドライ対応対物レンズ   
サンプルに含まれている蛍光物質は何ですか?
Alexa Fluor色素
従来の色素
 
蛍光タンパク質
 
封入剤に対比染色を加えますか？
DAPIによる対比染色
SYTOX Deep Redによる対比染色
対比染色なし
 SlowFade GlassSlowFade DiamondSlowFade Gold
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一般仕様
形状Ready-to-useのソフトマウント剤
屈折率1.521.421.42
どのような種類のイメージングが実施できますか？
サンプルタイプ動物細胞／組織（固定）
生細胞イメージング   
固定細胞の即時イメージング
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが10 µmまで）   
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが500 µmまで）
  
どのような種類の顕微鏡対物レンズが最適ですか？（全ての種類の対物レンズがこれらの試薬に適合します）
油浸対物レンズ   
グリセロール対応対物レンズ
水またはドライ対応対物レンズ   
サンプルに含まれている蛍光物質は何ですか?
Alexa Fluor色素
従来の色素
 
蛍光タンパク質
 
封入剤に対比染色を加えますか？
DAPIによる対比染色
SYTOX Deep Redによる対比染色
 
  
対比染色なし
 ProLong Live
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一般仕様
形状100倍濃縮溶液
屈折率1.3
どのような種類のイメージングが実施できますか？
サンプルタイプ動物細胞／組織（生）
生細胞イメージング
固定細胞の即時イメージング 
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが10 µmまで） 
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが150 µmまで） 
どのような種類の顕微鏡対物レンズが最適ですか？（全ての種類の対物レンズがこれらの試薬に適合します）
油浸対物レンズ 
グリセロール対応対物レンズ
水またはドライ対応対物レンズ
サンプルに含まれている蛍光物質は何ですか?
Alexa Fluor色素
従来の色素
蛍光タンパク質
封入剤に対比染色を加えますか？
DAPIによる対比染色
 
SYTOX Deep Redによる対比染色 
対比染色なし
 ProLong Glass
（硬化）		SlowFade Glass
（非硬化）		CytoVista試薬
（非硬化）
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一般的な仕様
形状Ready-to-useの硬化マウント剤

厚さ150 mmまでのサンプルを迅速にイメージングできます		すぐに使用可能な非硬化（ソフトセット）封入剤

厚さ500 mmまでのサンプルを迅速にイメージングできます		すぐに使用可能な非硬化（ソフトセット）試薬

3D細胞培養の即時イメージング用の3D細胞培養洗浄および染色キット（厚さ1 mmまでのオルガノイドおよびスフェロイド）

厚組織の即時イメージング用の組織洗浄および染色キット（最大10 mm ）
屈折率1.52（硬化後）1.521.48（厚さ1 mmまでのオルガノイド／スフェロイド）

1.53（厚さ10 mmまでの組織サンプル）
どのような種類のイメージングが実施できますか？
サンプルタイプ動物細胞／組織（固定）動物細胞／組織（固定）動物細胞／組織（固定）
固定細胞の即時イメージング 
固定細胞の長時間イメージング
  
サンプルの厚さは？
最大10 μm
  
最大150 μm
  
最大500 μm 
 
最大1 mm  
最大10 mm  
どのような種類の顕微鏡対物レンズが最適ですか？（全ての種類の対物レンズがこれらの試薬に適合します）
油浸対物レンズ
グリセロール対応対物レンズ  
サンプルに含まれている蛍光物質は何ですか?
Alexa Fluor色素
従来の色素
蛍光タンパク質
封入剤に対比染色を加えますか？
DAPIによる対比染色
 
SYTOX Deep Redによる対比染色
  
対比染色なし
 Image-iT Plant Clearing and Mounting Reagents for Imaging
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一般的な仕様
形状イメージング用の植物組織の洗浄およびマウントにReady-to-use な試薬
屈折率1.45（クリアリングおよびソフトセット取り付けオプション）

1.415（ハードセット取り付けオプション）
どのような種類のイメージングが実施できますか？
サンプルタイプ植物細胞／組織切片／組織全体（固定）
生細胞イメージング 
固定細胞イメージング
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが10 µmまで）
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが150 µmまで）
どのような種類の顕微鏡対物レンズが最適ですか？（全ての種類の対物レンズがこれらの試薬に適合します）
油浸対物レンズ 
グリセロール対応対物レンズ
水またはドライ対応対物レンズ 
サンプルに含まれている蛍光物質は何ですか?
もっとも一般的な組織学的染色
蛍光タンパク質 
封入剤に対比染色を加えますか？
DAPIによる対比染色 
SYTOX Deep Redによる対比染色 
対比染色なし

褪色防止剤、封入剤、または洗浄剤を使用するための技術と方法について説明します

硬化（ハードタイプ）
 ProLong GlassProLong DiamondProLong Gold
 詳細を見る
一般仕様
形状Ready-to-useの硬化マウント剤
屈折率1.52（硬化後）1.47（硬化後）1.47（硬化後）
どのような種類のイメージングが実施できますか？
サンプルタイプ動物細胞／組織（固定）
生細胞イメージング   
固定細胞の即時イメージング   
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが10 µmまで）
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが150 µmまで）
  
