形質転換が予期していたほど効率的でないことには、多くの理由があります。以下の表の回答がお役に立たない場合、Invitrogenのテクニカルサポートにお問い合わせください。

 

考えられる原因解決策
DNA中の不純物 ケミカルコンピテントセルの場合、フェノール、タンパク質、界面活性剤、エタノールをDNA溶液から取り除きます。エレクトロコンピテントセルの場合、塩とバッファーがエレクトロポレーションを著しく阻害し、アーク放電のリスクを増加させるため、プラスミドDNAをエタノール沈殿により精製します。さらに、滅菌水または0.5X TE（5 mM Tris-HCl、0.5 mM EDTA）にDNAを溶解します。
過剰なDNA量、過剰な液量100 µlのケミカルコンピテントセルあたり、1から10 ngのDNAを添加し、添加するDNAの容量は5 µlを超えないようにします。Subcloning Efficiency™セルでは、1～3 µlのDNA溶液を50 µlのコンピテントセルに添加します。ElectroMAX™セルでは、1 µl（1～50 ng）のDNA溶液を20～25 µlのセルに添加します。
ライゲーション反応液による形質転換の抑制One Shot®、MAX Efficiency®、Library Efficiency®、およびSubcloning Efficiency™セルの場合、ライゲーション反応混合液をコンピテントセルに加える前に、10 mM Tris-HCl（pH 7.5）、1 mM EDTA溶液で5倍に希釈します。
抗生物質耐性の不十分な発現-80°Cにて保管してください。Invitrogenのエレクトロコンピテントおよびケミカルコンピテントセルは2年間保存できます。細胞を液体窒素に保存しないでください。凍結融解の繰り返しはできるだけ避けてください。未使用の細胞は分注して、再凍結してください。それでも形質転換効率は低下することがあります。
コンピテントセルの不適切な取扱い氷上でコンピテントセルを融解し、直ちに使用してください。ボルテックスはしないでください。
ケミカルコンピテントセルにおける不適切な熱ショック処理条件One Shot®、MAX Efficiency®、およびLibrary Efficiency®セルの場合、振盪せずに42°Cで45秒間インキュベートします。これらの条件は、丸底のポリプロピレン製チューブ（17～100 mm）およびコンピテントセル100 µlに対して最適化されたものです。Subcloning Efficiency™セルでは、1.5 mLの微量遠心チューブおよび50 µlのセルを用いて、37°Cで20秒間インキュベートします。Stbl2™セルでは、42°Cで、45秒間ではなく25秒間インキュベートします。
  • セルのチューブまたはボリュームが変更される場合、熱ショック条件を最適にする必要があります。
不適切なエレクトロポレーション条件それぞれのエレクトロコンピテントセルにあった条件で、16 kV/cmの電流を流すことができるデバイスを使用してください。
細胞の成長が遅い、もしくは成長しない37°Cではなく30°Cで細胞を培養する場合、回復時間を少なくとも90分に延長し、形質転換したコロニーの培養時間も長くします。
過剰な増殖（選択がほとんどまたは全くできていない）正しい抗生物質を正しい濃度で使用していることを確認してください。製品マニュアルで推奨している使用方法を参照してください。フレッシュな抗生物質の使用-抗生物質の有効期限が切れていないことを確認します。

 

形質転換に関連する製品

 

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.