Study the Tumor Microenvironment With Flow Cytometry

腫瘍微小環境は一般に癌細胞、間質細胞、免疫細胞、内皮細胞、非病原性細胞を含む複数の細胞タイプで構成されています。これらの細胞が組み合わさって、直接的な細胞間接触のほか分泌タンパク質および低分子化合物を介して複雑で動的な系が形成されます。このような細胞および化学的因子は、がんの進行、転移および宿主免疫からの回避に関与します。したがって、腫瘍微小環境を理解することは、多くの腫瘍が示す治療的介入に対する抵抗を克服するための鍵となります。

どのようにワークするか腫瘍微小環境における免疫監視

腫瘍細胞の変異

1.腫瘍細胞の変異により腫瘍由来抗原(TDA)が形成され、免疫原性細胞死に伴って放出され、樹状細胞などの抗原提示細胞(APC)により捕捉されます

腫瘍細胞の変異

2.APC は TDA をナイーブ T 細胞に提示することで T 細胞がプライミングされ活性化され、癌細胞に対する免疫応答が開始されます。

腫瘍細胞の変異

3.プライミングされ活性化されたエフェクター T 細胞は腫瘍組織に浸潤します。T 細胞は TDA 提示悪性細胞を認識し、結合して細胞死させます。

腫瘍細胞の変異

4.腫瘍は、免疫チェックポイントタンパク質をアップレギュレートするか制御性 T 細胞(Treg)を動員して T 細胞を不活性化することで T 細胞を枯渇させることができます。


腫瘍微小環境で一般に見られる細胞タイプ

Cell types typically found in the tumor microenvironment

各免疫細胞には腫瘍細胞の認識および排除に特化した機能があります。ラボで免疫細胞の特定を行うには、細胞表面マーカーのわずかな違いを識別するために、複雑なマルチカラー免疫表現型解析実験がしばしば必要となります。機械的分散による(酵素的分解はできる限り制限します)組織調製法は、一般に抗原エピトープの保存に優れていますが、このような調製ではフローサイトメトリー中に目詰まりが生じることがあります。Attune NxT フローサイトメーターは非加圧ベースの装置で、目詰まりを最小限に抑えてクルードな固形腫瘍サンプルを解析できます。


一般的な固形腫瘍サンプル調製および解析のワークフロー

腫瘍サンプルを採取

腫瘍サンプルを採取

腫瘍細胞を分散

FBS などのタンパク質含有培地中で滅菌したカミソリ刃を用いて機械的に分散した腫瘍細胞

腫瘍サンプルを採取
PBS で細胞を洗います

PBS で細胞を洗います

適切なメッシュフィルターに通します

適切なメッシュフィルターに通します

フローサイトメーターで解析します

Attune NxT フローサイトメーターなどの目詰まり防止機能があるフローサイトメーターで解析します

リソース

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