どのような種類の顕微鏡対物レンズが最適ですか？ （全ての種類の対物レンズがこれらの試薬に適合します）
油浸対物レンズ
  
グリセロール対応対物レンズ 
水またはドライ対応対物レンズ   
サンプルに含まれている蛍光物質は何ですか?
Alexa Fluor色素
従来の色素
 
蛍光タンパク質
 
封入剤に対比染色を加えますか？
DAPIによる対比染色
SYTOX Deep Redによる対比染色
対比染色なし
非硬化（ソフトタイプ）
 SlowFade GlassSlowFade DiamondSlowFade Gold
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一般仕様
形状Ready-to-useのソフトマウント剤
屈折率1.521.421.42
どのような種類のイメージングが実施できますか？
サンプルタイプ動物細胞／組織（固定）
生細胞イメージング   
固定細胞の即時イメージング
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが10 µmまで）   
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが500 µmまで）
  
どのような種類の顕微鏡対物レンズが最適ですか？（全ての種類の対物レンズがこれらの試薬に適合します）
油浸対物レンズ   
グリセロール対応対物レンズ
水またはドライ対応対物レンズ   
サンプルに含まれている蛍光物質は何ですか?
Alexa Fluor色素
従来の色素
 
蛍光タンパク質
 
封入剤に対比染色を加えますか？
DAPIによる対比染色
SYTOX Deep Redによる対比染色
 
  
対比染色なし
生細胞
 ProLong Live
 詳細を見る
一般仕様
形状100倍濃縮溶液
屈折率1.3
どのような種類のイメージングが実施できますか？
サンプルタイプ動物細胞／組織（生）
生細胞イメージング
固定細胞の即時イメージング 
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが10 µmまで） 
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが150 µmまで） 
どのような種類の顕微鏡対物レンズが最適ですか？（全ての種類の対物レンズがこれらの試薬に適合します）
油浸対物レンズ 
グリセロール対応対物レンズ
水またはドライ対応対物レンズ
サンプルに含まれている蛍光物質は何ですか?
Alexa Fluor色素
従来の色素
蛍光タンパク質
封入剤に対比染色を加えますか？
DAPIによる対比染色
 
SYTOX Deep Redによる対比染色 
対比染色なし
3D細胞培養および厚組織
 ProLong Glass
（硬化）		SlowFade Glass
（非硬化）		CytoVista試薬
（非硬化）
 詳細を見る詳細を見る詳細を見る
一般的な仕様
形状Ready-to-useの硬化マウント剤

厚さ150 mmまでのサンプルを迅速にイメージングできます		すぐに使用可能な非硬化（ソフトセット）封入剤

厚さ500 mmまでのサンプルを迅速にイメージングできます		すぐに使用可能な非硬化（ソフトセット）試薬

3D細胞培養の即時イメージング用の3D細胞培養洗浄および染色キット（厚さ1 mmまでのオルガノイドおよびスフェロイド）

厚組織の即時イメージング用の組織洗浄および染色キット（最大10 mm ）
屈折率1.52（硬化後）1.521.48（厚さ1 mmまでのオルガノイド／スフェロイド）

1.53（厚さ10 mmまでの組織サンプル）
どのような種類のイメージングが実施できますか？
サンプルタイプ動物細胞／組織（固定）動物細胞／組織（固定）動物細胞／組織（固定）
固定細胞の即時イメージング 
固定細胞の長時間イメージング
  
サンプルの厚さは？
最大10 μm
  
最大150 μm
  
最大500 μm 
 
最大1 mm  
最大10 mm  
どのような種類の顕微鏡対物レンズが最適ですか？（全ての種類の対物レンズがこれらの試薬に適合します）
油浸対物レンズ
グリセロール対応対物レンズ  
サンプルに含まれている蛍光物質は何ですか?
Alexa Fluor色素
従来の色素
蛍光タンパク質
封入剤に対比染色を加えますか？
DAPIによる対比染色
 
SYTOX Deep Redによる対比染色
  
対比染色なし
植物細胞
 Image-iT Plant Clearing and Mounting Reagents for Imaging
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一般的な仕様
形状イメージング用の植物組織の洗浄およびマウントにReady-to-use な試薬
屈折率1.45（クリアリングおよびソフトセット取り付けオプション）

1.415（ハードセット取り付けオプション）
どのような種類のイメージングが実施できますか？
サンプルタイプ植物細胞／組織切片／組織全体（固定）
生細胞イメージング 
固定細胞イメージング
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが10 µmまで）
固定細胞の長期イメージング（サンプルの厚さが150 µmまで）
どのような種類の顕微鏡対物レンズが最適ですか？（全ての種類の対物レンズがこれらの試薬に適合します）
油浸対物レンズ 
グリセロール対応対物レンズ
水またはドライ対応対物レンズ 
サンプルに含まれている蛍光物質は何ですか?
もっとも一般的な組織学的染色
蛍光タンパク質 
封入剤に対比染色を加えますか？
DAPIによる対比染色 
SYTOX Deep Redによる対比染色 
対比染色なし

