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フローサイトメトリーによる免疫チェックポイント分子の検出
免疫チェックポイント分子は、自己を識別し免疫応答を制御します。腫瘍細胞は、特に T 細胞または NK 細胞の活性を抑制することで、特定の免疫チェックポイント経路を生き延びるためのツールとして利用します。最近の治療法の開発は、腫瘍微小環境における免疫監視を増強させる方法としてチェックポイント分子をターゲットとしています。
免疫細胞とチェックポイント分子の相互作用をフローサイトメトリーで調べましょう。膨大な抗体およびキットの一覧から、炎症および免疫応答のバイオマーカーを産生する細胞を定量します。
どのようにワークするか：腫瘍微小環境中の免疫細胞を不活性化
免疫チェックポイント フローサイトメトリーのワークフロー
免疫チェックポイント経路における既知のターゲット
抗体は免疫チェックポイント分子の細胞発現を調べるひとつのツールです。細胞間の相互作用を理解するために、細胞表面受容体とシグナル分子間の相互作用を調べます。
| Immune cell | Effector cell | Function |
|---|---|---|
| Cytotoxic T-lymphocyte– associated antigen 4 (CTLA-4) | T cells | Tumor cells use the CTLA-4 pathway to decrease T cell activation and ability to proliferate into memory T cells |
| Programed cell death protein (PD-1) | T cells | PD-1 expression on T cell indicates exhaustion and inability to perform immune responses |
| OX40 | T cells | Activating OX40 stimulates T cell differentiation and cytolytic function leading to enhanced anti-tumor immunity |
| Glucocorticoid-induced TNFR-related (GITR) | T cells | GITR activation enhances cell reproduction and generate antitumor activity |
| Indoleamine-2,3 dioxygenase (IDO) | Tregs | Tumor cells can upregulate IDO activity through the breakdown tryptophan in order to suppress T cell function |
| CD73 | Tregs | Tumor cells use CD73 to suppress T cell activity with the production of adenosine |
| Lymphocyte-activation gene (LAG) | T cells and Tregs | LAG expression leads to T cell exhaustion and inhibits long-term immune response development |
| CD137 | T cells and NK cells | CD137 stimulates NK cells and T cells for anti- tumor response along with immune memory |
| SLAM family member 7 (SLAMF7) | NK cells | SLAM7 activation stimulates NK cells and other immune cells in the development of long-term immunity |
| Killer-cell immunoglobulin- like receptors (KIR) | NK cells | Tumor cells evade NK cells with KIR expression |
| Programed cell death protein ligand (PD-L1) | Tumor cells | PD-L1 |
フローサイトメトリーで炎症を調べます
器官または組織を細切し、酵素で一晩分解
サンプル液の希釈
Attune NxT フローサイトメーターで免疫表現型解析を行います
チェックポイント阻害物質は、腸または心臓を含む他の器官にオフターゲット炎症を引き起こすことがあります。器官または組織から得た未精製細胞懸濁液を希釈し、Attune NxT フローサイトメーターで数百万の細胞を迅速に解析します。prostaglandin、CXCL13、および IFN-γ を含む一般的な炎症マーカーを解析します。
T 細胞活性をフローサイトメトリーで測定します。
チェックポイント阻害物質の目的は、T 細胞枯渇を防ぐことです。腫瘍サンプルでサイトカイン産生を検出することで免疫細胞の機能を評価します。T 細胞および NK 細胞はインターフェロンガンマ（IFN-γ）を産生して、炎症状態または宿主防御下で免疫応答を発揮します。腫瘍サンプル中で IFN-γ を産生する CD8+ または CD4+ T 細胞をマルチパラメーターフローサイトメトリーで定量します。
CD4+ T 細胞および NK 細胞サブセット中の IFN-γ を検出します。CD4+ T 細胞のマイナーサブセットおよび NK1.1+ 細胞のメジャーなサブセット内の IFN-γ（クローン XMG1.2）を確認するために、刺激後のマウス脾細胞を細胞内染色します。Attune NxT フローサイトメーターを使用してデータを得ます。