褪色防止剤、封入剤、または洗浄剤を使用するための技術と方法について説明します

光褪色とは何ですか？

光褪色とは、蛍光シグナルの分解です。光励起された蛍光色素が酸素に曝露されると遊離ラジカルが生成され、シグナル強度が低下します。蛍光色素分子の光への暴露の強度と時間を減らすことで、光褪色を抑えることができます。褪色防止剤は光褪色効果を低減することで、より長いシグナルを可能にしました。

光褪色を防ぐための褪色防止剤の使用方法

Illustration of microscope slide with sample

ステップ1.スライドまたはカバースリップにサンプルを置きます。このステップの前または後にすべての染色を完了してください。

 

 

Illustration of microscope slide with antifade applied

ステップ2.サンプルの上に褪色防止用封入剤を塗布します。ハードマウントの場合は、一晩中空気中で硬化させてください。

 

 

Illustration of microscope slide with glycerol applied (hard-setting mountants only)

ステップ3.硬化性封入剤を使用する場合のみ：マウントされたサンプルに100%のグリセロールを1滴加え、カバースリップを適用します。グリセロールはカバースリップの接着に役立ちます。ProLong Glass褪色防止用封入剤は、24時間で最終屈折率1.52まで完全に硬化させます。

試料をスライドに取り付ける方法に関するプロトコルと情報をご覧ください

ソフトタイプとハードタイプの封入剤の違いは何ですか？

封入剤にゲル化剤が含まれているかどうかによって、ソフトまたはハードタイプとなっております。ソフトセット封入剤には緩衝グリセロール溶液が含まれており、スライドを直ちにイメージングする必要がある場合に使用します。ソフトセット封入剤は洗浄可能で、サンプルを再調整したり、シングルセルRNAシーケンシングやPCRなどのダウンストリーム目的で使用することができます。硬化マウント剤には、カバースリップをスライドに恒久的に固定するポリマーが含まれています。これは、サンプルの長期保存に使用されます。

褪色防止剤およびマウントの注文情報

ProLong Glass Antifade Mountants
ProLong Diamond Antifade Mountants
ProLong Gold Antifade Mountants
Slowfade Antifade Mountants
CytoVista Tissue Clearing Reagent

ProLong褪色防止用封入剤およびSlowfade褪色防止用封入剤でマウントしたサンプルの例

Slowfade褪色防止用封入剤の例

Slowfade Antifade Mountant Example
図1.100ミクロン厚の組織サンプルをSlowFade Glassで染色およびマウントし、画像をZeiss LSM 710共焦点顕微鏡で取得しました。左）ウサギ抗GFAPでGFAP用に免疫染色された、Alexa Fluor 594 Plusヤギ抗ウサギを使用して検出された凍結保存ラット脳組織切片。核はDAPIで対比染色しました。63X油浸対物レンズを使用し、得られた画像は最大輝度投影として表されます。右）マウス抗ヒストンH3およびウサギ抗パンアクチンでプローブしたマウス乳房組織切片。ターゲットをAlexa Fluor 488ヤギ抗マウス（製品番号A11029）および Alexa Fluor 594ヤギ抗ラビット（カタログ番号A11012）二次抗体コンジュゲートを使用して検出しました。組織をSYTOX DR （カタログ番号S11381）で対比染色しました。40X油浸対物レンズを使用し、得られた画像は最大輝度投影として表示しました。

ProLong褪色防止用封入剤の例

ProLong Antifade Mountant Example
図2.クライオ保存ラット脳切片（厚さ100 µm）は、チューブリン（赤色）をマウス抗Beta3-Tubulin（カタログ番号MA1-118）およびGFAP（黄色）をウサギ抗GFAP（カタログ番号OPA1-06100)で染色しました。ターゲットをAlexa Fluor Plus 594ヤギ抗マウス（カタログ番号A-11032）およびAlexa Fluor Plus 647ヤギ抗ラビット（カタログ番号 A-32733）で検出しました。核（シアン）をDAPI（左、カタログ番号D1306）で染色しました。スライドは ProLong Glass Antifade Mountantでマウントし、 Zeiss LSM 710共焦点顕微鏡で63×油浸レンズを使用してイメージングしました。

Publication showing stripping and FISH reprobing after imaging  with SlowFade Gold Antifade Mountant (Cat.No. S36936)

  •  Sountoulidis A, Liontos A, Nguyen HP, Firsova AB, Fysikopoulos A, Qian X, Seeger W, Sundström E, Nilsson M, Samakovlis C. SCRINSHOT enables spatial mapping of cell states in tissue sections with single-cell resolution.PLoS Biol.2020 Nov 20;18(11):e3000675.PMID: 33216742.

イメージングプロトコルハンドブック

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